朱春霞　秦麗君★

柳氮磺胺吡啶及美沙拉嗪對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎結(jié)腸黏膜Reg ⅠV蛋白表達(dá)的影響及意義

朱春霞秦麗君★

目的 探討柳氮磺吡啶（SASP）及美沙拉嗪對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎結(jié)腸黏膜Reg ⅠV蛋白表達(dá)的影響及意義。方法 收集潰瘍性結(jié)腸炎患者60例，分成SASP組（A組）和美沙拉嗪組（B組），隨訪及治療8周后復(fù)查腸鏡及黏膜活檢，通過(guò)RT-PCR、免疫組化檢測(cè)Reg Ⅳ表達(dá)水平。結(jié)果 RT-PCR、免疫組化結(jié)果提示Reg Ⅳ在兩組治療前表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后兩組表達(dá)均明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；美沙拉嗪組下降水平＞SASP組（P＜0.05）；Reg ⅠV表達(dá)水平與潰瘍性結(jié)腸炎活動(dòng)度呈正相關(guān)（r=0.872，P＜0.001）。結(jié)論 美沙拉嗪較柳氮磺胺吡啶對(duì)Reg Ⅳ有更強(qiáng)的抑制作用。

潰瘍性結(jié)腸炎 Reg Ⅳ 柳氮磺胺吡啶 美沙拉嗪

潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative colitis，UC）是一種病因尚不清楚的直腸和結(jié)腸慢性非特異炎癥性疾病，癌變是其嚴(yán)重的并發(fā)癥之一。國(guó)外有報(bào)道起病20年和30年后癌變率分別為7.2%和16.5%，雖然潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)癌（UC-CRC）只占所有結(jié)腸癌的1%～2%，但是卻占UC患者死亡原因的10%～15%［1］。再生基因IV（Reg Ⅳ）是鈣依賴的植物血凝素超家族成員之一，于2001首次從炎癥性腸病患者中被分離［2］，是消化系統(tǒng)腫瘤發(fā)生的早期標(biāo)志物。作者通過(guò)檢測(cè)UC患者分別應(yīng)用SASP及美沙拉嗪治療前后結(jié)腸黏膜中Reg IV蛋白表達(dá)水平，分析其表達(dá)水平變化的情況，探討兩者對(duì)結(jié)腸黏膜中Reg IV蛋白的表達(dá)方面是否存在差異。報(bào)道如下。

1　臨床資料

1.1一般資料 選取2011年1月至2014年1月在本院消化內(nèi)科門(mén)診和住院患者60例，征求受檢者同意后，經(jīng)結(jié)腸鏡及組織病理學(xué)檢查確診，并同意隨訪及8周后復(fù)查腸鏡及病理學(xué)檢查；均選擇輕、中型UC患者，初發(fā)型、慢性復(fù)發(fā)型及慢性持續(xù)型均可，需處活動(dòng)期，即疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）≥3（采用改良型Mayo評(píng)分評(píng)價(jià)潰瘍性結(jié)腸炎活動(dòng)指數(shù)）。隨機(jī)分為A組和B組，二組年齡、性別、病程等一般情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器和血液、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病者。（2）有活動(dòng)性胃、十二指腸潰瘍者。（3）消化道腫瘤者。（4）有腸道切除手術(shù)者。（5）孕婦、哺乳期婦女。（6）有水楊酸制劑及磺胺類(lèi)藥物過(guò)敏或過(guò)敏體質(zhì)者。（7）精神病患者。所有患者必須停用一切影響UC的藥物≥1周（包括激素、SASP、中藥等）。

1.2方法 （1）藥物治療：A組：予SASP腸溶片（山西三九同達(dá)公司）1.0，口服，4次/d，療程8周。B組：予美沙拉嗪腸溶片（愛(ài)的發(fā)制藥公司）1.0口服，4次/d，療程8周。（2）熒光定量PCT（RT-PCR）：將腸黏膜組織標(biāo)本用液氮研磨成粉末后，加1ml TRIZOL（BBI）抽提Total RNA，采用NanoDrop? ND-2000測(cè)定RNA濃度和純度，根據(jù)RNA濃度結(jié)果將各組調(diào)成一致的濃度，再應(yīng)用RT試劑（Takara）將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。定量PCR引物如下：GAPDH正義鏈：5'-TCAACGACCACTTTGTCAAGCTCA-3'，反義鏈：5'-GCTGGTGGTCCAGGGGTCTTACT-3'；Reg IV正義鏈：5'-CTGCTCCTATTGCTGAGCTG-3'，反義鏈：5'-GGACTTGTGGTAAAACCATCCAG-3'。定量PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)熱2min，95℃解鏈10s，擴(kuò)增：40循環(huán)95℃/10s，60℃/34 s，72 ℃/15 s；擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，按95℃/10s；60℃/60s；95℃/15s的反應(yīng)條件建立PCR產(chǎn)物熔解曲線；數(shù)據(jù)采用2-△△CT法進(jìn)行分析。（3）免疫組化：兩組均進(jìn)行免疫組化SABC染色。一抗工作濃度為1 ∶ 50～1 ∶ 100?？乖瓱嵝迯?fù)，UEF顯色，蘇木精復(fù)染。所有切片均進(jìn)行HE常規(guī)染色。以上步驟均按說(shuō)明書(shū)操作，嚴(yán)格控制時(shí)間及溫度，每次染色設(shè)陽(yáng)性對(duì)照，PBS 替代一抗作為陰性對(duì)照。由兩名病理科醫(yī)師采用盲法獨(dú)立判定免疫組化染色的結(jié)果。隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例分為Ⅳ級(jí)：陰性（-）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)0%～5%、弱陽(yáng)性（+）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)6%～25%、陽(yáng)性（++）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)26%～75%、強(qiáng)陽(yáng)性（+++）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞76%。陽(yáng)性表達(dá)率以（++）和（+++）之和占總例數(shù)的百分比表示。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用One-Way ANOVA分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，Reg IV與潰瘍性結(jié)腸炎活動(dòng)度相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1SASP及美沙拉嗪治療前后Reg Ⅳ的表達(dá)情況 治療前，患者腸黏膜Reg ⅣmRNA表達(dá)無(wú)明顯差異（P＜0.05）；治療后患者腸黏膜Reg Ⅳ表達(dá)均低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），兩組均較治療前明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療后美沙拉嗪組Reg IV水平下降＞SASP組（P＜0.05）。SASP治療后Reg Ⅳ的表達(dá)情況：0（11 例，36.7%），1+（11例，36.7%），2+（8例，26.7%），3+（0例）；而美沙拉嗪治療后Reg IV的表達(dá)情況：0（17 例，56.7%），1+（9例，30%），2+（4例，13.3%），3+（0例）。見(jiàn)圖1、2。

圖1　SASP及美沙拉嗪治療前后Reg Ⅳ mRNA的表達(dá)情況

圖2　Reg Ⅳ在UC患者中的表達(dá)情況

2.2Reg IV與UC活動(dòng)度之間的關(guān)系 Reg Ⅳ在兩組治療前后的變化與CAI指數(shù)在兩組治療前后的變化呈正相關(guān)（P＜0.01）。治療前，Reg Ⅳ不同染色強(qiáng)度中 CAI 分別為1+（3.75±0.96）、2+（7.16±1.33）和3+（10.63±1.12）；治療后，Reg Ⅳ不同染色強(qiáng)度中CAI 分別為 0+（3.29±1.33）、1+（7.06±1.56）和 2+（8.93±0.92）；強(qiáng)表達(dá)Reg Ⅳ的患者CAI 指數(shù)較弱表達(dá) Reg Ⅳ患者的明顯升高（P＜0.05）。

3　討論

Reg IV是再生基因家族中的一員，作為一種新發(fā)現(xiàn)的基因，其生物學(xué)功能尚無(wú)明確定論。Reg Ⅳ主要位于胃腸道，包括結(jié)腸、小腸、胃和胰腺［3，4］。RegⅣ蛋白是選擇性表達(dá)于胰腺和胃腸道上皮的小分子分泌性蛋白，參與消化系統(tǒng)上皮細(xì)胞的增殖、再生和炎性、化生反應(yīng)，并與消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。賴明廣等［5］認(rèn)為Reg IV可作為預(yù)測(cè)UC活動(dòng)度的一個(gè)獨(dú)立指標(biāo)。在結(jié)腸、膽囊及胃等腫瘤組織中均可發(fā)現(xiàn)Reg IV蛋白表達(dá)水平增高［3，4，6～9］，目前UC已被公認(rèn)為是大腸癌的危險(xiǎn)因素之一，近10年來(lái)我國(guó)UC的發(fā)患者數(shù)增加了3倍，預(yù)示UC-CRC的風(fēng)險(xiǎn)增加，UC患者患結(jié)腸癌的風(fēng)險(xiǎn)每年增加約0.5%～1.0%［10］。因此，指導(dǎo)臨床如何選擇合理有效的治療及預(yù)防UC-CRC的發(fā)生，從而改善預(yù)后、提高UC患者生存質(zhì)量顯得十分重要。結(jié)腸黏膜Reg IV蛋白的檢測(cè)已經(jīng)成為人們探索UC早期發(fā)生癌變等病理過(guò)程的新手段。根據(jù)本資料結(jié)果，作者認(rèn)為美沙拉嗪較SASP能更有效的抑制Reg IV的表達(dá)，因此美沙拉嗪較SASP具有更好的化學(xué)預(yù)防作用，但本次試驗(yàn)標(biāo)本量小，有待于進(jìn)一步探討。

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Objective To explore the effects of sulfasalzine and mesalazine on the expression of Reg ⅠV in mucosa with ulcerative colitis and its signifi cance. Methods Sixty patients with ulcerative colitis were included in the study，they were randomized in Sulfasalzine and Mesalazine therapy groups，8 weeks after two kinds of therapy，they were undergone colonoscopy examination and mucosa biopsy， Reg ⅠV expression was investigated by RT-PCR and Ⅰmmunohistochemical staining. Results RT-PCR and immunohistochemistrical staining for Reg Ⅳ after the therapy in the mucosa was signifi cantly lower than that before the therapy in ulcerative colitis （P＜0.05）. Mesalazine therapy group signifi cantly decreased Reg ⅠV level than Sulfasalzine therapy group. There was a positive correlation between Reg ⅠV and CAⅠ （the colitis activity index） expression in UC（r = 0.872，P＜0.001）. Conclusion Mesalazine signifi cantly inhibits Reg ⅠV levels than Sulfasalzine.

Ulcerative colitis Reg ⅠV Sulfasalzine Mesalazine

315020 浙江省寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院