林 瑋　楊燕燕　劉德強(qiáng)　謝金東　王訓(xùn)立福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心　福州　350122

C57小鼠和C57BL/6 FMR1 KO小鼠剖宮產(chǎn)手術(shù)及其仔鼠生長(zhǎng)情況的比較研究

林 瑋楊燕燕劉德強(qiáng)謝金東王訓(xùn)立*福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心福州350122

目的 C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR 1 KO小鼠剖宮產(chǎn)手術(shù)及其仔鼠生產(chǎn)情況的比較。方法將C57和FMR 1兩種小鼠分成兩組，每組雌雄按1：1配對(duì)，通過剖宮產(chǎn)手術(shù)取得仔鼠，C57母鼠作為代乳母鼠，分別比較兩種小鼠的妊娠時(shí)間、成功受孕時(shí)間、7 d成活率、產(chǎn)仔數(shù)、離乳率。結(jié)果 FMR 1小鼠在成功受孕時(shí)間、7 d成活率、離乳率上與C57小鼠存在顯著差異。結(jié)論通過剖宮產(chǎn)凈化手術(shù)獲得FMR 1小鼠，為后續(xù)開展保種和育種工作提供重要保障。

FMR 1剖宮產(chǎn)手術(shù)離乳率基因敲除

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)是生命科學(xué)的基礎(chǔ)和條件，也是衡量現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究水平的重要依據(jù)，因而受到各國(guó)的普遍重視［1］實(shí)驗(yàn)動(dòng)物剖宮產(chǎn)凈化技術(shù)是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群微生物與寄生蟲質(zhì)量控制最為經(jīng)典的技術(shù)，主要是利用胎盤具有屏障作用，可阻止病原微生物侵入，可切斷母仔縱向傳播疾病的途徑，來(lái)凈化被微生物污染的嚙齒類動(dòng)物［2］，是小鼠進(jìn)行“生物凈化”、維持種群微生物級(jí)別最簡(jiǎn)單而有效的手段［1］。特別是對(duì)它的微生物等級(jí)產(chǎn)生疑問時(shí)，通過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物剖宮產(chǎn)凈化技術(shù)可取得SPF級(jí)甚至無(wú)菌級(jí)KO小鼠，為后續(xù)開展保種和育種工作提供重要保障。

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物2010年自美國(guó)Baylor醫(yī)學(xué)院引進(jìn)，在福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心已穩(wěn)定傳代四年；上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司處購(gòu)買C57 （C57BL/6）小鼠20只，雌雄各半，體重23～25 g，許可證號(hào)：SCXK（滬）2012-0002；FMR1基因敲除小鼠（C57BL/6 FMR1 KO）代乳的母鼠為已產(chǎn)過2胎、仔鼠成活率高并且仔鼠生長(zhǎng)發(fā)育良好的C57雌鼠。剖宮產(chǎn)手術(shù)全程在手術(shù)隔離器中完成，手術(shù)隔離器購(gòu)買于蘇州馮氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司，型號(hào)為1000 cm×800 cm×1400 cm。

1.2方法將C57和FMR1兩種小鼠分成兩組，每組雌雄按1∶1配對(duì)，飼養(yǎng)在福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心三樓的屏障系統(tǒng)內(nèi)，18～24℃，日溫差不超過3℃，濕度在50%～65%。估算代乳母鼠的分娩時(shí)間，要求在剖宮母鼠手術(shù)前1～2 d內(nèi)的為宜。將雌雄小鼠交配之日定為妊娠的0.5 d，將19.5 d定為小鼠的分娩期，同時(shí)配合觸診法判斷是否可以進(jìn)行剖宮產(chǎn)凈化手術(shù)。手術(shù)中，先經(jīng)頸椎脫臼法處死孕鼠后，固定好四肢，用碘酊消毒腹部，沿腹中線開腹，用止血鉗分別將子宮頸和兩側(cè)輸卵管夾緊，用剪刀沿血管鉗固定處外端切斷子宮頸、輸卵管和子宮闊韌帶，使子宮游離。提起3把止血鉗將子宮浸入0.5%過氧乙酸3 s后再放入無(wú)菌生理鹽水中沖洗3 s，除去止血鉗、切開子宮剝離胎鼠，及時(shí)擦去胎鼠口、鼻及身上的黏液，促其呼吸，斷臍帶。

1.3數(shù)據(jù)分析采用統(tǒng)計(jì)學(xué)（SSPS16.0）比較兩種小鼠的產(chǎn)仔數(shù)和代乳成活率。

2　結(jié)　果

2.1成功受孕、妊娠時(shí)間比較在妊娠時(shí)間上，F(xiàn)MR1與C57小鼠相比較無(wú)顯著性；而在成功受孕的時(shí)間上存在著差距。見表1。

表1　FMR1和C57妊娠時(shí)間和成功受孕時(shí)間比較

2.2仔鼠成活情況比較FMR1小鼠的產(chǎn)仔數(shù)比C57小鼠偏低，但無(wú)顯著性差異。在剖宮產(chǎn)手術(shù)成功后，將所得的仔鼠分別進(jìn)行代乳喂養(yǎng)，兩種仔鼠在7 d時(shí)的成活率和離乳率存在顯著性差異。見表2。

3　討　論

適宜的剖宮取胎條件是提高娩出仔鼠和離乳仔鼠成活率的關(guān)鍵［3］，整個(gè)手術(shù)過程盡量在3min內(nèi)完成，且手術(shù)的溫度要保持在36～38℃［4］。FMR1小鼠在成功受孕時(shí)間上與C57小鼠存在極顯著差異，這可能是由于FMR1小鼠是利用基因敲除技術(shù)將X染色體上的FMR1基因定點(diǎn)滅活制備而成的動(dòng)物模型，其X染色體可能受到損傷，使其很難受孕成功，甚至出現(xiàn)無(wú)法受孕成功的情況。因此，在判斷剖宮產(chǎn)手術(shù)時(shí)間的時(shí)候，不能單純以陰栓的脫落為受孕成功的標(biāo)準(zhǔn)，在FMR1母鼠腹部隆起后，要配合觸診法確定剖宮產(chǎn)手術(shù)的時(shí)間。

在成功進(jìn)行剖宮產(chǎn)手術(shù)后，開始代乳喂養(yǎng)時(shí)，F(xiàn)MR1仔鼠在7 d的成活率和離乳率低于C57小鼠，且存在顯著性差異。這可能是由于FMR1小鼠在基因敲除后，主要表現(xiàn)為巨睪癥、記憶力缺失、行為異常和智力低下［5-7］，使其后代仔鼠在幼年時(shí)更容易出現(xiàn)死亡。

對(duì)小鼠進(jìn)行剖宮產(chǎn)凈化手術(shù)是提高實(shí)驗(yàn)小鼠微生物等級(jí)的最有效方法，同時(shí)也是小鼠在分娩難產(chǎn)時(shí)，最直接的延續(xù)后代的挽救措施。而小鼠在第一胎的時(shí)候，又特別容易發(fā)生難產(chǎn)甚至是吃仔的現(xiàn)象，而小鼠的剖宮產(chǎn)凈化技術(shù)能很好地預(yù)防和控制這些問題的發(fā)生。通過剖宮產(chǎn)凈化手術(shù)的FMR1小鼠，在開展保種和育種工作中的應(yīng)用，有待進(jìn)一步研究。

［1］魏溥.醫(yī)學(xué)生物化學(xué)［M］.2版.北京：世界圖書出版公司，1995：58-74.

［2］劉淑霞，劉殿峰，楊淑萍.實(shí)驗(yàn)小鼠的凈化及監(jiān)測(cè)［J］.中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2000，13（4）：245-246.

［3］周淑佩，王連英，張?jiān)气P，等.大、小鼠剖宮取胎的適宜條件［J］.北京大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，33：89-91.

［4］前島一淑.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的無(wú)菌技術(shù) ［M］.北京：科學(xué)技術(shù)出版社，1983：66.

［5］Leah Selby，Chunzhao Zhang，Qian-Quan Sun.Major Defects in Neocortical GABAergic Inhibitory Circuits in M ice Lacking the Fragile X Mental Retardation Protein［J］.Neuroscience Letters，2007，412（3）：227-232.

［6］Chen L，Yun SW，Seto J，et a1.The fragile X mental retardation protein binds and regulates a novel class ofmRNAs containingUrichtarget sequences［J］.Neuroscience，2003，120（4）：1005-1017.

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Com pare the situations about the caesarean section and production rates on C57m ice and C57BL/6 FMR1 KO m ice

Lin WeiYang YanyanLiu DeqiangXie JindongWang Xunli*
（Laboratory Animal Center，F(xiàn)ujian University of Tradition Chinese Medicine，F(xiàn)uzhou 350122）

Objective∶compare the situations about the caesarean section and production rates on C57 mice and C57BL/6 FMR1 KO mice.Methods∶mice C57 and mice C57BL/6 FMR1 KO are divided into two groups and in each group，male and female are paired in 1∶1 matching.The experiment tries to get newborn mice by caesarean section，in which mice C57 are nursemice.Through the experiment，the author tries to compare the gestation periods，successful pregnancy time，survival rates of 7 d，litter sizes and weaning rates. Conclusion∶themice FMR1，got from purification caesarean operation prompt the guarantee for the following storage and breeding.

Caesarean Section Weaning rate Gene knockout

表2　代乳的仔鼠成活情況比較

A

1003-4331（2015）01-0006-02

福建中醫(yī)藥大學(xué)校管課題（X2012026）、福建省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物重點(diǎn)項(xiàng)目（2014Y0079）資助。

林瑋（1982-），男，實(shí)驗(yàn)師，從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究。E-mail：34945011@qq.com。

王訓(xùn)立（1964-），男，副研究員。E-mail：wangxunli@139.com。