王文永，田玉先，王雅紅，佟勝河，朱新艷，王琨，韓剛

（1.河北省唐山市豐潤區(qū)人民醫(yī)院，河北唐山064000；2.河北聯(lián)合大學(xué)藥學(xué)院，河北唐山063000）

大黃酸的穩(wěn)定性研究

王文永1，田玉先1，王雅紅1，佟勝河1，朱新艷1，王琨2，韓剛2

（1.河北省唐山市豐潤區(qū)人民醫(yī)院，河北唐山064000；2.河北聯(lián)合大學(xué)藥學(xué)院，河北唐山063000）

目的研究溶液pH、溫度、光照強(qiáng)度等因素對(duì)大黃酸穩(wěn)定性的影響。方法將一定質(zhì)量濃度的大黃酸置不同pH緩沖溶液中、不同光照強(qiáng)度和不同溫度條件下，定時(shí)取樣，采用高效液相色譜法測定大黃酸質(zhì)量濃度的變化，采用動(dòng)力學(xué)方法建立大黃酸降解速率方程。結(jié)果隨著溶液pH、溫度的升高，光照強(qiáng)度的增加，大黃酸降解速率加快。結(jié)論大黃酸的穩(wěn)定性與pH、溫度、光照強(qiáng)度關(guān)系密切。大黃酸應(yīng)在低溫、避光的條件下貯存，低pH條件下使用。

大黃酸；穩(wěn)定性；酸堿度；溫度；光照強(qiáng)度；高效液相色譜法

大黃酸為中藥大黃的有效成分，屬蒽醌類化合物［1］。大黃酸除具有抗菌、止血、抗癌、利尿等多種藥理活性外，還可清除體內(nèi)自由基［2-3］。大黃酸化學(xué)名稱為1，8-二羥基-3-羧基蒽醌，在蒽醌環(huán)上含有2個(gè)羥基和1個(gè)羧基，極性較強(qiáng)，具有氧化還原性質(zhì)，易發(fā)生氧化還原反應(yīng)［4］，故大黃酸不穩(wěn)定，易分解［5］。本研究中探討了溶液的pH、光照強(qiáng)度、溫度對(duì)大黃酸穩(wěn)定性的影響，為大黃酸的合理應(yīng)用提供參考。

1　儀器與試藥

1100型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；BT125D型電子天平（Sartorius公司）；pHS-3C型酸度計(jì)（上海鵬順科學(xué)儀器有限公司）；HWS型智能型恒溫恒濕培養(yǎng)箱（寧波市科技園區(qū)新江南儀器有限公司）；低溫光照儀（藥物制劑國家工程研究中心）；SYC-15型超級(jí)恒溫水?。暇┥Ａ﹄娮釉O(shè)備廠）。大黃酸對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110757-200206）；甲醇（Fisher Chemicals公司）為色譜純，其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1緩沖溶液制備

以醋酸-醋酸鈉、磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸、甘氨酸-氫氧化鈉為緩沖體系，配成總濃度為0.2mol/L及pH分別為4.00，6.00，8.00，9.00，10.00的緩沖溶液（大黃酸在水中溶解度很低，但溶于一定濃度的乙醇溶液，故緩沖溶液中含30%乙醇），緩沖溶液用酸度計(jì)校正。

2.2色譜條件［6］

色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸（77∶22∶1）；檢測波長：428 nm；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：20μL。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

稱取干燥后的大黃酸對(duì)照品2.5mg，精密稱定，置50mL棕色容量瓶中，甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為50μg/mL的大黃酸對(duì)照品貯備液，置暗處備用。將大黃酸對(duì)照品貯備液分別稀釋成1.5，3.0，4.5，6.0，9.0，15.0，30.0μg/mL的大黃酸對(duì)照品溶液，按高效液相色譜（HPLC）法測定峰面積。以大黃酸峰面積（S）對(duì)質(zhì)量濃度（C）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程S=45.193C+0.655 4，r=0.999 5（n=7）。結(jié)果表明，大黃酸質(zhì)量濃度在1.5～30.0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.4穩(wěn)定性影響因素試驗(yàn)

溶液pH：分別精密量取大黃酸貯備液2 mL，置5個(gè)25 mL棕色容量瓶中，分別用pH為4.00，6.00，8.00，9.00，10.00的緩沖溶液定容，迅速搖勻，置恒溫（25℃）光照培養(yǎng)箱中，調(diào)解光照強(qiáng)度為700 lx，定時(shí)取樣，依法操作。分別測定不同時(shí)間點(diǎn)大黃酸質(zhì)量濃度（C）。以lg C對(duì)時(shí)間t作圖，結(jié)果為一直線，表明大黃酸在不同pH緩沖溶液中降解為一級(jí)動(dòng)力學(xué)過程［7］。分別求出大黃酸25℃不同pH條件下的降解動(dòng)力學(xué)方程及線性相關(guān)系數(shù)r、降解速率常數(shù)Ke、半衰期（t1/2），結(jié)果見表1?？梢姡S著溶液pH升高，大黃酸穩(wěn)定性迅速下降。

表1　溶液pH對(duì)大黃酸穩(wěn)定性的影響（25℃，700 lx）

光照強(qiáng)度：分別精密量取大黃酸貯備液2mL，置5個(gè)25mL棕色容量瓶，用pH=8的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液定容，迅速搖勻，置低溫光照儀中，20℃恒溫，調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度分別為500，1 000，2 000，4 000，8 000 lx，定時(shí)取樣，依法操作。計(jì)算大黃酸質(zhì)量濃度（C），以lg C對(duì)時(shí)間t作圖，結(jié)果為一直線，表明大黃酸在不同光照條件下降解為一級(jí)動(dòng)力學(xué)過程。求出大黃酸在20℃及pH=8時(shí)不同光照強(qiáng)度下的降解動(dòng)力學(xué)方程及線性相關(guān)系數(shù)r、降解速率常數(shù)Ke、半衰期（t1/2），結(jié)果見表2?？梢姡S著光照強(qiáng)度的增加，大黃酸穩(wěn)定性迅速下降。

表2　光照強(qiáng)度對(duì)大黃酸穩(wěn)定性的影響（20℃，pH=8）

溶液溫度：精密量取大黃酸貯備液2mL，置5個(gè)25mL棕色容量瓶中，用pH=8的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液定容，迅速搖勻，SYC-15超級(jí)恒溫水浴中，700 lx恒定的光照強(qiáng)度，溫度分別為5，10，20，30，40℃，定時(shí)取樣，依法操作。分別計(jì)算大黃酸的質(zhì)量濃度（C），以lg C對(duì)時(shí)間t作圖，結(jié)果為一直線，表明大黃酸在不同溫度條件下降解為一級(jí)動(dòng)力學(xué)過程。求出25℃不同pH條件下大黃酸的降解動(dòng)力學(xué)方程及線性相關(guān)系數(shù)r、降解速率常數(shù)Ke、半衰期（t1/2），結(jié)果見表3。可見，酸隨著溶液溫度的升高，大黃穩(wěn)定性下降。

表3　溫度對(duì)大黃酸穩(wěn)定性的影響（pH=8，700 lx）

3　討論

大黃酸屬蒽醌類化合物，易發(fā)生氧化還原等降解反應(yīng)，且降解反應(yīng)復(fù)雜［8］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，增加光照強(qiáng)度、升高溫度和增加溶液pH均能加快大黃酸的降解速率，且降解反應(yīng)為一級(jí)動(dòng)力學(xué)過程。

隨溶液pH的升高，大黃酸降解速率明顯加快，大黃酸降解反應(yīng)為一級(jí)動(dòng)力學(xué)過程。當(dāng)溶液pH＞8時(shí)，大黃酸降解反應(yīng)速率迅速增加。隨溫度升高，許多中藥的有效成分會(huì)發(fā)生降解［9］，大黃酸也一樣，降解速率隨溫度升高而加快。當(dāng)光照強(qiáng)度增至2 000 lx時(shí)，大黃酸降解速率迅速增加。故大黃酸試劑應(yīng)盡量避免強(qiáng)光照射，應(yīng)置陰涼通風(fēng)的環(huán)境中，盡量避免在堿性較強(qiáng)的環(huán)境下使用。

［1］Chen WH，Chen J，Shi YP.Anthraquinones and stilbenes from the roots and rhizomesofRhubarb［J］.Asian NatProd Res，2011，13（11）：1036-1041.

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［5］李先端，黃璐琦.炮制對(duì)中藥大黃5種蒽醌成分含量的影響［J］.中國中藥雜志，2005，30（12）：904-943.

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Study on Stability of Rhein

Wang Wenyong1，Tian Yuxian1，Wang Yahong1，Tong Shenghe1，Zhu Xinyan1，Wang Kun2，Han Gang2
（1.Fengrun District People′s Hospital，Tangshan，Hebei，China 064000；2.Pharmaceutical College of Hebei United University，Tangshan，Hebei，China 063000）

Objective To investigate the influence of pH value，temperature and light intensity on the stability of rhein.M ethods The certain concentration of rhein was put into different pH values of buffer solutions and placed under different light intensities and different temperature conditions.The timing sampling was conducted.The change of rhein concentrations was detected by adopting the HPLC method.The rhein degradation rate equation was established by adopting the dynamic method.Results With the increase of pH value，temperature and light intensity，the rhein degradation rate was accelerated.Conclusion The stability of rhein is closely related with pH value，temperature and light intensity.Therefore rhein should be stored in low temperature and lucifugal conditions and should be used in the condition of low pH values.

rhein；stability；pH value；temperature；light intensity；HPLC

R286.0；R282.71

A

1006-4931（2015）16-0028-03

王文永（1962-），男，大學(xué)本科，副主任中藥師，研究方向?yàn)橹兴幓钚猿煞?，（電子信箱?020059619@qq.com；韓剛，大學(xué)本科，教授，研究方向?yàn)橹兴幓钚猿煞旨八幬锒纠韺W(xué)，本文通訊作者，（電話）0315-3726303（電子信箱）tsyxhg@163.com。

2014-10-28）