張 堯， 桂紅星， 李積華， 郭宏斌， 郭建峰*， 張建平

(1.中北大學(xué)化工與環(huán)境學(xué)院，山西太原 030051；2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，廣東湛江 524001)

圖1

白堅(jiān)木皮醇(L-Quebrachitol)，化學(xué)名稱為：2-甲氧基-L-(-)-手性-肌醇，它是一種具有極高藥用價(jià)值的左旋天然化合物[1]。白堅(jiān)木皮醇分子量194.18，是無色晶體，熔點(diǎn)為191～193 ℃，沸點(diǎn)為210 ℃，比旋光度α=-80.2(5%水溶液)，易溶于水、乙酸和吡啶，不溶于乙醚[2]。具有特殊手性結(jié)構(gòu)的白堅(jiān)木皮醇在活體生物代謝中起著“細(xì)胞內(nèi)部信息傳遞”和“控制細(xì)胞生長過程”的重要作用[3]。白堅(jiān)木皮醇可用于治療胃損傷[4]、神經(jīng)退行性疾病、癌癥、糖尿病和艾滋病[5]等疾病，且具有清除自由基的特殊功效[6]，其用作放射治療的預(yù)防藥物，能清除輻射后生物大分子生成的自由基，并可直接將其作為治療、保健等藥物[7]。

目前，已報(bào)道的白堅(jiān)木皮醇檢測主要有紅外光譜法、單晶衍射法[8]、核磁共振法[9]、親水色譜-二極管陣列檢測法[10]等，但用親水作用色譜與蒸發(fā)光散射檢測器(ZIC-HILIC-ELSD)測定白堅(jiān)木皮醇含量的方法尚未見報(bào)道。本研究采用ZIC-HILIC-ELSD法定量分析白堅(jiān)木皮醇，與其他的方法相比，該測定方法具有簡便、快速、精密度和準(zhǔn)確度好等優(yōu)點(diǎn)，適合于從復(fù)雜體系中快速檢測白堅(jiān)木皮醇的含量。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

ZIC-HILIC(德國，默克公司)；Chromachem蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)(美國，ESA公司)；超聲波清洗機(jī)(生元儀器公司)。

白堅(jiān)木皮醇對(duì)照品(Sigma公司)溶液：精確稱取80 mg白堅(jiān)木皮醇對(duì)照品，置于10 mL容量品中，用超純水稀釋、定容，配成8 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液。乙腈(色譜純，河北四友卓越科技有限公司)；白堅(jiān)木皮醇樣品由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所提供。實(shí)驗(yàn)用水為超純水(阿修羅超純水機(jī))。

1.2 色譜條件與ELSD參數(shù)

色譜柱：Merck ZIC-HILIC色譜柱(150×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相：乙腈∶水=70∶30(V/V)；流速：1 mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣體積：20 μL。蒸發(fā)光散射檢測器條件：蒸發(fā)溫度：65 ℃；霧化溫度：50 ℃；霧化氣體：高純氮?dú)?9.9 MPa)。

1.3 樣液處理

取80 mg從制膠廢水樣品中提取的白堅(jiān)木皮醇，用超純水配制成8 mg/mL的樣品溶液。進(jìn)樣前，均經(jīng)0.45 μm濾膜過濾。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜柱和檢測器的選擇

白堅(jiān)木皮醇是具有強(qiáng)極性的親水化合物[11]，使用傳統(tǒng)的反相色譜很難將其分離[12]。ZIC-HILIC色譜柱采用的是硅膠表面共價(jià)鍵合磺酸甜菜堿型兩性離子官能團(tuán)[13，14]的固定相，其表面具有親水的陰、陽離子基團(tuán)，能夠高度水化，從而使親水性物質(zhì)白堅(jiān)木皮醇在色譜柱內(nèi)有所保留。

ELSD是通用型檢測器，可以檢測揮發(fā)性低于流動(dòng)相的任何樣品，而不需要樣品含有發(fā)色基團(tuán)。且ELSD靈敏度比示差折光檢測器高，對(duì)溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定。白堅(jiān)木皮醇沒有紫外特征吸收峰，用ELSD作檢測器無需對(duì)樣品進(jìn)行復(fù)雜的前處理和衍生化，從而不會(huì)受到其他成分的干擾，可以快速準(zhǔn)確測量。

2.2 流動(dòng)相的選擇

通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，選擇流動(dòng)相為乙腈∶水=7∶3(V/V)時(shí)，色譜峰峰形最好，白堅(jiān)木皮醇的保留時(shí)間約為3.6 min。

2.3 檢測器條件的篩選

2.3.1蒸發(fā)溫度的選擇當(dāng)霧化溫度為45 ℃，流動(dòng)相乙腈-水體積比為70∶30時(shí)，改變蒸發(fā)溫度，根據(jù)4 mg/mL 對(duì)照品的響應(yīng)峰面積進(jìn)行最佳蒸發(fā)溫度的選擇。結(jié)果表明，隨著蒸發(fā)溫度的升高，白堅(jiān)木皮醇對(duì)照品的響應(yīng)峰面積呈增加趨勢(shì)。至65 ℃后略有下降。因此選擇65 ℃為最佳蒸發(fā)溫度。

2.3.2霧化溫度的選擇當(dāng)蒸發(fā)溫度為65 ℃，流動(dòng)相乙腈-水配比為70∶30時(shí)，改變霧化溫度，根據(jù)白堅(jiān)木皮醇對(duì)照品的響應(yīng)峰面積選擇最佳霧化溫度。結(jié)果表明當(dāng)霧化溫度高于50 ℃時(shí)，隨著溫度的升高，響應(yīng)峰面積開始下降，因此選擇50 ℃為最佳霧化溫度。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

對(duì)4 mg/mL白堅(jiān)木皮醇標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行6次平行試驗(yàn)，每次進(jìn)樣量為20 μL，測得結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.48%，保留時(shí)間的RSD為0.92%。

2.5 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

對(duì)0.4 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行0.5 mg、1.0 mg和2.0 mg三水平加入回收實(shí)驗(yàn)，平均回收率為100.3%，滿足分析要求。

2.6 樣品分析

取4 mg/mL白堅(jiān)木皮醇樣品溶液，按上述色譜條件，采用外標(biāo)法進(jìn)行定量測定，其RSD為0.75%(n=3)。 圖2是白堅(jiān)木皮醇對(duì)照品和樣品的ELSD譜圖。

圖2 白堅(jiān)木皮醇標(biāo)準(zhǔn)(a)和樣品(b)的色譜圖

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，應(yīng)用ELSD對(duì)溶液中白堅(jiān)木皮醇進(jìn)行定量分析是完全可行的。與前人建立的方法相比較，本方法無需對(duì)樣品進(jìn)行復(fù)雜的前處理和衍生化，實(shí)現(xiàn)有效分離和檢測的時(shí)間可控制在5 min內(nèi)；同時(shí)精密度較高，重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度良好，操作也相對(duì)簡單易行，所以蒸發(fā)光散射檢測器在檢驗(yàn)復(fù)雜體系中白堅(jiān)木皮醇含量及測定白堅(jiān)木皮醇產(chǎn)品的純度時(shí)具有良好的應(yīng)用前景。