吳梅梅　常明向.湖北省中醫(yī)院藥事部，湖北武漢43006；2.湖北中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，湖北武漢43006

甲氧芐啶與58種中藥聯(lián)用抗菌增效作用的研究

吳梅梅1常明向2▲
1.湖北省中醫(yī)院藥事部，湖北武漢430061；2.湖北中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，湖北武漢430061

目的系統(tǒng)研究甲氧芐啶（TMP）對(duì)具抗菌作用中藥的抗菌增效作用。方法選擇58種不同功效種類中藥，采用瓊脂稀釋法分別對(duì)中藥、TMP、中藥聯(lián)用TMP抗菌作用進(jìn)行研究。結(jié)果除五倍子外，TMP對(duì)所研究的單味中藥基本上均有抗菌增效作用，但對(duì)不同中藥、不同菌種增效強(qiáng)度有所不同?？傮w上，對(duì)金葡菌、水弧菌增效作用較強(qiáng)，對(duì)銅綠假單胞菌增效作用較弱。大多數(shù)中藥對(duì)銅綠假單胞菌無抗菌作用，與TMP聯(lián)用后大多顯示出與TMP相當(dāng)或增強(qiáng)的抗菌作用。補(bǔ)益類中藥與TMP聯(lián)用后，抗菌增效作用增幅較大。結(jié)論TMP對(duì)所研究的57種中藥具抗菌增效作用。

甲氧芐啶；中藥；抗菌增效

甲氧芐啶（TMP）屬抑菌劑，它能大幅度地增強(qiáng)磺胺類藥物的效力，故其有磺胺增效劑之稱。甲氧芐啶和其他抗生素配伍也能更好地發(fā)揮抗生素的殺菌或抑菌作用，同樣能起抗菌增效的效果［1-5］。

隨著對(duì)中藥抗菌作用研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)中藥中有多種品種體外對(duì)多種致病菌有殺滅或抑制作用，但臨床效果并不佳；究其原因，其一是中藥抗菌效能不夠，筆者曾比較研究中西抗菌作用，發(fā)現(xiàn)1 g菌得治抗菌作用相當(dāng)于3 kg左右黃連的作用［6］；其二可能是中藥中抗菌有效成分在體內(nèi)的血藥濃度及持續(xù)時(shí)間不夠所致，由于中藥使用最大劑量的限制，靠增大劑量來增加體內(nèi)血藥濃度往往難以如愿，如《中國(guó)藥典》2010年版所載黃連常用劑量為3～5 g。

為了增強(qiáng)中藥對(duì)細(xì)菌性疾病的治療效果，方法之一是在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下運(yùn)用某些西藥，即西藥中藥化；方法之二是將某些西藥（如TMP）與中藥伍用，取其相互增效減毒作用。近年來，TMP與中藥伍用進(jìn)行增效作用研究也有不少報(bào)道［7-12］，結(jié)果均是TMP對(duì)中藥抗菌增效作用明顯。筆者曾采用瓊脂稀釋法對(duì)比研究了黃連、香連丸、五味消毒飲與TMP聯(lián)用對(duì)5種不同細(xì)菌的體外抗菌增效作用，結(jié)果TMP對(duì)黃連及其復(fù)方均有抗菌增效作用。為進(jìn)一步系統(tǒng)、深入、廣泛地研究TMP與中藥聯(lián)用抗菌增效情況，本研究從具抗菌作用的中藥中，選擇有代表性的不同功效種類58種中藥進(jìn)行系統(tǒng)研究，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下：

1　材料與儀器

1.1儀器

XSW-CJ-2A標(biāo)準(zhǔn)型凈化工作臺(tái)（吳江市津化設(shè)備總廠）；LRH-250A生化培養(yǎng)箱（廣東省醫(yī)療器械廠）；LMQR-4060型立式滅菌器（山東新華醫(yī)療器械股份有限公司）。

1.2培養(yǎng)基

MH瓊脂培養(yǎng)基（江門市凱琳貿(mào)易有限公司）；營(yíng)養(yǎng)肉湯（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）。

1.3菌株

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌、水弧菌，以上菌種購(gòu)置于武漢大學(xué)微生物典藏中心。

1.4樣品配制

1.4.1中藥解表藥：麻黃（5 g），桂枝（5 g），桑葉（7.5 g），菊花（5 g），野菊花（5 g）。清熱藥：知母（5 g），夏枯草（7.5 g），梔子（5 g），大青葉（7.5 g），紫草（5 g），赤芍（5 g），丹皮（5 g），黃連（2 g），黃芩（5 g），黃柏（5 g），苦參（5 g），金銀花（5 g），連翹（5 g），蒲公英（15 g），紫花地?。?.5 g），馬齒莧（7.5 g），穿心蓮（2.5 g），天葵子（5 g），地骨皮（7.5 g），胡黃連（5 g）。瀉下藥：大黃（5 g）。利水滲濕藥：車前草（5 g），木通（5 g），茵陳（15 g），金錢草（15 g）?；瘽袼帲汉駱悖? g）。祛風(fēng)濕藥：威靈仙（5 g），虎杖（7.5 g）。理氣藥：枳實(shí)（5 g），烏藥（5 g），旋覆花（5 g）?；钛鏊帲旱ⅲ?.5 g）。止血藥：地榆（5 g），仙鶴草（7.5 g）。消食藥：山楂（5 g）。止咳平喘藥：紫菀（5 g）。祛寒藥：高良姜（5 g）。安神藥：遠(yuǎn)志（2.5 g）。補(bǔ)虛藥：黃芪（5 g），甘草（5 g），當(dāng)歸（5 g），何首烏（7.5 g），白芍（5 g），仙茅（5 g），山茱萸（5 g），天冬（5 g）。收斂藥：訶子（5 g），五倍子（1.5 g）。外用藥：雄黃（0.5 g），硼砂（1.5 g），明礬（1.5 g），硫磺（1.5 g），兒茶（1.5 g）。以上藥物均取自湖北省中醫(yī)院中藥房，經(jīng)張躍軍主任藥師鑒定為正品后進(jìn)行試驗(yàn)。以上藥物抗菌試驗(yàn)時(shí)按各藥物名后括號(hào)中劑量進(jìn)行，該劑量為《中國(guó)藥典》2010年版所載劑量的一半。以上每種中藥分別常規(guī)煎煮濃縮成50mL。取10 mL濃縮成浸膏狀，加入無菌普通肉湯培養(yǎng)基10 mL，微熱使溶，搖勻即得各種中藥供試藥液。

1.4.2 TMP稱取TMP100mg于試管中，加入肉湯10mL，微熱使溶，搖勻即得TMP供試藥液。

1.4.3中藥+TMP復(fù)方取上述每種中藥煎劑10mL濃縮成浸膏狀，再加入TMP 100mg及肉湯培養(yǎng)基10mL，微熱使溶搖勻即得含中藥+TMP復(fù)方供試藥液。

2　方法與結(jié)果

2.1藥液的稀釋

無菌試管3排，每排15管，除每排的第14管外，其余各管中均加入無菌普通肉湯培養(yǎng)基5 mL，然后于每排試管的第1管分別加入上述每種中藥3種供試藥液5mL，混勻，吸出5mL加至第2管中，同法依次稀釋至第13管，混勻后取出5mL于第14管中。每排第14管作無菌陰性對(duì)照管，第15管作無藥陽性對(duì)照管。然后于各管中加5mL熱無菌肉蛋白胨瓊脂，搖勻，趁熱依次傾入到同一型號(hào)的無菌培養(yǎng)皿中，放置使瓊脂冷凝。藥物倍比稀釋倍數(shù)依次為1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/1024、1/2048倍。

2.2菌液的加入

除14號(hào)培養(yǎng)皿外，1～15號(hào)培養(yǎng)皿分別劃分為5個(gè)近等的區(qū)域，并分別編號(hào)，然后在每個(gè)區(qū)域中分別加入5種經(jīng)16 h培養(yǎng)的各含菌培養(yǎng)液0.01 mL，37℃培養(yǎng)18～24 h。

2.3結(jié)果判斷

以細(xì)菌的生長(zhǎng)有無為判斷指標(biāo)，觀察細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果。具抗菌作用（-）指接種區(qū)光滑無可見菌落，無抗菌作用（+）指接種區(qū)可見較多細(xì)菌生長(zhǎng)。1～11管藥物稀釋倍數(shù)依次為原濃度的1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/1024、1/2048。藥物稀釋倍數(shù)越大表示藥物最小抑菌（MIC）濃度越小，抗菌作用越強(qiáng)。因藥物種類較多，為方便直觀比較，抗菌作用強(qiáng)度結(jié)果以具抗菌作用（-）最大藥物稀釋倍數(shù)表示。0：表示第1管（1/2倍原濃度）即無抗菌作用。結(jié)果見表1、2。

3　討論

本研究所采用瓊脂稀釋法是在傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法基礎(chǔ)上加以改進(jìn)而成。傳統(tǒng)方法一次只能進(jìn)行一種細(xì)菌的抗菌實(shí)驗(yàn)，而改進(jìn)后的方法一次可同時(shí)進(jìn)行多種細(xì)菌的抗菌實(shí)驗(yàn)，大大提高實(shí)驗(yàn)效率，而且操作簡(jiǎn)便、快捷，干擾因素少，重復(fù)性好，結(jié)果更準(zhǔn)確，可比性更強(qiáng)。結(jié)果表明，在本實(shí)驗(yàn)條件下，不同中藥抗菌作用強(qiáng)度不同。常用的清熱解毒中藥如黃連、黃芩、黃柏、苦參、金銀花、連翹、蒲公英、紫花地丁、馬齒莧、穿心蓮等抗菌作用強(qiáng)度并不強(qiáng)，反而補(bǔ)益類藥中的山茱萸、收斂藥中的訶子、外用藥中的硼砂及明礬顯示出有較強(qiáng)的抗菌作用。TMP與不同功效種類的57種單味中藥聯(lián)用研究表明，TMP對(duì)所研究的單味中藥基本上均有抗菌增效作用，但對(duì)不同中藥、不同菌種增效強(qiáng)度有不同。

總體上，對(duì)不同菌種而言，對(duì)金葡菌、水弧菌增效作用較強(qiáng)，對(duì)銅綠假單胞菌增效作用較弱。在本實(shí)驗(yàn)條件下，大多數(shù)中藥對(duì)銅綠假單胞菌無抗菌作用，而TMP有一定的作用，中藥與TMP聯(lián)用后大多顯示出與TMP相當(dāng)或增強(qiáng)的抗菌作用，這些中藥與TMP聯(lián)用后客觀上增強(qiáng)了這些中藥的抗菌作用。

補(bǔ)益類藥中除山茱萸外，黃芪、甘草、當(dāng)歸、何首烏、白芍、仙茅、天冬的抗菌作用均較弱，但與TMP聯(lián)用后，抗菌作用增幅較大。外用藥中硼砂、明礬、兒茶具有較強(qiáng)的抗菌作用，雄黃、硫磺作用較弱，但與TMP聯(lián)用后，抗菌作用均增強(qiáng)。外用藥常直接用于創(chuàng)面，與體內(nèi)影響因素?zé)o關(guān)，如與TMP聯(lián)用將直接有益于提高中藥臨床療效。

表1　 TMP（100 m g）與大黃（1 g）聯(lián)用抗菌作用結(jié)果（藥物稀釋倍數(shù)）

表2　 TMP與各中藥聯(lián)用抗菌作用結(jié)果（藥物最大稀釋倍數(shù)）

（續(xù)表2）　表2 TMP與各中藥聯(lián)用抗菌作用結(jié)果（藥物最大稀釋倍數(shù)）

目前，中藥與TMP聯(lián)用研究大多是進(jìn)行體外抗菌實(shí)驗(yàn)研究［13］，體內(nèi)研究報(bào)道不多。筆者曾將TMP與小兒止瀉灌腸液聯(lián)用進(jìn)行小鼠體內(nèi)研究［14］，結(jié)果聯(lián)用TMP后對(duì)小鼠保護(hù)作用明顯增強(qiáng)。還曾將TMP與小兒止瀉灌腸液聯(lián)用治療菌痢進(jìn)行初步臨床療效觀察，中藥小兒止瀉灌腸液對(duì)照組6例，TMP與小兒止瀉灌腸液聯(lián)用組12例，用藥3 d，結(jié)果聯(lián)用TMP后治療作用大幅增強(qiáng)。韓鐵鎖［15］研究表明中藥增效抗菌復(fù)方具有較強(qiáng)的清熱解毒和殺菌作用，還可增強(qiáng)機(jī)體免疫力。增強(qiáng)機(jī)體免疫力是中藥體內(nèi)發(fā)揮抗菌作用的主要機(jī)制之一，但在機(jī)體感染期，體內(nèi)病菌大量存在，只靠增強(qiáng)機(jī)體免疫力是不夠的，因中藥直接殺菌作用明顯弱于抗生素，結(jié)果是中藥抗菌預(yù)防效果明顯優(yōu)于治療效果。孫懷剛等［12］進(jìn)行了中藥增效抗菌復(fù)方對(duì)人工誘發(fā)雞大腸埃希菌病的療效試驗(yàn)，結(jié)果中、高劑量的中藥增效抗菌復(fù)方與環(huán)丙沙星的治療效果相當(dāng)，間接證明中藥增效抗菌復(fù)方也具有較強(qiáng)的殺菌作用。

當(dāng)前，市場(chǎng)上將TMP與中藥聯(lián)用相關(guān)的產(chǎn)品只有增效黃連素片，TMP與中藥聯(lián)用的應(yīng)用很少。不過從筆者及其他科研工作者所進(jìn)行的TMP與中藥聯(lián)用的研究結(jié)果看，如果將TMP廣泛引入到中藥的基礎(chǔ)及臨床應(yīng)用中，加強(qiáng)體內(nèi)及臨床應(yīng)用研究，進(jìn)行科學(xué)的聯(lián)合應(yīng)用，取長(zhǎng)補(bǔ)短，相信將會(huì)增強(qiáng)中藥的抗菌作用強(qiáng)度，提高中藥在細(xì)菌性疾病領(lǐng)域的作用。

（續(xù)表2）　表2 TMP與各中藥聯(lián)用抗菌作用結(jié)果（藥物最大稀釋倍數(shù)）

［1］高新富，魏傳梅，徐彥飛，等.增效磺胺嘧啶銀混懸劑體外抑菌效果與臨床療效觀察［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2013，29（2）：308-309.［2］黃麗萍.利福平與甲氧芐氨嘧啶治療變形桿菌腸炎臨床觀察［J］.航空航天醫(yī)學(xué)雜志，2012，23（11）：1334-1335.

［3］郭麗華，劉在青，肖建森，等.復(fù)方土青注射液制備方法及療效試驗(yàn)［J］.山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，44（2）：101-103.

［4］陳玉華.頭孢羥氨芐甲氧芐啶分散片的含量測(cè)定研究［J］.海峽藥學(xué)，2010，22（8）：70-73.

［5］王桂梅.甲氧芐啶聯(lián)合抗癆藥物用于淋巴結(jié)核性潰瘍換藥的療效分析［J］.中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2012，19（29）：70-74.

［6］常明向，李良長(zhǎng)，黃傳俊，中西抗菌作用比較研究［J］.中華實(shí)用中西醫(yī)雜志，2001，20，（1）：1831-1832.

［7］王新，崔一酷，邵紅，等.甲氧芐啶對(duì)蒲公英體外抗菌增效作用的研究［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2010，37（2）：169-171.

［8］王新，崔一醅，韓鐵鎖.甲氧芐啶對(duì)黃芩苷體外抗菌增效作用的試驗(yàn)［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2010，46（11）：69-70.

［9］王新，崔一酷，邵紅.甲氧芐啶對(duì)連翹體外抗菌增效作用的研究［J］.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，23（4）：30-32.

［10］崔一酷，王新，韓鐵鎖.甲氧芐啶對(duì)金銀花體外抗菌增效作用及量效關(guān)系的試驗(yàn)［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2010，46（8）：60-62.

［11］崔一酷，王新，韓鐵鎖.甲氧芐啶對(duì)白頭翁體外抗菌增效作用及量效關(guān)系的試驗(yàn)［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2010，46（9）：44-46.

［12］孫懷剛，王新，崔一晶，等.中藥增效抗菌復(fù)方對(duì)人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的療效試驗(yàn)［J］.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，42（3）：86-89.

［13］鄭鐵鎖.甲氧芐啶對(duì)中藥抗茵增效作用研究進(jìn)展［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2012，48（5）：68-69.

［14］涂可斌，常明向，劉浩.甲氧芐氨嘧啶對(duì)小兒止瀉灌腸液增效作用研究［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2012，8（3）：42-43.

［15］韓鐵鎖.TMP對(duì)中藥抗菌增效作用及其復(fù)方對(duì)免疫功能影響的研究［D］.大慶：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)，2009.

Study on the antibacterial synergistic effect of 58 kinds of traditional Chinesemedicine com bined w ith Trim ethoprim

WUMeimei1CHANGMingxiang2▲
1.Department of Pharmaceutical Affairs，Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Hubei Province，Wuhan 430061，China；2.School of Clinical Medical，Hubei University of Chinese Medicine，Hubei Province，Wuhan 430061，China

Objective To study the antibacterial synergistic effect of 58 kinds of traditional Chinese medicine（TCM）combined with Trimethoprim（TMP）systematically.Methods The 58 kinds of TCM were selected according to their types of efficacy and antibacterial effects，then the agar dilutionmethod was adopted to compare the antibacterial effect between TCM，TMP and TCM+TMP.Resu lts Except Gallnut，the result showed that TMP could mainly increase the antibacterial effects of TCM on 6 kinds of germs，but synergistic effect different on different kind of TCM and germ.As a whole，synergistic effect was stronger on Staphylococcus aureus and Vibrio aquatilis and weaker on Pseudomonas aeruginosa.Most of TCM had no antibacterial effect on Pseudomonas aeruginosa，after combined with TMP，their effects against Pseudomonasaeruginosawere increased orequivalent to TMP.Thesynergistic extentoftonic classChinesemedicine were increased largely when combined with TMP.Conclusion TMP posses synergistic effects on 57 kinds of TCM.

Trimethoprim；Traditional Chinesemedicine；Antibacterial synergistic effect

S853.7

A

1673-7210（2015）05（a）-0027-06

2015-01-02本文編輯：衛(wèi)軻）