余佳平

干擾素聯(lián)合阿德福韋酯抗HBV治療對外周血IFN-γ、IL-10表達(dá)水平的影響

余佳平

目的探討慢性乙型肝炎患者接受干擾素α-2a（INFα-2a）聯(lián)合阿德福韋酯（ADV）抗病毒治療，血清IFN-γ、IL-10細(xì)胞因子水平的變化及與肝功能ALT恢復(fù)、血清HBV DNA含量變化的關(guān)系。方法 106例HBe Ag（+）慢性乙型肝炎患者接受干擾素α-2a和阿德福韋酯抗病毒治療，ELISA法檢測治療前及治療48周后IFN-γ、IL-10的血清濃度變化，并同時(shí)檢測肝功能ALT、HBV DNA含量的變化。結(jié)果 106例HBe Ag（+）慢性乙型肝炎患者治療48周后，94例患者ALT恢復(fù)正常，占88.7％，72例HBV DNA＜102拷貝/m L，占67.9％，51例發(fā)生HBe Ag血清學(xué)轉(zhuǎn)換，比例為48.1％。HBeAg/HBeAb轉(zhuǎn)換組的IFN-γ表達(dá)水平高于HBe Ag未變化組和轉(zhuǎn)陰組（P＜0.05）；IL-10表達(dá)水平低于HBe Ag未變化組（P＜0.05）和HBeAg轉(zhuǎn)陰組（但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05）；HBe Ag/HBe Ab轉(zhuǎn)換組、HBe Ag未變化組及轉(zhuǎn)陰組的IFN-γ和IL-10水平均高于對照組（P＜0.05）。結(jié)論 細(xì)胞因子IFN-γ、IL-10與慢性乙型肝炎干擾素聯(lián)合阿德福韋酯抗病毒治療后血清ALT復(fù)常及HBV DNA含量下降相關(guān)，T h1/T h2亞群細(xì)胞因子平衡是促進(jìn)肝功能ALT恢復(fù)、HBe Ag血清轉(zhuǎn)換及HBV DNA含量下降的重要因素之一。

慢性乙型肝炎；干擾素α-2a；阿德福韋酯；細(xì)胞因子

乙型肝炎病毒（HBV）感染是一個(gè)全球關(guān)注的健康問題，細(xì)胞因子在慢性乙型肝炎（CHB）發(fā)病機(jī)制及治療中的作用一直備受人們的關(guān)注。T淋巴細(xì)胞是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞因子是T細(xì)胞功能的執(zhí)行者，Th1亞群細(xì)胞因子主要有IL-2、IFN-γ，Th2亞群細(xì)胞因子主要有IL-4、IL-10［1］。本研究通過檢測慢性乙型肝炎患者接受干擾素α-2a及阿德福韋酯治療前后血清中IL-10和IFN-γ的水平變化，分析核苷（酸）類似物抗病毒不同療效者IFN-γ和IL-10表達(dá)水平差別，探討細(xì)胞因子與肝功能恢復(fù)及乙型肝炎病毒含量變化的關(guān)系及意義。

資料和方法

一、病例選擇

2013年1月—2014年12月在湖北省通城縣人民醫(yī)院感染病科門診和收治的HBe Ag陽性CHB患者106例，診斷參照2010年中國《慢性乙型肝炎防治指南》的標(biāo)準(zhǔn)［2］，患者血清HBs Ag和HBe Ag陽性6個(gè)月以上，ALT為正常上限的2～10倍，無黃疸，血清HBV DNA≥2.0×104IU/m L。排除標(biāo)準(zhǔn)：①使用PEG-IFNα-2a和ADV治療前6個(gè)月，使用過其他抗病毒藥物；②6個(gè)月內(nèi)使用過放、化療藥物或免疫抑制劑的患者；③合并有HAV、HCV、HDV、HEV、HIV、EBV感染；④伴有其他嚴(yán)重疾病（如自身免疫性肝病、酒精性肝病、代謝性肝病、中毒性肝病患者；精神疾病，甲狀腺功能亢進(jìn)）；⑤孕婦或哺乳期婦女。HBe Ag陽性的慢性乙型肝炎患者106例，年齡24～75歲，平均年齡40.15歲。所有入選患者均采用干擾素α-2a聯(lián)合阿德福韋酯抗病毒治療?？共《局委?8周后，依據(jù)HBe Ag的變化，分為HBe Ag未變化組、HBe Ag血清學(xué)轉(zhuǎn)換組、HBe Ag轉(zhuǎn)陰組。對照組為HBV血清抗原抗體系統(tǒng)均陰性、肝功能正常，并排除患有其他病毒性肝炎和免疫性疾病的20例健康體檢者，所有研究對象簽定知情同意書。

二、治療方法

治療組106例患者給予阿德福韋酯（賀維力）10 mg/d口服及干擾素α-2a（安福隆）500萬U肌肉注射，隔天1次，共治療48周。

三、實(shí)驗(yàn)方法及觀察指標(biāo)

治療前及治療12周、24周、48周檢測ALT、HBV DNA、乙型肝炎病毒標(biāo)志物、IL-10和INF-γ水平。采用AbboR000免疫化學(xué)發(fā)光法檢測血清乙型肝炎病毒標(biāo)志物（美國Abbott公司）；采用熒光定量PCR法檢測血清HBV DNA定量（上海羅氏公司）；使用美國Beckman全自動(dòng)生化儀及其配套試劑檢測ALT；采用雙抗體夾心ELISA法檢測INF-γ和IL-10（北京四正柏生物科技有限公司）；采用Achitect （Abbott）微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測HBe Ag定量（美國Abbott公司）。對照組為健康體檢者，檢測細(xì)胞因子IFN-γ、IL-10，血液標(biāo)本采集及檢測方法與治療組相同。

四、療效標(biāo)準(zhǔn)

ALT恢復(fù)正常，HBV DNA陰轉(zhuǎn)，定量＜5.0×102拷貝/m L，HBe Ag陰轉(zhuǎn)或出現(xiàn)HBe Ag血清學(xué)轉(zhuǎn)換。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以（ˉx±s）表示，兩組間均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，IFN-γ、IL-10與HBV DNA含量變化相關(guān)性以直線相關(guān)性分析評價(jià)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)　果

一、CHB患者治療前后肝功能及HBV DNA變化的比較

應(yīng)用阿德福韋酯聯(lián)合干擾素α-2a治療48周后，94例患者ALT恢復(fù)正常，占88.7％，72例HBV DNA＜102拷貝/m L，占67.9％?；颊吒喂δ苤笜?biāo)好轉(zhuǎn)，HBVDNA水平下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表1）。

二、CHB患者治療前后IFN-γ、IL-10水平的變化

應(yīng)用阿德福韋酯聯(lián)合干擾素α-2a治療48周后，患者INF-γ水平顯著高于治療前，而IL-10水平顯著低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表1）。

三、CHB患者經(jīng)核苷（酸）類似物抗病毒治療后，HBe Ag不同轉(zhuǎn)歸組及與對照組血清IFN-γ和IL-10水平表達(dá)情況比較

HBe Ag轉(zhuǎn)換組的IFN-γ表達(dá)水平顯著高于HBeAg未變化組（P＜0.05）和轉(zhuǎn)陰組（P＜0.05），而IL-10表達(dá)水平低于未變化組（P＜0.05），較轉(zhuǎn)陰組降低，但差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；轉(zhuǎn)陰組和未變化組的IFN-γ、IL-10水平的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；未變化組、轉(zhuǎn)換組和轉(zhuǎn)陰組的IFN-γ、IL-10水平與對照組相比均升高（P＜0.05，見表1）。

四、HBV DNA變化與IFN-γ、IL-10水平的關(guān)系

直線相關(guān)分析，轉(zhuǎn)換組HBV DNA含量變化與IFN-γ血清水平成負(fù)相關(guān)（r=-0.751），與IL-10血清水平成正相關(guān)（r=0.813）。

表1　治療前后患者血清ALT、HBV DNA含量、IFN-γ、IL-10水平變化（ˉx±s）

討　論

機(jī)體Th1/Th2應(yīng)答的動(dòng)態(tài)平衡是機(jī)體免疫處于正常狀態(tài)的保證［3］。乙型肝炎病毒感染所誘發(fā)的免疫損傷是乙型肝炎發(fā)病的重要機(jī)制之一，而宿主免疫耐受或免疫功能的平衡紊亂是乙型肝炎發(fā)生慢性化的重要原因［4］。這種失衡又體現(xiàn)在細(xì)胞因子失調(diào)［5］，表現(xiàn)形式為Th2應(yīng)答占有優(yōu)勢。IL-10主要由Th2細(xì)胞產(chǎn)生，是一種強(qiáng)有力的免疫和炎癥抑制因子，它不僅抑制Th1型細(xì)胞免疫反應(yīng)，還抑制Th1型細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-2、IL-3、IFN-γ等引發(fā)機(jī)體對HBV的免疫耐受［6，7］，從而使Th1主導(dǎo)的細(xì)胞免疫功能受到抑制，抑制了機(jī)體對HBV的清除［8，9］。

本試驗(yàn)中，經(jīng)過抗病毒治療后，達(dá)到HBV DNA檢測不到、ALT復(fù)常的CHB患者，無論是否發(fā)生HBe Ag/HBe Ab血清學(xué)轉(zhuǎn)換以及HBe Ag轉(zhuǎn)陰，其血清IFN-γ表達(dá)水平都高于正常對照組，說明在不損傷肝細(xì)胞的情況下，IFN-γ發(fā)揮著抑制HBV復(fù)制的作用，與Guidotti等學(xué)者［10-14］觀點(diǎn)相一致。有研究表明，慢性乙型肝炎患者在HBV DNA復(fù)制期，T細(xì)胞亞群存在著明顯的紊亂，激活Th1型免疫是成功抗病毒治療的共同機(jī)制［15，16］。本試驗(yàn)中，在HBe Ag不同轉(zhuǎn)歸組不僅IFN-γ表達(dá)水平均增高，IL-10表達(dá)水平也均高于正常對照組，提示經(jīng)過阿德福韋酯及干擾素α-2a抗病毒治療后，機(jī)體免疫反應(yīng)處于激活狀態(tài)，表現(xiàn)為抗炎因子和抑炎因子的表達(dá)水平均明顯上調(diào)的Th1或Th2應(yīng)答占有優(yōu)勢的特征，因此，此時(shí)單獨(dú)檢測某一種細(xì)胞因子不能正確判斷機(jī)體的免疫狀態(tài)。HBeAg轉(zhuǎn)換組的IFN-γ水平明顯高于未變化組；而IL-10水平低于未變化組，提示轉(zhuǎn)換組的Th1型免疫處于優(yōu)勢地位；未變化組的Th2型免疫處于優(yōu)勢地位。完全應(yīng)答患者，Th1細(xì)胞因子水平升高，Th2細(xì)胞因子水平降低，免疫平衡恢復(fù)，促進(jìn)HBV的清除。因此，對于慢性乙型肝炎接受抗病毒治療的患者，檢測血清Th1細(xì)胞因子和Th2細(xì)胞因子血清濃度的變化，Th1/Th2平衡的改變來判斷機(jī)體免疫功能的改變，有可能作為評價(jià)抗病毒治療病毒學(xué)應(yīng)答的指標(biāo)之一。

本試驗(yàn)中，患者血清HBV DNA含量與Th1細(xì)胞因子IFN-γ血清濃度呈負(fù)相關(guān)，而和Th2細(xì)胞因子IL-10的血清濃度呈正相關(guān)。提示聯(lián)合治療可以促進(jìn)更多的Th1型細(xì)胞因子分泌，以利機(jī)體抗HBV免疫的恢復(fù)或增強(qiáng)，為清除病毒創(chuàng)造條件［17］。

本文探討了阿德福韋聯(lián)合干擾素α-2a治療過程中機(jī)體免疫細(xì)胞功能的動(dòng)態(tài)變化，表明聯(lián)合治療可直接抑制HBV DNA合成，還可作為免疫調(diào)節(jié)劑，一定程度上改善CHB患者細(xì)胞因子的功能活性。在CHB治療過程中，細(xì)胞因子水平檢測可以作為血清學(xué)應(yīng)答的一項(xiàng)監(jiān)測指標(biāo)，并且細(xì)胞因子有望成為抗病毒治療的手段。通過細(xì)胞因子調(diào)節(jié)，使Th2向Th1偏移，有利于機(jī)體的免疫應(yīng)答清除病毒，為在盡可能短的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)較高的HBe Ag血清轉(zhuǎn)換率及持久應(yīng)答率提供了思路。

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2015-03-29）

（本文編輯：易玲）

437400 湖北省 通城縣人民醫(yī)院內(nèi)三科

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