龔飛鳳++周云線

[摘要]目的 了解桂林地區(qū)高危型人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染及亞型分布情況，為預防子宮頸癌前病變、子宮頸癌提供參考依據(jù)。方法 采用醫(yī)用核酸分子快速導流雜交基因芯片技術對2 262例婦女進行HPV-DNA基因結果分析。結果 2 262例婦女中檢測出HPV陽性率26.22%，其中高危型感染率較高（19.20%），低危型感染率較低（7.02%）；普通女性中的感染率為18.89%，在宮頸病變患者中的感染率為84.38%，兩者相比差異有統(tǒng)計學意義（c2= 457.01，P=0.00<0.05）；不同年齡段HPV陽性檢出率不同，呈雙峰U形曲線，第l峰位于年輕婦女（20～30 歲），陽性率為24.61%，第2峰位于中老年婦女（51～65歲），陽性率最高51.74%；高危型主要以HPV52、16、58為主。低危型以HPV6、11最為常見。結論 桂林地區(qū)2262例女性宮頸HPV感染常見高危型亞型是HPV52、16、58。低危型亞型是HPV6、11。感染年齡趨于年輕化和老年化。桂林地區(qū)的HPV感染基因分型符合亞洲人群分布規(guī)侓，但有其地區(qū)特點。

[關鍵詞]人乳頭狀瘤病毒；基因型；感染率；年齡分布

[中圖分類號]R737.33 [文獻標識碼]A [文章編號]1674-0742（2015）04（b）-0035-03

Guilin Area 2262 Female Genital Tract HPV Infection and Genotype Analysis Results

GONG Feifeng ZHOU Yunxian

Womens and Childrens Hospital of Guilin， Guilin， Guangxi Province， 541002 China

[Abstract]Objective Know guilin area type high-risk human papilloma virus （HPV） infection and subtype distribution， in order to prevent cervical cancer lesion before， and provides some references for the cervical cancer.Methods the medical nucleic acids rapid diversion hybrid gene chip technology on 2262 women in HPV DNA genetic results analysis.Results Detect the HPV positive rate of 26.22%， in 2262 women with high-risk type higher infection rate （19.20%）， low-risk type low infection rate （7.02%）； Ordinary women in the infection rate was 18.89%， the infection rate was 84.38% in patients with cervical lesions， compared the difference was statistically significant （c2 = 457.01， P= 0.00 < 0.05）； Positive rate of HPV was different， different ages shows bimodal u-shaped curve， the first peak in young women l（20～30 years old）， positive rate was 24.61%， the second peak is located in the middle-aged and old women （51～ 65 years）， the highest positive rate of 51.74%； High-risk type mainly HPV52，16， 58. The most common low-risk type with HPV6 and 11.Conclusion Guilin area 2262 women type cervical HPV infection common high-risk subtype is HPV52， 16， 58. Low-risk type subtype is HPV6， 11. Infection tend to be younger and older age. Genotyping of HPV infection in guilin are in Asian population distribution rules denied， but has its regional characteristics.

[Key words]Human papilloma virus；Genotype；Infection rates；Age distribution

基礎研究和流行病學均已證實感染人乳頭狀瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是造成宮頸上皮內瘤變（Cervical Intraepithelial Neoplasia，CIN）以及宮頸癌的重要原因[1]。目前已經(jīng)有200余種HPV得到了鑒定，其中有30多種亞型會導致宮頸病變[2]。感染不同亞型HPV由于分布的地域性差異，所產(chǎn)生的致癌性和后果也不同[3]。經(jīng)過世界范圍內的研究，由于種族和地理人群的差異，獲得的HPV流行狀況、感染峰齡和病毒類型也不盡相同[4-5]。該研究通過醫(yī)用核酸分子快速導流雜交基因芯片技術，對2012年7月—2014年11月間該區(qū)感染HPV婦女宮頸和基因亞型的分布進行探析，基本對該地區(qū)婦女宮頸感染HPV情況有所了解，為該地區(qū)防治婦女宮頸癌、研發(fā)疫苗和使用提供依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料

該研究對桂林市婦女兒童醫(yī)院婦科門診就診及體檢共計2262例婦女進行HPV檢測。行宮頸液基薄層細胞學（Thinprep Cytology Test，TCT）檢測對檢測結果陽性者。若HPV結果陽性合并TCT檢查異常者要進行陰道鏡檢查同時在病變處取活檢，通過病理檢查確診?；颊呔鶃碜怨鹆值貐^(qū)，年齡20～65歲，平均年齡41.20歲。

1.2 儀器與試劑

HybriMax核酸分子醫(yī)用快速雜交儀；多聚酶鏈反應（PCR）儀（KP-CT48）；試劑有21種HPV-DNA提取試劑盒、HPV核酸擴增分型檢測試劑盒以及PCR+膜雜交法試劑盒。共有21種HPV亞型檢測，包括13種高危亞型（16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59和68型），5種低危亞型（6，42，11，43和44型）以及3種中國人群常見亞型（53，66和CP8304型）。

1.3 方法

1.3.1 病理采集和儲藏 標本采集要在非月經(jīng)期進行，先將宮頸口處多余的分泌物用棉拭子清除，使用專用宮頸刷在宮頸內大約2 cm處旋轉5圈，然后把宮頸刷頭放入有細胞保存液的樣本的瓶中儲存；放入4℃的冰箱中，3 d內進行檢測。

1.3.2 提取樣本DNA和擴增PCR 充分漂洗宮頸刷頭，離心洗脫液（14 000 r/min離心5 min），去除上清液只留管底細胞，然后加入400μL裂解液根據(jù)試劑盒說明書進行提取，把抽的DNA樣本作為模板實施PCR擴增。擴增程序如下：95 ℃ 預熱9 min，95 ℃20 s解鏈，55 ℃30 s退火，72 ℃30 s延伸，循環(huán)此過程40次。72 ℃延伸5 min，4 ℃低溫保存。

1.3.3 導流雜交 預熱雜交儀和雜交液，將標記有21種HPV基因型寡核酸探針的低密度基因芯片放在雜交平臺上，將加熱冰浴后的PCR擴增產(chǎn)物添加到檢測孔里實施導流雜交；將膜用封阻液封閉，將封阻液后清除后添加AP酶，30 ℃溫育5 min。AP酶催化底物中顏色物的生成，從而顯示雜交結果，最后排液清洗。

1.3.4 讀取結果 膜條上共有21個位點和兩個監(jiān)控點。兩個監(jiān)控點分別監(jiān)測擴增過程的有效性和雜交過程的有效性，其余21個位點分別對應試劑盒上21個常見HPV病毒類型。陽性為清晰可見的藍紫色圓點，多個圓點陽性即為多重感染。

1.4 統(tǒng)計方法

用PEMS 3.1統(tǒng)計軟件，對兩個樣本率行c2檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

2 結果

2.1 HPV總感染率及不同人群感染率及基因型別分布

2262例婦女中檢測出HPV感染者593例，陽性率為26.22%。其中有21種HPV亞型在這593名感染者中被檢測出，這當中高危型HPV感染率較高（19.20%），低危型感染率較低（7.02%）。普通女性感染率為18.89%（385/2038），在宮頸病變患者中感染率為84.38%（189/224），兩者相比差異有統(tǒng)計學意義（c2= 457.01，P=0.00<005）。2 262例婦女前6位常見高危型HPV分布見表1。

2.2 2262例受檢者不同年齡段HPV陽性檢出率

2262例受檢者不同年齡段HPV陽性檢出率見表2。

2.3 HPV感染亞型在各年齡組的分布

高危型HPV感染亞型在各年齡組的分布：20～30歲以HPV52、58、16為主；31～40歲以HPV16、52、58為主；41～50歲以HPV16、52為主；即在 20～30 歲、31～40歲及41～50歲女性中感染亞型雖略不同，但高危型主要以HPV52、16、58為主。低危型以HPV6.11最為常見，在不同年齡組感染率分別為：20～30歲：13.19%（127/963）、31～40歲：8.71%（54/620）、41～50歲：6.28%（29/462）。51～65歲以HPV52、58為主，低危型HPV感染很少，僅檢出HPV11型1例。

3 討論

宮頸癌是女性第二大惡性腫瘤，世界范圍內發(fā)病率和死亡率僅次于乳腺癌，分別為15.2/10萬和7.8/10萬[6]。流行病學研究得出CIN 和子宮頸癌與高危型人乳頭瘤病毒（HPV）的感染有關[7]。該研究也證實HPV與宮頸病變（包括CIN 和子宮頸癌等）關系密切。HPV的感染率在普通女性中為18.89%（385/2038），而在宮頸病變患者中高達84.38%（189/224），兩者相比差異有統(tǒng)計學意義（c2= 457.01，P=0.00<005）。該研究2262例婦女HPV總感染率26.21%，高于世界自然人群婦女的平均水平（10.4%）[8]，也高于我國HPV在普通女性中的感染率為15.71%[9]?？赡芘c我們篩查的是門診就診的高危人群有關。在HPV-DNA分型中發(fā)現(xiàn)，高危型HPV的感染率最高為19.20%，低危型感染率最低為7.01%，與國內外報道大體一致[10]。

但在不同的國家和地區(qū)不同的地理環(huán)境和種族之間，感染HPV型別存在差異[11-15]。2010年一項關于亞洲婦女HPV型別分布的數(shù)據(jù)分析[16]中研究得出東亞地區(qū)主要類型為HPV-16、HPV-18、HPV-52、HPV-58、HPV-33、HPV-45、HPV-31型。岑堯[9]等對我國高危型HPV型別分布進行了數(shù)據(jù)分析，結論：HPV的型別在我國分布也存在一定區(qū)域性，全國范圍內前6位常見高危型HPV分布依次為HPV-16、HPV-52、HPV-58、HPV-33、HPV-18、HPV-31型。該研究發(fā)現(xiàn)前6位高危型HPV分布依次為HPV-52 、HPV-58、 HPV-16、HPV-53、HPV-39、HPV-18。與岑堯等[9]報道的在型別及排序略有不同。其中感染率最高的型為52，占陽性標本中的17.01%，這與多數(shù)亞洲國家研究結果基本一致。該研究還顯示高危型別HPV-53型出現(xiàn)排第4位。與岑堯等[9]調查顯示可能的HPV-53型高危型別在少數(shù)民族自治區(qū)HPV感染常見型別中出現(xiàn)，排名第4吻合。這可能與桂林地區(qū)為多個少數(shù)民族聚居有關。endprint

目前已經(jīng)在全球范圍內觀察到4種HPV感染具有特定年齡流行曲線模式，第1種為單峰曲線模式，發(fā)生于年輕婦女；第2種是雙峰U形曲線，第1峰是主峰，在年輕婦女，第2峰為中老年婦女；第3種為所有成人年齡組均為高峰；而第4種模式是所有年齡組的患病率都呈低峰[17]。該研究2262例受檢者不同年齡段HPV陽性檢出率也存在著兩個感染高峰，比較符合第2種模式的雙峰U形曲線，所不同的是第l峰位于年輕婦女（20～30歲），并非主峰，其主峰為第2峰，位于中老年婦女（51～65歲）。這可能是因為中老年婦女的激素水平變化或機體免疫力降低引發(fā)潛伏期病毒的復活，所以該種感染也就呈現(xiàn)持續(xù)性狀態(tài)的感染。年輕婦女宮頸上皮還未發(fā)育成熟，抵抗力較差，再加上過早、過頻的性生活以及性伴侶過多等性生活不良習慣更易感染HPV。因此，我們在積極開展篩查年輕婦女宮頸癌同時，也要加強對圍絕經(jīng)期婦女的HPV檢測，以便更好的預防宮頸病變，使宮頸癌的發(fā)病率有效降低。

該研究顯示高危型HPV感染亞型在各年齡組的分布雖略不同，但高危型主要以HPV52、16、58為主，低危型主要以HPV6、11為主，不符合Lee等[18]等報道全世界高危型HPV主要是HPV16和18亞型；與舒宏等[19]報道廣西南寧地區(qū)高危型主要以HPV16、58和52為主，低危型主要以HPV6、11為主一致?？赡芘c不同的性行為習慣 、各地區(qū)種族和民族的遺傳特點及人口遷移等因素相關[20]。而廣西南寧和廣西桂林同屬于廣西壯族自治區(qū)，其各民族發(fā)布及人群健康意識等大致相同有關。目前，已投入臨床應用的HPV疫苗主要針對HPV高危型的16、18以及低危型的6、11，并非適用于該地區(qū)，提示研制52、16及58型三價HPV疫苗能覆蓋該地區(qū)大部分人群。

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（收稿日期：2015-01-15）endprint