李思梅，蘇有勇，李關艷，廖小華，李　珍，馬汶絹

（昆明理工大學 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)工程學院，云南昆明 650504）

沼肥對鐵皮石斛原球莖增殖培養(yǎng)的影響

李思梅，蘇有勇*，李關艷，廖小華，李珍，馬汶絹

（昆明理工大學 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)工程學院，云南昆明 650504）

以鐵皮石斛無菌原球莖作為外植體，研究沼肥以不同比例替換鐵皮石斛原球莖增殖培養(yǎng)基中部分營養(yǎng)成分后對鐵皮石斛原球莖增殖的影響。結(jié)果表明，沼肥按一定比例替代培養(yǎng)基中的部分營養(yǎng)成分后可以促進原球莖增殖。當沼肥以10%的替代比例替代大量元素時，鐵皮石斛原球莖增殖情況最好，原球莖呈深綠色，分布緊密，僅有少量分化。表明在鐵皮石斛組培過程中，可以按一定的比例用沼肥替代部分營養(yǎng)成分，從而達到提高產(chǎn)量、降低生產(chǎn)成本以及資源合理化利用的目的。

鐵皮石斛；沼肥；球莖增殖

文獻著錄格式：李思梅，蘇有勇，李關艷，等.沼肥對鐵皮石斛原球莖增殖培養(yǎng)的影響 ［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學，2015，56（12）：2002-2004.

鐵皮石斛是蘭科石斛屬多年生附生草本植物，是 《中華人民共和國藥典》中收載的5種石斛屬植物之一，具有益胃生津、滋陰清熱、止咳潤肺的功效［1］。因森林生態(tài)破壞與資源的過度開采，野生鐵皮石斛瀕臨滅絕，因此，鐵皮石斛于1987年被國家列為重點保護的珍稀瀕危藥用植物［2］。

目前，鐵皮石斛組培技術(shù)是解決鐵皮石斛擴大化生產(chǎn)的有效手段，其組培技術(shù)也比較成熟，關于鐵皮石斛原球莖增殖方面的研究也比較多。張治國等［3］研究了不同培養(yǎng)基對鐵皮石斛原球莖增殖的影響，結(jié)果表明1/2 MS培養(yǎng)基是原球莖增殖的適宜培養(yǎng)基；徐雪榮等［4］認為，MS基本培養(yǎng)基為原球莖增殖的最佳培養(yǎng)基；廖俊杰等［5］指出，椰子汁可以促進原球莖的增殖；蔣林等［6］研究表明，適量的活性炭和1.0 mg.L-1NAA比較適合鐵皮石斛原球莖的增殖。在培養(yǎng)基中加入一些天然有機物，如椰汁、土豆汁等能提供一些必要的微量營養(yǎng)成分、生理活性物質(zhì)和生長激素等，對鐵皮石斛原球莖的增殖有促進作用［7］。除此之外，很多學者還研究了不同培養(yǎng)條件、激素以及添加劑等對原球莖增殖的影響。雖然鐵皮石斛的組培技術(shù)比較成熟，但是在其培養(yǎng)基配制以及配套設備上還存在著投入高等問題。如今，沼氣發(fā)酵技術(shù)得到社會的普遍關注與重視，同時也伴隨著大量的沼氣發(fā)酵殘留物產(chǎn)生，沼氣發(fā)酵殘留物的后處理又成為一大難題［8］。沼肥包括沼液和沼渣2部分，是一種養(yǎng)分全面、速緩肥效兼?zhèn)涞膬?yōu)質(zhì)有機肥料，能顯著改善土壤環(huán)境，有效調(diào)節(jié)土壤中的水、肥、氣、熱狀況，促進土壤生態(tài)環(huán)境的良性循環(huán)［9-10］。沼肥中富含大量可溶性無機鹽類、有機質(zhì)、N、P、K等養(yǎng)分及腐殖酸、氨基酸等，可以被各種作物吸收利用，目前已廣泛應用到小麥、果樹、馬鈴薯、水稻、蔬菜、養(yǎng)殖等生產(chǎn)中，均取得了良好效果［11-15］。然而，將沼肥應用到鐵皮石斛組培育苗中的相關研究還比較少。本文利用沼肥替代鐵皮石斛原球莖增殖培養(yǎng)基中部分營養(yǎng)成分，探究其對鐵皮石斛原球莖增殖的影響，旨在提高沼肥的利用能力，降低組培生產(chǎn)成本，促進鐵皮石斛快繁育苗的推廣。

1　材料與方法

1.1材料

1～2 cm的鐵皮石斛無菌苗由現(xiàn)代農(nóng)業(yè)工程學院農(nóng)業(yè)生物環(huán)境與能源工程研究室提供。沼肥取自本實驗室正常沼氣發(fā)酵的殘留物，含水量約為95%，其他試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1處理設計

以1/2 MS+2.0 mg.L-16-BA+2.0 mg.L-1NAA培養(yǎng)基為對照組。處理1用沼肥替代大量元素，處理2用沼肥替代大量元素和微量元素，處理3用沼肥替代大量元素、微量元素和有機物，處理4用沼肥替代大量元素、微量元素、有機物和鐵鹽，處理5用沼肥替代大量元素、微量元素、有機物、鐵鹽和6-BA，處理6用沼肥替代大量元素、微量元素、有機物、鐵鹽、6-BA和NAA。其中每組設置5個水平，即替代比例分別為100%，50%，20%，10%和5%，每個水平設6個重復。對照組和試驗組培養(yǎng)基均添加10%香蕉、2%糖、0.4%活性炭和0.35%瓊脂，pH值調(diào)至5.4～5.6，121℃高溫高壓滅菌30 m in，備用。

1.2.2試驗方法

將繼代無菌球莖 （呈小圓錐狀，每一團包含多個原球莖，原球莖頂端有鱗片狀的葉原基突起，呈淡綠色，尚未分化出真葉）在超凈工作臺的不銹鋼盤子中切成直徑約為0.5 cm的小塊，分別接種于對照組和試驗組培養(yǎng)基上，每瓶接種8～10個，置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為 （25±1）℃，光照強度為 1 000～1 200 lx，每天光照時間為12 h。試驗過程中，每10 d觀察1次，記錄生長狀況，培養(yǎng)60 d后統(tǒng)計各處理的球莖增殖情況。

2　結(jié)果與分析

試驗結(jié)果表明，利用沼肥替代培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)后，鐵皮石斛原球莖能繼續(xù)增殖與分化，只是根據(jù)替代的比例不同以及替代的營養(yǎng)成分不同，鐵皮石斛原球莖的增殖情況及長勢也各不相同。

2.1沼肥替代大量元素對原球莖增殖的影響

從表1可以看出，沼肥替代培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)對原球莖增殖有一定影響，沼肥以10%的比例替代培養(yǎng)基中大量元素時，原球莖的增殖情況最好，僅有少量原球莖分化，生長狀態(tài)好；隨著替代比例的增加，增殖情況逐漸減弱，同時分化加劇。

表1　沼肥替代大量元素對鐵皮石斛原球莖增殖的影響

2.2沼肥替代大量元素和微量元素對原球莖增殖的影響

從表2可以看出，當沼肥以一定比例同時替代大量元素和微量元素后，原球莖增殖情況均不理想，顏色黃綠，疏松，呈現(xiàn)高度分化的情況，原球莖長勢也不理想，表明此培養(yǎng)基不適合原球莖的增殖。由于此次試驗中有2組試驗 （替代比例為10%和5%）被污染，試驗結(jié)果有一定的誤差。

注：替代比例5%和10%處理污染。

2.3沼肥替代大量元素、微量元素和有機物對原球莖增殖的影響

從表3可以看出，沼肥同時替代大量元素、微量元素和有機物，總體上，原球莖增殖情況不太理想，以5%和10%的比例替代后增殖情況相對較好，原球莖呈綠色，有少量分化，但球莖稍微疏松，長勢一般。

注：替代比例100%處理污染。

2.4沼肥替代大量元素、微量元素、有機物和鐵鹽對原球莖增殖的影響

沼肥替代大量元素、微量元素、有機物和鐵鹽對原球莖增殖的影響見表4。沼肥以5%的比例替代營養(yǎng)元素后，原球莖的增殖情況差，有高度分化的現(xiàn)象；當替代比例上升至10%時，原球莖增殖情況最好，長勢良好，增殖后球莖疏松不緊密，分化程度低；之后隨著替代比例的增加，增殖程度減弱，顏色變黃，長勢差，同時分化加劇。

表4　沼肥替代大量元素、微量元素、有機物和鐵鹽對原球莖增殖的影響

2.5沼肥替代大量元素、微量元素、有機物、鐵鹽和6-BA對原球莖增殖的影響

沼肥替代大量元素、微量元素、有機物、鐵鹽和6-BA對原球莖增殖的影響情況見表5。替代比例為100%的試驗全部污染，沒有試驗記錄。由其他處理可以看出，利用沼肥同時替代大量元素、微量元素、有機物、鐵鹽和6-BA后原球莖增殖情況不理想，長勢差，高度分化。

注：替代比例100%處理污染。

2.6沼肥替代大量元素、微量元素、有機物、鐵鹽、6-BA和NAA對原球莖增殖的影響

由表6可以看出，用沼肥替代培養(yǎng)基中所有營養(yǎng)物質(zhì)后，球莖增殖情況不好，長勢差，高度分化。只有替代比例為20%時，增殖情況良好，顏色為綠色，緊密，少量分化。

表6　沼肥替代大量元素、微量元素、有機物、鐵鹽、6-BA和NAA對原球莖增殖的影響

從表1—6的數(shù)據(jù)分析不難看出，沼肥以一定的比例替代培養(yǎng)基中的部分營養(yǎng)物質(zhì)時，鐵皮石斛的原球莖能繼續(xù)增殖與分化，原球莖的增殖效果比較好，其中增殖情況最好的處理是沼肥以10%的比例替代大量元素，其次是以10%的比例同時替代大量元素、微量元素、有機物和鐵鹽，但都沒有對照組長勢好，雖然試驗組的原球莖增殖量大，但是部分原球莖分化成了具有小葉的幼苗。

3　小結(jié)

本試驗將沼肥按一定比例替代鐵皮石斛原球莖增殖培養(yǎng)基中的部分營養(yǎng)成分，初步研究了鐵皮石斛原球莖的增殖情況。結(jié)果表明，沼肥按一定比例替代培養(yǎng)基中的部分營養(yǎng)成分后，鐵皮石斛原球莖增殖狀況良好，并且對原球莖分化有一定的促進作用，當沼肥以10%的比例替代大量元素時，鐵皮石斛原球莖增殖情況最好，原球莖呈深綠色，分布緊密，僅有少量分化。表明利用沼肥替代現(xiàn)有培養(yǎng)基中的部分營養(yǎng)成分是可行的。

雖然試驗結(jié)果表明利用沼肥替代培養(yǎng)基中的部分營養(yǎng)成分是可行的，但沼肥的成分比較復雜，不同來源的沼肥，其營養(yǎng)成分存在一定的差異。因此，沼肥在鐵皮石斛組培中的大量應用還有待于深入研究。

［1］ 李桂鋒，李進進，許繼勇，等.鐵皮石斛研究綜述 ［J］.中藥材，2010，33（1）：150-153.

［2］ 喻曉雁，陳夢媛.鐵皮石斛組織培養(yǎng)研究進展 ［J］.中醫(yī)學報，2011，26（7）：828-830.

［3］ 張治國，劉驊，王黎，等.鐵皮石斛原球莖增殖的培養(yǎng)條件研究 ［J］.中草藥，1992，23（8）：43 l-433.

［4］ 徐雪榮，姚全勝，雷新濤，等.鐵皮石斛高效再生體系研究與應用 ［J］.熱帶農(nóng)業(yè)科學，2009，29（10）：40-44.

［5］ 廖俊杰，許繼勇，李進進，等.鐵皮石斛試管種苗產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的技術(shù)因素分析 ［J］.中藥材，2006，29（6）：533-535.

［6］ 蔣林，丁平，鄭迎冬.添加劑對鐵皮石斛組織培養(yǎng)和快速繁殖的影響 ［J］.中藥材，2009，26（8）：539-541.

［7］ 周雅琴，余麗瑩，譚小明.鐵皮石斛組織培養(yǎng)研究進展［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2012，21（1）：48-49.

［8］ 楊敬華.沼渣、沼液在茄子無土栽培中的應用研究 ［D］.保定：河北農(nóng)業(yè)大學，2013.

［9］ Terhoeven-Urselmans T，Scheller E，Raubuch M.CO2evolution and Nmineralization after biogas slurry application in the field and its yield effects on spring barley［J］.App lied Soil Ecology，2009，42（3）：297-302.

［10］ 王忠江，菜康妮，王麗麗，等.沼肥表施對土壤氮素動態(tài)分布及氨揮發(fā)的影響 ［J］.農(nóng)業(yè)機械學報，2014，45（7）：139-143.

［11］ 祁連弟.沼肥對玉米生長性狀及產(chǎn)量影響的研究 ［J］.中國沼氣，2014，32（2）：52-55.

［12］ 邱桃玉，劉德江，饒曉娟，等.施用沼肥對蔬菜產(chǎn)量、品質(zhì)及土壤性狀的影響 ［J］.中國沼氣，2010，28（6）：44-47.

［13］ 張連，陳賽英，李瑞奇，等.沼肥的肥效及其在芹菜上的應用 ［J］.中國沼氣，2007，25（3）：35.

［14］ 李來祥，陳彩能，李瑩，等.沼肥用于溫室番茄種植對產(chǎn)量的影響 ［J］.中國沼氣，2008，26（2）：42-43.

［15］ 付斌，鄭寶華，胡晶，等.沼肥施用對豆類品質(zhì)和土壤理化性狀的影響 ［J］.中國沼氣，2014，32（2）：45-47.

（責任編輯：侯春曉）

S 567.23+9

A

0528-9017（2015）12-2002-03

10.16178/j.issn.0528-9017.20151227

2015-06-04

李思梅 （1990-），女，云南南澗人，碩士研究生，主要從事藥用植物快繁育苗研究工作。E-mail：421314272@qq.com。

蘇有勇 （1969-），男，云南賓川人，教授，主要從事生物質(zhì)能研究工作。E-mail：497611561@qq.com。