張黎君 黃小瑩

（河南化工職業(yè)學(xué)院，河南 鄭州 450000）

新型維甲酸類化合物的合成及生物活性分析

張黎君 黃小瑩

（河南化工職業(yè)學(xué)院，河南 鄭州 450000）

維甲酸類化合物是天然維生素A代謝生成的衍生物，并且涵蓋與其結(jié)構(gòu)相似的人工合成物，截至到目前已發(fā)現(xiàn)4000余種維甲酸類化合物，并且廣泛應(yīng)用于醫(yī)療領(lǐng)域中。由于絕大多數(shù)的維甲酸類化合的醫(yī)療劑量與中度劑量接近，造成醫(yī)療隱患，由此新型維甲酸類化合物的研制合成已勢在必行。

新型；維甲酸；生物活性

新型維甲酸類化合物主要將苯甲醚作為原料，經(jīng)轉(zhuǎn)化反應(yīng)生成硼酸中間體2，將羥基丙酮12作為原料，經(jīng)轉(zhuǎn)化反應(yīng)生成共軛烯烴溴代物3［1］，后硼酸中間體2與共軛烯烴溴代物3、4-溴-2-氟苯甲酸甲酯以及6-溴煙酸甲酯生成得到類似維甲酸化物和1a～1c，經(jīng)測試結(jié)果表明，均具備一定的藥物活性，其中，1b的IC50值更低，醫(yī)用效用良好。

1　合成實(shí)驗(yàn)

1.1試劑與儀器

BrukerAM-400（400MHz）測定核磁共振氫譜、BrukerAM-400（100.6MHz）測定核磁共振碳譜、BrukerAM-400（376.5MHz）測定核磁共振氟譜、Nicolet380FT-IR測定紅外光譜、Fimiigan-MAT-8430測定MS、WRS-2A顯微熔點(diǎn)測定儀測定熔點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用的化學(xué)試劑均由薩恩化學(xué)有限公司與上海泰坦科技有限公司提供，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用的分析純?nèi)芤壕缮虾Ａ璺寤瘜W(xué)試劑有限公司與上海政創(chuàng)公司提供，中國科學(xué)院細(xì)胞庫贊助人原髓細(xì)胞紅血病細(xì)胞。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.11a的合成

將甲苯（8ml）、四（三苯基膦）鈀（0.057mol，0.065g）、共軛烯烴溴代物3（1.9mmol，0.5g）、硼酸中間體2（1.9mmol，0.5g）的混合溶液中滴入碳酸鈉溶液（4.0mmol，2mL），規(guī)格為2.0mol/L，于85攝氏度環(huán)境下反應(yīng)2h，結(jié)束后冷卻，加水淬滅。使用乙酸乙醚（5mL×3）對反應(yīng)液進(jìn)行萃取，隨后洗滌，用無水硫酸鈉過濾干燥，在快速柱層析分離后得到偶聯(lián)產(chǎn)物——黃色固體（1.7mmol，0.7g），88%產(chǎn)率，HRMS（ESI）calcd forC28H38NaO3［M+Na］+445.2714，found445.2693。

于10mL乙醇中溶入偶聯(lián)產(chǎn)物（0.2mmol，84mg），隨后加入NaOH溶液（4.0mmol，0.5mL，2mol·L-1），待反應(yīng)12h后冷卻，隨后使用鹽酸（1mol L-1）調(diào)配PH值為2，使用乙酸乙醚（5mL×3）對反應(yīng)液進(jìn)行萃取，隨后洗滌，用無水硫酸鈉過濾干燥，經(jīng)快速柱層析分離提純，最終得到1a，67%產(chǎn)率。HNMR（400MHz）δ：1.29（s，6H）、1.36（s，6H）、1.72（s，4H）、2.05～2.00（m，2H）、2.25（s，3H）、2.70（t，J= 4.0Hz，2H）、2.93（t，J=4.0Hz，2H）、3.82（s，3H）、4.22（q，J= 8.0Hz，2H）、5.84（s，1H）、6.26（d，J=16.0Hz，1H）、6.84（s，1H，ArH）、6.92（d，J=1.60Hz，1H）、7.03（s，1H，ArH）；CNMR（100MHz，CDCl3）δ：13.92，22.39，31.78，31.92，32.70，33.68，34.59，35.15～，35.23，38.16，55.38，108.64，117.16，124.12，129.53，131.57，131.89，136.63，136.76，145.61，146.28，155.10，155.91，171.53；IR（KBr）v：805，1047，1188，1262，1462，1499，1594，1676，2854，2927，2958，3419cm-1；HRMS（ESI）calcd for C26H33O3［M+Na］+393.2436，found1393.2429。

1.2.21b的合成

1b合成方法與1a相同，在100攝氏度下與硼酸中間體2、4-溴-2-氟苯甲酸甲酯反應(yīng)12h后生成偶聯(lián)產(chǎn)物——無色液體，88%產(chǎn)率，HRMS（ESI）calcd for C23H27FNaO3［M+Na］+393.1827，found393.1829。

偶聯(lián)產(chǎn)物經(jīng)堿性水解后，最終得到白色固體1b，97%產(chǎn)率。HNMR（400MHz，CDCl3）δ：1.36（s，6H）、1.40（s，6H）、1.77（s，6H）、3.88（s，6H）、3.97（s，1H，ArH）、7.33（s，1H，ArH）、7.50～7.46（m，2H，ArH）、8.15～8.11（m，1H，ArH）；CNMR（100MHz，CDCl3）δ：117.90（d，JF，C=23.0Hz），31.84、31.97、33.82、34.73、35.12、55.59、109.15、115.40，118.12（d，JF，C=23.0Hz），126.16（d，JF，C=3.0Hz），126.19（d，JF，C=3.0Hz），146.93（d，JF，C=10.0Hz），147.03（d，JF，C= 10.0Hz），162.07（d，JF，C=259.0Hz），163.66（d，JF，C= 259.0Hz）；IR（KBr）v：704、735、882、1198、1622、1685、2858、2929、2964cm-1；HRMS（ESI）calcd for C22H24FO3［M+ Na］+355.1712，found355.1716。

1.2.31c的合成

1c合成方法與1a相同，在100攝氏度下由硼酸中間體2、6-溴煙酸甲酯反應(yīng)12h后生成偶聯(lián)產(chǎn)物——白色固體，63.5%產(chǎn)率，HRMS（ESI）calcd for C22H28NO3［M+Na］+354.2065，found354.2050。

偶聯(lián)產(chǎn)物經(jīng)堿性水解后，最終得到白色固體1c，100%產(chǎn)率。HNMR（400MHz，DMSO-d6）δ：1.26（s，6H）、1.32（s，6H）、1.67（s，4H）、3.85（s，3H）、7.03（s，1H）、7.78（s，1H）、7.98（d，J=8.0Hz，1H）、8.27（d，J=8.0Hz，1H）；CNMR（100MHz，DMSO-d6）δ：31.92、32.19、33.85、34.89、35.09、56.17、110.02、125.63、124.71、125.59、129.28、137.13、137.26、148.17、150.56、155.41、159.30、166.82；IR（KBr）v：738、795、864、1192、1604、1709、2858、2924、2963 cm-1；HRMS（ESI）calcd for C21H24NO3［M+Na］+338.1763，found338.1761。公式反應(yīng)如圖1所示。

圖1　

2　合成物誘導(dǎo)腫瘤分化活性分析

細(xì)胞平水評價實(shí)驗(yàn)主要利用HL-60細(xì)胞實(shí)現(xiàn)，在5%二氧化碳和37℃環(huán)境下置于細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)持續(xù)生長，并且應(yīng)用DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)，于高糖培養(yǎng)基中加入10%滅活胎牛血清、鏈霉菌（100μ/mL）和青霉素（100units/mL），進(jìn)行細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)之前，需要提前一天于96孔板內(nèi)種植1×104個/孔，其次，應(yīng)用噻唑藍(lán)方法對各材料的細(xì)胞毒性進(jìn)行分析考察。

通過噻唑藍(lán)法測量得到1a～1c的藥物活性，將HL-60細(xì)胞植入孔板過夜孵化后，將一定量的1a～1c溶于PBS緩沖液（內(nèi)含0.5%DMSO），制成10μmol·L-1濃度的目標(biāo)分子1a～1c溶液，并分別稀釋到0.1μmol·L-1、0.5μmol· L-1、1μmol·L-1、5μmol·L-1，將不同濃度的分子目標(biāo)孵化HL-60細(xì)胞2d后，融入20μ噻唑藍(lán)，孵化兩小時后應(yīng)用平板離心機(jī)離心96孔板，5min后倒掉溶液，置入DMSO200μL，震搖20min，最后用酶標(biāo)儀得到測量結(jié)果，該實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用作1a～1c三個維甲酸類似物的誘導(dǎo)腫瘤分化活性分析。

在合成出1a～1c三個維甲酸類似物后，將全反式維甲酸作為對照材料，以白血病細(xì)胞株HL-60為例，對1a～1c的誘導(dǎo)腫瘤分化活性進(jìn)行分析（利用DMSO溶液在570nm的吸收值算出活細(xì)胞數(shù)量，進(jìn)而分析各分子誘導(dǎo)分化能力的，并且計算半濃度抑制值—IC50）。

測試結(jié)果表明，1a～1c濃度升高后HL-60的細(xì)胞活性均有所降低，代表1a～1c化合物均具備生物活性，經(jīng)計算，1b的IC50值在三者中最低，呈現(xiàn)優(yōu)異的藥物活性，由于維甲酸藥物的中毒計量接近于治療計量，所以C50值最低的1b新型維甲酸類化合物的藥用價值更高。

3　結(jié)語

通過反應(yīng)合成1a～1c維甲酸類化合物，其中1b（C22H24FO3）的IC50值更低，降低醫(yī)療隱患發(fā)生率，其次，根據(jù)試驗(yàn)可得新型維甲酸類化合物的藥用價值更高，具備良好的安全性和發(fā)展前景，值得在醫(yī)療領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。

［1］張媛媛，徐愛暉.維甲酸類化合物的作用機(jī)制及對肺腫瘤的研究進(jìn)展［J］.臨床肺科雜志，2010，15（4）：529-531.

Synthesisand Biological Activity Analysisof a New Typeof Retinoic Acid

Zhang Lijun Huang Xiaoying
（Henan Vocational College of Chemical Technology，Zhengzhou Henan450000）

Retinoic acid compounds arederivativesgenerated by natural vitamin A metabolism，and containthe synthetic material withsimilarstructure，more than 4000 kinds of retinoic acid compounds have been found so far，and are widely used in the medical field.Due tothe medical dosageof most retinoic acidcompounds is close to moderate dose，it will cause health risks，thereby research&development and synthesis of a novel retinoid compound is imperative under the situation.

novel；retinoic acid；biological activity

TQ463

A

1003-5168（2015）12-0151-2

2015-11-30

張黎君（1989.3-），女，本科，助教，研究方向：應(yīng)用化學(xué)。