郭麗徐榮

1.河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院；2.河南省宏力高科技農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司

不同消毒方式對接種雞冠花種子影響的研究

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1.河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院；2.河南省宏力高科技農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司

本研究以雞冠花種子為試材，用75%的乙醇和0.1%升汞（加數(shù)滴吐溫-20）不同時間組合進行消毒處理。結(jié)果表明：在所進行的消毒處理中，以酒精消毒30秒外加HgCl2（加數(shù)滴吐溫-20）消毒10分鐘的處理組合最佳。

雞冠花種子消毒方式

雞冠花（Celosia cristata L.）又名頭狀雞冠、紅雞冠、雞公花，屬于莧科（Amaranthaceae）青葙屬（Celosia），一年生草本植物。莖直立粗壯，葉互生，葉片卵形、卵狀披針形或披針形，寬2～6厘米。花序頂生，成扁平肉質(zhì)雞冠狀、卷冠狀或羽毛狀的穗狀花序，一個大花序下面有數(shù)個較小的分枝，圓錐狀矩圓形，表面羽毛狀，雙性花生于花序基部；花被片紅色、紫色、黃色、橙色或紅色黃色相間［1］。

雞冠花原產(chǎn)東亞及南亞亞熱帶和熱帶地區(qū)，世界各地均有栽培。喜高溫干燥氣候，怕干旱，不耐澇；不耐寒、畏霜凍。適于作一年生花卉露地栽培，矮生種也可盆栽，雞冠花綠化裝飾效果強，還可做切花和干花的材料［2］，學(xué)者們多對雞冠花的藥用、食用價值進行研究，［3，4，5，6］被推測是一種很有開發(fā)利用前景的天然食藥兼?zhèn)涞摹肮δ苄陨亍辟Y源［7］。其含有豐富的營養(yǎng)素及色素，食用安全，有廣闊的開發(fā)利用價值和規(guī)?；a(chǎn)的前景。

采用傳統(tǒng)的播種繁殖，繁殖系數(shù)低。又因異花授粉，天然雜交容易造成品種特征混雜和品種退化，逐漸失去原有價值。留種植株需要注意隔離［8］。應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)則可保持原品種的特性，減少制種的麻煩，還可極大提高繁殖系數(shù)，節(jié)約成本。但是組織培養(yǎng)技術(shù)必須是在無菌環(huán)境下完成的，因此，外植體消毒是重要的，關(guān)系著組培成功與否的首要環(huán)節(jié)［9］。并為組培快繁體系的構(gòu)建、工廠化育苗和品種保持提供理論依據(jù)和參考價值。

一、試驗材料與方法

1.試驗材料

以雞冠花種子（本實驗室提供）為試材。

2.試驗方法

（1）培養(yǎng)條件。培養(yǎng)室溫度為25±2℃，光照12～14小時，光照強度1500～2000 Lx。

（2）種子的無菌萌發(fā)。將種子（用紗布包起）用加中性洗滌劑的自來水浸泡10分鐘，再用自來水沖洗30分鐘，濾干水分，然后置于超凈工作臺上，用75%的乙醇和0.1%升汞（加數(shù)滴吐溫-20）不同時間組合進行消毒處理（見表），之后用無菌水浸洗4～6次，接種于MS培養(yǎng)基上。接種后及時觀察統(tǒng)計，比較各種消毒方式的效果及苗的生長狀況。

二、結(jié)果與分析

外植體的滅菌效果直接影響著試驗的進程。為獲得無菌種子苗，試驗采用了75%乙醇（s）+0.1%升汞（min）兩種消毒劑的5種不同時間（6、8、10、12、14min）處理，比較其對種子的滅菌效果。其結(jié)果如表所示。從表可以看出，消毒時間的長短影響著消毒效果。當(dāng)升汞處理時間為6～8分鐘時，消毒不徹底，存在污染現(xiàn)象；當(dāng)≥10分鐘時，污染率為零。隨著乙醇和升汞處理時間的延長，污染率雖為零，對材料的傷害力卻逐漸增大，致使發(fā)芽時間延長2～3天，甚至一周不等，且萌發(fā)率有所降低。

結(jié)果表明，在所進行的消毒處理中，以酒精消毒30秒外加HgCl2（加數(shù)滴吐溫-20）消毒10分鐘的處理組合最佳，即洗滌劑浸泡10分鐘，自來水沖洗30分鐘，75%乙醇漂洗30 s，0.1%的升汞消毒10分鐘，無菌水沖洗4～6次，無菌率達(dá)100%，芽萌發(fā)率達(dá)100%，出芽所需時間短。而且從后期觀察中發(fā)現(xiàn)無菌苗整齊度高，生長一致。種子從消毒之后，大約經(jīng)過一周左右之后，開始萌發(fā)，12天左右逐漸長出真葉，當(dāng)20天后長出3～4片真葉時，即開始進行下步試驗。

三、結(jié)論與討論

在植物組織培養(yǎng)過程中，造成污染的原因很多，其中外植體帶菌是培養(yǎng)過程中污染的主要原因。對以莖尖做外植體的尤其如此，這是因為枝條長期暴露于自然環(huán)境中，植物體表面攜帶了大量的細(xì)菌和真菌，有些菌類甚至浸入植物組織的內(nèi)部。建立無菌外植體，獲得無菌培養(yǎng)材料是組織培養(yǎng)成功的第一步，而外植體的消毒則是其關(guān)鍵。

外植體消毒不徹底，就得不到無菌材料，組織培養(yǎng)就無法進行；但消毒時間過長時，材料則因較強的毒害作用，同樣影響試驗進程。所以對材料進行處理時，要根據(jù)具體情況來分析區(qū)別對待。從材料本身來講，例如對于種子、地下塊莖等消毒可適當(dāng)延長，而對花藥、莖尖、胚珠等的消毒可適當(dāng)縮短。從選材季節(jié)來說，一般來講，冬春季取材，整個環(huán)境溫度偏低，植物體表菌體含量較少，消毒時間應(yīng)減短，以利于消毒后材料的恢復(fù)生長；夏秋季節(jié)，環(huán)境溫度較高，植物體表菌體含量較多，消毒時間應(yīng)適當(dāng)延長等［10］。

在本試驗中，采用的雞冠花種子較硬且光滑，易消毒，得出用75%乙醇漂洗30秒，0.1%的升汞消毒10分鐘可達(dá)到100%的滅菌效果，但過短或過長的時間都降低了誘導(dǎo)率，浪費種子。所以組織培養(yǎng)中，要根據(jù)材料本身特性等制定合理的外植體消毒處理方案，找出適合的消毒方法，促進試驗的順利開展。

不同消毒處理方式對雞冠花種子的影響

［1］中國植物志［M］.第二十五卷，第二分冊.科學(xué)出版社. 1979，200～201

［2］張樹寶.花卉生產(chǎn)技術(shù)［M］.重慶：重慶大學(xué)出版社. 2008

［3］陳靜，姜秀梅，李坦等.雞冠花止血作用機制研究［J］.北華大學(xué)學(xué)報.2001，2（1）：39～40

［4］李萬里，田玉慧，沈關(guān)心.雞冠花黃酮類對成骨細(xì)胞礦化和IGF-1的作用［J］.中國公共衛(wèi)生.2003，19（11）：1392-1393

［5］Ashraf G.，and Kapoor H.C..Modifications in the purification protocol of celosia critata antiviral proteins lead to protein that can be N-terminally sequenced［J］.protein and peptide.2004，11（6）:555～561

［6］彭子模，高雁，彭宇.新疆雞冠花食用色素粗成分與有害微量元素含量的測定［J］.新疆師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）.2003，22（4）：31-32

［7］李進，彭宇，彭子模等．雞冠花食用色素安全性的研究［J］.生物技術(shù).2004，14（3）：43-45

［8］王秀峰，李憲利.園藝學(xué)各論（北方本）［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2003，458～459

［9］曹春英.花卉栽培.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社［M］.2010

［10］劉青林，馬祎，鄭玉梅.花卉組織培養(yǎng)［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社.2003