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        HPLC法分析測定“黑美人”馬鈴薯中原花青素

        2015-10-24 05:43:15楊曉輝汪嶺蔡慧珍逯莉莉
        食品研究與開發(fā) 2015年11期
        關(guān)鍵詞:方法

        楊曉輝,汪嶺,蔡慧珍,逯莉莉

        (寧夏醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院,寧夏銀川750004)

        HPLC法分析測定“黑美人”馬鈴薯中原花青素

        楊曉輝,汪嶺,蔡慧珍,逯莉莉

        (寧夏醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院,寧夏銀川750004)

        建立高效液相色譜法分離測定“黑美人”馬鈴薯中原花青素含量的分析方法。實驗采用C18柱(Phenomenex 5 μm;250 mm×4.6 mm);V(甲醇)∶V(0.5%冰醋酸水溶液)=30∶70為流動相;柱溫:25℃;流速:1 mL/min;檢測波長:287 nm。結(jié)果表明:原花青素在80 μg/mL~200 μg/mL濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R=0.995 7,方法的精密度RSD為2.86%,平均回收率為100.1%,原花青素的平均含量為51.805 mg/g。本方法簡便、快速、準確、可靠,可用于“黑美人”馬鈴薯中原花青素的含量的測定。

        HPLC;“黑美人”馬鈴薯;原花青素

        原花青素(Proanthocyanidins,簡稱PC)是廣泛存在于植物界和食品中的一大類多酚化合物[1],是近年來不斷研究開發(fā)的一種較強的體內(nèi)活性功能因子。據(jù)資料報道[2-6],PC擁有強有力的抗氧化,清除自由基以及改善體循環(huán)的特殊功效,并能預(yù)防80多種因自由基而引起的疾病,包括心血管疾病、抗腫瘤、抗輻射、防血小板凝結(jié)的作用,其在人體內(nèi)的抗氧化和清除自由基的能力是VE的50倍、VC的20倍。

        PC來源廣泛,毒副作用低,遂成為具有廣闊發(fā)展前景的天然色素[7]。目前,PC已作為主要活性成分用于藥品及食品營養(yǎng)補充劑中,尤其是其中一些聚合程度較低的PC(簡稱OPC)已經(jīng)實現(xiàn)了較充分的商業(yè)開發(fā)和應(yīng)用。目前大多數(shù)研究報道中都是利用甘蔗、葡萄皮、葡萄籽、蠶豆皮等提取PC的[2,5,8],而且PC的提取方法已較為成熟。然而,由于PC組成和結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性,其測定方法還無統(tǒng)一標準,因而在相關(guān)產(chǎn)品中含量的準確表征始終是困擾市場的一個技術(shù)難題。

        寧夏新大地黑土豆發(fā)展專業(yè)合作社所引進的“黑美人”馬鈴薯是利用航天技術(shù)育種研發(fā)出馬鈴薯家族中的新品種?!昂诿廊恕瘪R鈴薯外形與普通馬鈴薯無異,但果皮呈黑紫色,富有光澤,最為奇特的是其果肉為深紫色,顏色誘人。據(jù)資料報道,“黑美人”馬鈴薯是一種集食用、藥用、保健于一體的特殊薯類新品種,其內(nèi)富含原花青素,營養(yǎng)價值更高,但其中原花青素的提取與測定方法文獻較少報道。本文以乙醇為提取劑,超聲波震蕩提取“黑美人”馬鈴薯中的PC,并利用HPLC法分離、鑒定并測定其含量,旨在確定快速、準確、可靠的分離分析“黑美人”馬鈴薯中PC的方法,同時為更好的開發(fā)和綜合利用“黑美人”馬鈴薯資源和開發(fā)新品種的天然色素提供理論依據(jù)。

        1材料與方法

        1.1材料、儀器與試劑

        “黑美人”馬鈴薯(購自寧夏新大地黑土豆發(fā)展專業(yè)合作社);PC標準品(北京上立方聯(lián)合化工技術(shù)研究院);甲醇(色譜純);無水乙醇(分析純);冰醋酸(分析純);超純水。

        1.2儀器與設(shè)備

        L-2000型高效液相色譜儀:日立公司;AL-204梅特勒分析天平:瑞士梅特勒;JYL-C012九陽料理機:九陽股份有限公司;KQ 3200DA型數(shù)控超聲波清洗器:昆山市儀器廠;HP-01無油真空泵:天津市瑞森特儀器儀表商行;Neofuge 15R型高速冷凍離心機:上海力申科學(xué)儀器有限公司;Heal Force超純水凈化儀:力新儀器有限公司。

        1.3方法

        1.3.1標準溶液的配制

        準確稱取干燥的PC標準品10.00 mg,用色譜純甲醇溶解后,準確定容至50 mL,搖勻,制得濃度為200 μg/mL的PC標準應(yīng)用液。分別精密移取上述標準應(yīng)用液4、5、6、7.5、10 mL至10 mL容量瓶中,用色譜純甲醇準確定容至刻度,得到濃度分別為80、100、120、150、200 μg/mL的PC標準系列溶液。

        1.3.2樣品的預(yù)處理

        將“黑美人”馬鈴薯清洗干凈后,晾干,用榨汁機榨汁(在榨汁過程中不加入任何溶液)成勻漿后,分別準確稱取10.0 g于6個燒杯中,按料液比1∶7.5加入75%的乙醇,在超聲振蕩器(功率為80%)中于60℃提取30 min。最后,將各燒杯中提取后的溶液在離心沉淀機上以1 000 r/min~3 000 r/min遞增的速度離心5 min,各取其上清液1 mL,用色譜純甲醇稀釋后,即得供試品溶液,待測。

        1.3.3色譜條件

        色譜柱:C18柱(Phenomene×5 μm;250 mm× 4.6 mm);柱溫:25℃;流動相:V(甲醇)∶V(0.5%冰醋酸水溶液)=30∶70;檢測波長:287 nm;進樣量:20 μL;流速:1 mL/min。

        2結(jié)果與分析

        2.1流動相的選擇

        取1.3.1和1.3.2中制備好的標準溶液及供試品試液用0.45 μm的微孔濾膜過濾后進樣,流動相的變化對“黑美人”馬鈴薯中PC的分離效果影響很大。實驗中參照相關(guān)文獻[9-10],分別嘗試用甲醇-水(10∶90)、甲醇-水(20∶80)、甲醇-0.5%冰醋酸水溶液(20∶80)、甲醇-0.5%冰醋酸水溶液(30∶70)、甲醇-0.5%冰醋酸水溶液(25∶75)作為流動相,根據(jù)分離情況,最后選定甲醇-0.5%冰醋酸水溶液(30∶70)為流動相,結(jié)果如圖1所示。

        圖1 PC標準溶液(A)及供試品(B)色譜圖Fig.1HPLC chromatograms of PC reference substance(A),and sample extract(B)

        由圖1可知,此條件下“黑美人”馬鈴薯中PC與其他成分能很好的分離,且基線平穩(wěn)。采用此色譜條件測定“黑美人”馬鈴薯中PC的含量,結(jié)果較為滿意。

        2.2標準曲線和回歸方程

        繪制標準系列溶液的峰面積-濃度標準曲線,如圖2所示。

        圖2 PC標準曲線Fig.2The standard curve of PC

        結(jié)果表明,所測PC在80 μg/mL~200 μg/mL濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系,符合比爾定律,其回歸方程為A=59 742.52+2 098.49C,R=0.995 7。

        2.3方法的精密度

        按照1.3.2進行樣品提取處理,在1.3.3色譜條件下進樣,測定PC組分峰的峰面積,此法平行做6次,測定結(jié)果見表1,6次測定的RSD=2.86%,說明本方法的精密度良好。

        表1 方法的精密度實驗(n=6)Table 1Precision test of the method(n=6)

        2.4樣品的加標回收率

        取1號、5號供試品做加標回收率實驗:平行取3份1 mL供試品,分別加入20、30、50 μL PC標準溶液(200 μg/mL),測定其含量并計算回收率,結(jié)果見表2。

        表2 樣品加標回收率(n=3)Table 2The results of recovery test(n=3)

        由表2可見,平均回收率在92.3%~108.9%之間,平均回收率為100.1%,符合分析方法要求。

        2.5測定結(jié)果

        在上述同樣條件下測定“黑美人”馬鈴薯中PC的含量,平行做6次,取平均值。測定結(jié)果如表3所示。

        表3 “黑美人”馬鈴薯中PC含量(mg/g)Table 3Content of PC in“hei mei ren”potatoes(mg/g)

        由表3可知,此方法下測得“黑美人”馬鈴薯中PC的平均含量為51.805 mg/g,較文獻所報道的其他類物質(zhì)中PC含量為高[9-10],由于PC豐富的生理功效,“黑美人”馬鈴薯中PC適合于作為食品色素,可廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、保健品等領(lǐng)域,值得進一步研究。

        3結(jié)論

        本實驗采用HPLC法分離鑒定“黑美人”馬鈴薯中PC并測定其含量,所選用的色譜分析條件可使“黑美人”馬鈴薯中PC與其他成分很好的分離,該方法線性關(guān)系、精密度、重現(xiàn)性均良好,所測樣品的平均回收率為100.1%,“黑美人”馬鈴薯中PC含量為51.805 mg/g。測定結(jié)果表明,該方法可行,專屬性好,雜質(zhì)干擾小,可用于“黑美人”馬鈴薯中PC的分離、鑒定及含量的測定。

        [1]北京醫(yī)學(xué)院,北京中醫(yī)學(xué)院.中草藥成分化學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1980:115

        [2]涂斌,李新瑩,姚舜,等.甘蔗中原花青素含量的分析方法[J].食品研究與開發(fā),2009,30(6):130-133

        [3]呂麗爽.天然抗氧化劑低聚原花青素的研究進展[J].食品科學(xué),2002,23(2):147-150

        [4]凌志群,張曉輝,謝筆鈞.原花青素的藥理學(xué)研究進展[J].中國藥理學(xué)通報,2002,18(1):9-12

        [5]洪新,唐克,趙立松.葡萄籽中原花青素提取條件研究[J].糧油食品科技.2009,17(4):74-76

        [6]余瑩,粟武,魏東芝.原花青素體外清除自由基活性的研究[J].華東理工大學(xué)學(xué)報,2002,28(3):318-320

        [7]楊志娟.我國天然色素的現(xiàn)狀與發(fā)展方針[J].食品研究與開發(fā),2003,24(2):3-5

        [8]鄧莉,褚仕超,劉章武,等.蠶豆皮中低聚原花青素結(jié)構(gòu)的初步鑒定[J].中國釀造,2013,32(2):137-143

        [9]刁海鵬,孫體健,姬小蕾,等.高效液相法測定爬山虎紅色素中原花青素含量[J].現(xiàn)代食品科技,2009,25(5):566-567

        [10]王建明,李早慧.高效液相法測定視力健咀嚼片中原花青素的含量[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)刊,2012,14(1):167-168

        Analysis and Determination of Proanthocyanidins in“Heimeiren”Potatoes by HPLC

        YANG Xiao-hui,WANG Ling,CAI Hui-zhen,LU Li-li
        (College of Public Health,Ningxia Medical University,Yinchuan 750004,Ningxia,China)

        Proanthocyanidins in“Heimeiren”Potatoes was determined by HPLC.Phenomenex C18 column(5 μm;250 mm×4.6 mm)was used with the mobile phase of 30%methanol and 70%water(with 0.5%acetic acid).The column temperature,flow rate and detection wavelength were 25℃,1 mL/min and 287 nm,respectively.The results showed that there was a good linear relationship between peak area and proanthocyanidins content within the range of 80 μg/mL-200 μg/mL.Linear correlation was 0.995 7,RSD of precision was 2.86%,the average recovery rate was 100.1%and the average content of proanthocyanidins was 51.805 mg/g.This method is simple,fast,accurate and reliable,suitable for determination of proanthocyanidins content in“Heimeiren”Potatoes.

        HPLC;“Heimeiren”potatoes;proanthocyanidins

        10.3969/j.issn.1005-6521.2015.11.028

        2013-12-06

        寧夏醫(yī)科大學(xué)面上項目(XM2012015)

        楊曉輝(1979—),女(漢),講師,碩士,研究方向:分析化學(xué)和衛(wèi)生檢驗。

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