黃志遠(yuǎn)

廣東省佛山市第二人民醫(yī)院藥劑科，廣東佛山528000

黃芪多糖對大鼠實驗性胃潰瘍的影響

黃志遠(yuǎn)

廣東省佛山市第二人民醫(yī)院藥劑科，廣東佛山528000

目的觀察黃芪多糖對大鼠實驗性胃潰瘍的影響。方法SPF級Wistar成年雄性大鼠48只，隨機分成正常組，模型組，黃芪多糖高、中、低劑量組，陽性對照（雷尼替丁）組，每組各8只。采用乙酸法制備胃潰瘍模型。治療2周后，觀察大鼠乙酸性胃潰瘍面積（GUA）及血清超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）水平的變化。結(jié)果正常組，模型組，黃芪多糖高、中、低劑量組及雷尼替丁組的GUA分別為：0、（9.06±2.65）、（1.91±0.19）、（2.54± 0.27）、（3.85±0.19）、（2.37±0.31）mm2；相應(yīng)的SOD活性分別為：（138.19±17.92）、（88.69±13.78）、（128.22±19.30）、（118.96±14.78）、（102.68±22.52）、（109.36±14.28）U/mL；相應(yīng)的MDA水平分別為：（8.51±1.10）、（14.17±1.55）、（9.97±1.44）、（11.17±1.29）、（12.79±1.39）、（11.57±1.01）nmol/mL。與正常組比較，模型組血清SOD活性顯著降低（P＜0.01），而MDA水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，黃芪多糖高、中劑量組GUA顯著縮?。≒＜0.01），血清SOD活性顯著升高（P＜0.01），MDA水平顯著降低（P＜0.01）；與雷尼替丁組比較，黃芪多糖高劑量組GUA顯著縮?。≒＜0.05），血清SOD活性顯著升高（P＜0.05），MDA水平顯著降低（P＜0.05）；與黃芪多糖低劑量組比較，高、中劑量組GUA顯著縮?。≒＜0.01）。結(jié)論黃芪多糖對大鼠乙酸性胃潰瘍具有良好的治療作用，以高劑量為佳，其機制可能與抑制自由基對胃黏膜的氧化損傷有關(guān)。

黃芪多糖；胃潰瘍；超氧化物歧化酶；丙二醛

黃芪，別名綿芪、綿黃芪，為豆科植物膜莢黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.或蒙古黃芪Astragalus mongholicus Bge.的干燥根，味甘，性溫，歸脾、肺經(jīng)，生于坡灌叢及旱坡砂質(zhì)壤土地區(qū)，分布于黑龍江、吉林、遼寧、河北、山西、內(nèi)蒙古、陜西、甘肅、寧夏、青海、山東、四川和西藏等省自治區(qū)。黃芪具有補氣固表、升陽舉陷、利水消腫和托瘡生肌等功效。黃芪味甘能補，性溫能升，為補氣升陽的要藥。黃芪主要含有黃芪多糖、黃酮類、皂苷類、氨基酸、蛋白質(zhì)、生物堿、微量元素等多種生物活性物成分，其中黃芪多糖是黃芪藥理作用的主要藥效成分。黃芪多糖具有增強機體的免疫功能，調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝功能，提高免疫細(xì)胞的免疫活性，抗細(xì)胞衰老，調(diào)節(jié)血糖，抗?jié)?，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等作用［1-2］。此外，抗氧化也是黃芪多糖的重要藥理作用［3-4］。本文探討黃芪多糖對大鼠實驗性胃潰瘍的治療作用及其對血清超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性及丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平的影響。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1藥品黃芪藥材（廣東天泰藥業(yè)有限公司中藥飲片廠，批號：140803），經(jīng)鑒定符合2010年版《中國藥典》的要求。鹽酸雷尼替丁膠囊（佛山手心制藥有限公司，批號：1412602）。

1.1.2試劑與儀器分析純冰醋酸（廣東省光華化學(xué)廠有限公司）；SOD、MDA試劑盒（南京建成生物工程研究所）。游標(biāo)卡尺（上海精密儀器儀表有限公司）；2-16PK高速冷凍離心機（德國Sigma公司）；DK-S22恒溫水浴鍋（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）；722分光光度計（上海光學(xué)儀器廠）。

1.1.3動物SPF級Wistar健康成年雄性大鼠48只，平均體重（200±20）g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（粵）2008-0002。實驗動物中心SPF實驗室條件嚴(yán)格控制，溫度20～25℃，日溫度差≤3℃，濕度40%～50%，空氣清潔度10 000級，14 h黑暗，人工光照照明（8∶00～18∶00）。飼養(yǎng)期給予SPF鼠飼料，添加足量飼料，飲用蒸餾水。

1.2方法

1.2.1黃芪多糖的提取及含量測定取黃芪，以10倍水量煎煮3次，過濾，取濾液，合并煎煮液，上X-5樹脂柱，收集流出液并濃縮，加95%乙醇至乙醇占總重量的70%，離心后棄去上清液，沉淀用蒸餾水溶解，加液體體積4%的三氯乙酸，離心后取上清液，再次加95%乙醇至乙醇占總重量的70%，離心后取沉淀，按照95%乙醇→丙酮→乙醚的順序洗滌，得黃芪多糖。采用苯酚-硫酸法測定其含量，以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，用紫外分光光度計于490 nm處測定其吸光度，測得其含量達(dá)41%［5］。

1.2.2供試液制備取黃芪多糖適量，用蒸餾水配成濃度為8、4、2 mg/mL的溶液，作為多糖供試液。取鹽酸雷尼替丁膠囊，除去膠囊，內(nèi)容物研磨后，加蒸餾水配成3 mg/mL混懸液。以上藥液置冰箱低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3動物分組與造模大鼠完全隨機分為6組：正常組，模型組，黃芪多糖高、中、低劑量組，陽性對照組（雷尼替丁組），每組各8只。除正常組外，其他大鼠參照文獻(xiàn)［6］方法制備大鼠乙酸性潰瘍模型。造模前大鼠禁食不禁水24 h，按3.5 mL/kg劑量，腹腔注射10%水合氯醛對大鼠進(jìn)行麻醉，中上腹部備皮、消毒、鋪洞巾，沿劍突下腹中線剪一個2.0 cm左右縱切口，暴露胃部，將浸有冰醋酸且直徑5 mm的圓形濾紙貼于胃竇前壁漿膜面上，避開血管，接觸30 s，連續(xù)2次。用棉簽吸干冰醋酸，生理鹽水沖洗腹腔，還納鼠胃，逐層縫合切口、消毒；術(shù)后大鼠給予正常飲食。

1.2.4給藥造模3 d后開始灌胃給藥，10 mL/（kg·次），1次/d，連續(xù)給藥2周。其中正常組、模型組給予生理鹽水；黃芪多糖高、中、低劑量組分別給予濃度為8、4、2 mg/mL的黃芪多糖；雷尼替丁組給予濃度為3 mg/mL的鹽酸雷尼替丁混懸液。

1.2.5指標(biāo)觀察與測定大鼠末次給藥后，禁食不禁水24 h，乙醚麻醉，打開腹腔，腹主動脈取血4 mL，以轉(zhuǎn)速3000 r/min，低溫離心10 min，分離血清，按試劑盒方法，測定血清SOD活性及MDA水平。結(jié)扎賁門，取胃，沿胃大彎剪開，洗去胃內(nèi)容物，展開于平板上，用游標(biāo)卡尺測量每個潰瘍的最大長徑和最大寬徑，將最大長徑和最大寬徑相乘作為胃潰瘍面積（gastric ulcer area，GUA），如有多個潰瘍，潰瘍面積合并計算。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，正態(tài)分布計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠GUA比較

與模型組比較，黃芪多糖高、中、低劑量組，雷尼替丁組的GUA顯著縮?。≒＜0.01）。與雷尼替丁組比較，黃芪多糖高劑量組的GUA縮?。≒＜0.05），黃芪多糖中劑量組的GUA差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與黃芪多糖低劑量組比較，黃芪多糖高、中劑量組及雷尼替丁組的GUA顯著縮?。≒＜0.01）。表明高劑量的黃芪多糖對大鼠乙酸性胃潰瘍的療效優(yōu)于雷尼替丁，高、中劑量優(yōu)于低劑量。見表1。

表1　各組大鼠GUA比較

2.2各組大鼠血清SOD活性及MDA含量比較

與正常組比較，模型組大鼠血清SOD活性顯著降低（P＜0.01），MDA水平顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，黃芪多糖高、中劑量組及雷尼替丁組SOD活性顯著升高（P＜0.01或P＜0.05），而黃芪多糖高、中、低劑量組及雷尼替丁組MDA水平顯著降低（P＜0.01或P＜0.05）。黃芪多糖高劑量組的SOD活性顯著高于雷尼替丁組（P＜0.05），而MDA水平則顯著低于雷尼替丁組（P＜0.05）。表明高、中劑量的黃芪多糖可提高乙酸性胃潰瘍大鼠的抗氧化能力。見表2。

表2　各組大鼠血清SOD活性及MDA含量比較（±s）

表2　各組大鼠血清SOD活性及MDA含量比較（±s）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05、△△P＜0.01；與雷尼替丁組比較，▲P＜0.05；SOD：超氧化物歧化酶；MDA：丙二醛

正常組模型組黃芪多糖高劑量組黃芪多糖中劑量組黃芪多糖低劑量組雷尼替丁組F值P值8 8 8 8 8 8 138.19±17.92 88.69±13.78**128.22±19.30△△▲118.96±14.78△△102.68±22.52 109.36±14.28△8.481 18.632 8.51±1.10 14.17±1.55**9.97±1.44△△▲11.17±1.29△△12.79±1.39△11.57±1.01△△0.000 0.000組別只數(shù)SOD（U/mL）MDA（nmol/mL）

3　討論

胃潰瘍是臨床常見的消化系統(tǒng)疾病，常反復(fù)發(fā)作，臨床表現(xiàn)為噯氣、反酸、饑餓不適、中上腹脹悶、疼痛等，可發(fā)生出血、穿孔、幽門梗阻，甚至癌變等并發(fā)癥。胃潰瘍病因復(fù)雜，是綜合因素的結(jié)果，它與遺傳、精神、飲食、化學(xué)、感染、環(huán)境等因素相關(guān)。目前認(rèn)為，胃潰瘍的形成是胃黏膜的攻擊因子與防御因子失衡所致［7］。攻擊因子包括胃酸、胃蛋白酶、幽門螺桿菌、非甾體抗炎藥等；防御因子包括胃黏膜、胃黏液、碳酸氫鹽等。其中胃黏膜在防止胃潰瘍的發(fā)生中起重要的作用。胃黏膜受化學(xué)刺激出現(xiàn)急性損傷時，可產(chǎn)生大量的氧自由基，對胃黏膜造成氧化損傷，促進(jìn)胃潰瘍發(fā)生［8］，因此氧自由基也是胃潰瘍形成的重要攻擊因子。氧自由基損傷胃黏膜的主要機制［9］：①破壞胃黏膜細(xì)胞膜系統(tǒng)；②與細(xì)胞RNA、DNA堿基交聯(lián)，產(chǎn)生細(xì)胞毒作用；③破壞胃黏膜上皮間質(zhì)的透明質(zhì)酸和膠原纖維網(wǎng)。

SOD是體內(nèi)抑制和防御自由基損傷的主要抗氧化酶，具有消除氧自由基、維持氧化與抗氧化系統(tǒng)平衡的作用，其活力反映了機體清除自由基的能力；因此，SOD可防止胃黏膜受氧化損傷，是胃黏膜的保護(hù)因子。胃黏膜受損時產(chǎn)生大量氧自由基，SOD活性下降，引發(fā)氧化應(yīng)激系列反應(yīng)，促使?jié)冃纬桑?0］。有研究發(fā)現(xiàn)，消化性潰瘍患者胃黏膜中SOD活性比健康人顯著降低［11］。MDA是氧自由基氧化過程中產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化物，其水平間接反映了氧自由基對胃黏膜的損傷程度［12］。

隨著H2-受體拮抗劑、質(zhì)子泵抑制劑以及幽門螺桿菌根除方案在臨床中的應(yīng)用，大部分胃潰瘍可達(dá)到近期治愈的效果，治愈率提高［13-15］。但潰瘍愈合后容易復(fù)發(fā)，相關(guān)文獻(xiàn)表明，30%～50%的潰瘍病在治愈后一年內(nèi)復(fù)發(fā)。甚至部分患者服用西藥后病情并無明顯改善。中藥治療消化性潰瘍在遠(yuǎn)期療效、預(yù)防復(fù)發(fā)、減少不良反應(yīng)等方面具有較大優(yōu)勢［16-17］。胃潰瘍屬中醫(yī)“胃脘痛”“嘈雜”“吞酸”等范疇，中醫(yī)理論認(rèn)為，本病多由感受外邪、飲食失節(jié)、情志內(nèi)傷、勞倦過度等因素導(dǎo)致脾胃虛弱、肝胃不和、升降失常而致病。胃潰瘍的病位在胃，與肝脾功能失調(diào)密切相關(guān)，臨床多表現(xiàn)為虛實夾雜的證候［18-19］。脾胃虛弱是胃潰瘍發(fā)生的根本，脾虛不僅是潰瘍發(fā)病與轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵，也是潰瘍愈合與復(fù)發(fā)的關(guān)鍵，故健脾益氣法可提高潰瘍愈合質(zhì)量，以減少復(fù)發(fā)。研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用具有健脾益氣溫中作用的黃芪建中湯等方劑治療消化性潰瘍，復(fù)發(fā)率較西藥組明顯降低［16］。黃芪是黃芪建中湯的君藥，具有補氣健脾、托瘡生肌、升陽舉陷、利水消腫等功效，而黃芪多糖是黃芪的主要藥效成分，本研究觀察了黃芪多糖對大鼠實驗性胃潰瘍的療效及對其抗氧化能力的影響。

大鼠乙酸性胃潰瘍模型主要由冰乙酸灼傷胃局部組織，使胃黏膜的防御屏障受損，引起微循環(huán)障礙，該模型的胃潰瘍形狀、組織學(xué)特征及愈合和復(fù)發(fā)過程均類似人類慢性胃潰瘍，廣泛用于抗胃潰瘍藥物的研究［20-21］。本實驗采用乙酸性胃潰瘍模型，實驗結(jié)果顯示，模型組大鼠血清SOD活性較正常組顯著降低，而血清MDA水平顯著升高，表明乙酸灼傷過程中產(chǎn)生大量的氧自由基，使抗氧化酶SOD大量損耗，大鼠抗氧化損傷的能力降低，受氧化損傷的程度加重。實驗觀察顯示，不同劑量的黃芪多糖均可顯著縮小大鼠GUA，提高胃潰瘍大鼠血清SOD活性，降低血清MDA水平，其效果尤以高劑量顯著，其次為中劑量，低劑量較差。實驗結(jié)果還顯示，高劑量的黃芪多糖治療胃潰瘍效果及抗氧化損傷能力優(yōu)于雷尼替丁。

綜上所述，黃芪多糖可有效治療大鼠乙酸性胃潰瘍，以高劑量為佳。其機制可能與黃芪多糖提高機體的抗氧自由基損傷能力、促進(jìn)胃黏膜修復(fù)有關(guān)，其更深入的機制有待進(jìn)一步研究。

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Effects of astragalus polysaccharides on experimental gastric ulcer rats

HUANG Zhiyuan
Department of Pharmacy，the Second People′s Hospital of Foshan City，Guangdong Province，F(xiàn)oshan 528000，China

Objective To observe the effect of astragalus polysaccharides（AP）on experimental gastric ulcer rats. Methods 48 rats were randomly divided into 6 groups:normal group，model group，AP groups（high-dose，middle-dose and low-dose group）and ranitidine group，with 8 rats in each group.Gastric ulcers were caused by the corrosion of glacial acetic acid.After 2 weeks of treatment，the change of gastric ulcer area（GUA），serum activity of superoxide dismutase（SOD）and level of malondialdehyde（MDA）were observed.Results The GUA of normal group，model group，high-dose AP group，middle-dose AP group，low-dose AP group and ranitidine group was 0，（9.06±2.65），（1.91±0.19），（2.54±0.27），（3.85±0.19），（2.37±0.31）mm2respectively；activity of SOD was（138.19±17.92），（88.69±13.78），（128.22± 19.30），（118.96±14.78），（102.68±22.52），（109.36±14.28）U/mL respectively；level of MDA was（8.51±1.10），（14.17± 1.55），（9.97±1.44），（11.17±1.29），（12.79±1.39），（11.57±1.01）nmol/mL respectively.Compared with normal group，the SOD activity of model group was significantly decreased（P＜0.01），while the MDA level of model group increased significantly（P＜0.01）.Compared with model group，the GUA of high-dose AP group and middle-dose AP group decreased significantly（P＜0.01），and the SOD activity of them increased significantly（P＜0.01），while the MDA level of them decreased significantly（P＜0.01）.Compared with ranitidine group，the GUA of high-dose AP group decreased significantly（P＜0.05），the SOD activity of it increased significantly（P＜0.05），while the MDA level of it decreased significantly（P＜0.05）.Compared with low-dose AP group，the GUA of high-dose AP group and middle-dose AP group decreased significantly（P＜0.01）.Conclusion The AP treats experimental GU rats effectively，especially in high-dose，probably by inhibiting oxidant injury on gastric mucosa of oxygen free radicals.

Astragalus polysaccharides；Gastric ulcer；Superoxide dismutase；Malondialdehyde

R285.5

A

1673-7210（2015）05（c）-0016-04

2015-02-25本文編輯：李亞聰）