陳凱麗，易劍鋒，梁 輝

(宜春學(xué)院 化學(xué)與生物工程學(xué)院，江西 宜春 336000)

中藥復(fù)方主要有兩類:一類為固定標(biāo)準(zhǔn)的傳統(tǒng)方劑，另一類為提取成分藥品，包括單一植物的提取物，或幾種植物有效部分的配方。其藥效是多種成分、多條途徑、多個靶點的協(xié)同作用，或是對抗某些成分的副作用，而不是簡單地藥效疊加。因此對中藥復(fù)方作用機制和藥代動力學(xué)的研究對臨床上合理用藥的指導(dǎo)有非常重要的意義。

中藥復(fù)方藥代動力學(xué)是通過傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)，研究中藥及其復(fù)方在生物體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄的一系列動態(tài)變化規(guī)律，建立體內(nèi)時間－濃度與時間－效應(yīng)間的關(guān)系，對其以數(shù)學(xué)函數(shù)進行定量描述，從而闡明中藥及其復(fù)方的用藥合理性及作用機理，并得到中藥及其復(fù)方的藥代動力學(xué)參數(shù)，為中藥及其復(fù)方質(zhì)量的提高和合理給藥方案的優(yōu)化提供一定的科學(xué)依據(jù)，進一步利用在其過程中產(chǎn)生的新活性代謝產(chǎn)物來創(chuàng)新中藥復(fù)方新藥奠定基礎(chǔ)。［1，2］因此本文就目前應(yīng)用在中藥及其復(fù)方藥代動力學(xué)研究方面的主要方法進行綜述。

1 中藥及其復(fù)方藥代動力學(xué)的研究理論

近年來研究者對中藥及復(fù)方藥代動力學(xué)研究方法進行了大量的探索，［3］希望能找出一種更加準(zhǔn)確、科學(xué)的研究方法闡明中藥及其復(fù)方藥代動力學(xué)的特征。因此提出了一些理論包括:黃熙等［4］人提出的“證治藥動學(xué)”、賀玉琢［5］提出的“中藥血清藥理學(xué)”、楊奎等［6］提出的“中藥胃腸動力學(xué)”，另外還有脾主藥動學(xué)和時辰藥動學(xué)等。

2 中藥復(fù)方藥代動力學(xué)研究的方法

2.1 生物效應(yīng)法

由于中藥復(fù)方成分復(fù)雜，其主要成分包括有效和毒性成分，但有效成分不明，藥物在體內(nèi)的作用機制也不明，對此，可以通過藥效指標(biāo)來反映體內(nèi)藥物濃度的動態(tài)變化。［7，8］主要有方法有:

(1)藥理效應(yīng)法

藥理效應(yīng)法是把藥理效應(yīng)作為指標(biāo)來測定藥代動力學(xué)參數(shù)的方法，包括體內(nèi)藥量與藥效的關(guān)系、時間與藥效的關(guān)系。通過建立時間－藥效曲線，經(jīng)一定變換后可得出血藥濃度－時間曲線，來求的藥代動力學(xué)的各參數(shù)。目前，該法主要用于有效成分不明的中草藥及其復(fù)方的藥代動力學(xué)研究。李成洪等［9］在研究中藥復(fù)方制劑禽病康在免疫抑制雛雞體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征時利用了此法。該法的好處在于通過把藥理效應(yīng)作為觀察指標(biāo)來反映了藥物整體藥代動力學(xué)過程，但是由于中藥復(fù)方藥效是不是單方面的，以一個或數(shù)個主要藥效為觀測指標(biāo)進行藥代動力學(xué)研究，具有一定的局限性，因此對藥效指標(biāo)的嚴(yán)格要求，限制了其使用范圍。

(2)藥物累積法(毒理效應(yīng)法)

藥物累積法也稱毒理效應(yīng)法，它是于80 年代初期由我國學(xué)者赫梅生仁等［10］提出，它是以急性死亡率為指標(biāo)，用動物急性死亡率測定藥物蓄積性的方法與藥代動力學(xué)中血藥濃度多點測定原理結(jié)合來推算藥代動力學(xué)參數(shù)的一種方法。劉雅敏等［11］采用此法研究了熱痹清片在小鼠體內(nèi)的藥物動力學(xué)變化。此方法能在一定程度上反映藥物在生物體內(nèi)的整體動力學(xué)過程，體現(xiàn)了中藥復(fù)方配伍性，符合中醫(yī)的基本理論。但該法僅適用于產(chǎn)生的藥理效應(yīng)和毒理效應(yīng)為同一組分的中藥及其復(fù)方，而以藥物毒性代表以有效量為主要指標(biāo)來反應(yīng)藥代動力學(xué)規(guī)律，所得藥代參數(shù)難以為后續(xù)研究如藥物在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化、代謝排泄等提供幫助。［12］

(3)微生物指標(biāo)法

微生物指標(biāo)法也稱瓊脂擴散法，主要是利用微生物法測定生物樣品中血藥濃度，進而計算出藥動學(xué)參數(shù)的一種方法。此法針對的是具有抗菌活性的中藥及其中藥復(fù)方制劑。該法具有操作簡單，指標(biāo)明確，重復(fù)性高，有較高的靈敏度等優(yōu)點，為具有抗菌作用的中藥極其復(fù)方藥代動力學(xué)研究提供了一個新的思路。但是由于在測定過程中中藥復(fù)方樣品中的干擾因素很多，在體外進行抑菌試驗時血中的有效成分很難達到抑菌的濃度，因此該法在中藥復(fù)方藥代動力學(xué)的研究中是有限的。

2.2 體內(nèi)藥物濃度法(血漿藥物濃度法)

血漿藥物濃度法是目前中藥及其中藥復(fù)方藥代動力學(xué)研究最常用的一種方法，它是通過測定血漿中一種或多種指標(biāo)成分的濃度，建立起濃度－時間曲線，來計算藥代動力學(xué)參數(shù)。血藥濃度檢測常用的方法有HPLC 法、UPLC 法、色譜聯(lián)用技術(shù)法等。該法具有操作簡單且測定快速等優(yōu)點，主要適用于藥效成分明確的中藥及其復(fù)方的研究。近年來，國內(nèi)外有很多研究者已研究了柴胡湯［13］和芎芍膠囊［14］等的有效成分的藥代動力學(xué)。然而，由于中藥及其復(fù)方藥效成分很復(fù)雜，通常以整體來發(fā)揮作用，用其中的一個或數(shù)個指標(biāo)成分作為檢測，得出的藥動學(xué)參數(shù)與藥物的實際藥動學(xué)有一定的偏差，因而不能完全代替中藥及其復(fù)方制劑藥動學(xué)。因此研究中藥復(fù)方同時也應(yīng)研究其配伍。目前，已有關(guān)于復(fù)方中藥的配伍研究，即通過拆方研究法等與血藥濃度法結(jié)合起來對復(fù)方進行全面的研究，可以得到更加準(zhǔn)確的實驗結(jié)果，更能促進中藥復(fù)方的研究。

3 檢測的分析方法

伴隨著現(xiàn)代檢測技術(shù)的發(fā)展，目前已用于中藥復(fù)方藥物動力學(xué)研究的化學(xué)成分檢測方法有:高效液相色譜法(HPLC)、超高效液相色譜法(UPLC)、氣相色譜法(GC)、GC－MS 及HPLC－MS聯(lián)用技術(shù)、核磁共振譜法、毛細(xì)管電泳法、同位素標(biāo)記法、放射免疫測定法、酶免疫測定法、柱切換技術(shù)、RP—HPLC 色譜法、毛細(xì)管電色譜法、薄層掃描法等。其中一些主要的方法介紹如下:

3.1 高效液相色譜

高效液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)是目前使用較廣泛的一種快速、靈敏的體內(nèi)藥物測定方法。它是采用高壓輸液泵將所有的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱進行分析測定的色譜方法。常用的檢測器有:(1)紫外檢測器，適用于具有共軛結(jié)構(gòu)的化合物的檢測(如芳香化合物)，也可利用末端吸收，對具有羰基、羧基等集團的化合物進行檢測;(2)熒光檢測器，它比紫外檢測器更靈敏但僅能檢測具有熒光性的化合物(如多環(huán)芳烴等);(3)電化學(xué)檢測器，適用于無紫外吸收或無熒光的化合物;(4)質(zhì)譜檢測器，適用于大分子物質(zhì)的檢測。HPLC 法具有高靈敏度、高選擇性、分布范圍廣、速度快等特點，同時對熱不穩(wěn)定性和揮發(fā)性藥物沒有限制，具有很廣的樣品試用范圍和生物樣品預(yù)處理簡單等優(yōu)點。因此此法已經(jīng)越來越多的引起藥學(xué)研究者的重視，尤其在藥代動力學(xué)中發(fā)揮了很大的作用。黃健忠等［15］采用HPLC 方法研究了梔子柏皮湯中不同成分對梔子苷體內(nèi)藥代動力學(xué)的影響。另外經(jīng)查閱文獻發(fā)現(xiàn)復(fù)方丹參滴丸中的丹參素、川芎煎湯劑中阿魏酸、穿心蓮膠囊中的穿心蓮內(nèi)酯、四君子湯中的甘草甜素、雙黃連粉針中的黃芩苷等的檢測都采用了HPLC。［16］

3.2 超高效液相色譜

超高效液相色譜(ultra performanceliquidchromatography，UPLC)法在中藥及其復(fù)方代謝物分析中也逐漸在發(fā)展階段，主要與TOF－MS，MS－MS 等檢測設(shè)備聯(lián)用，在體內(nèi)藥物檢測分析方面比HPLC 法更好。Q.Qian，S.L.Li，E.Sun，等［17］應(yīng)用UPLCMS 法研究了大鼠體內(nèi)淫羊霍苷的代謝分析。Qian Wang 等［18］采用UHPLC－MS/MS 分析方法成功地同時測定了大鼠灌胃陰陳竺傅湯后血漿中12 種成分的含量與藥代動力學(xué)變化，結(jié)果線性關(guān)系良好，回收率92.48－100.27%。Xiaochen Huang 等［19］應(yīng)用UPLC－MS 法同時測定了Beagle 犬口服少腹逐瘀湯后血漿中芍藥苷、白芍苷、阿魏酸、延胡索乙素、原阿片堿、香蒲香苷、洋川穹內(nèi)酯I 七種有效成分的藥代動力學(xué)變化。七種成分的最低定量限分別為5.0、1.8、25.7、0.3、0.4、2.6 和5.1ng·mL－1。李穎等［20］在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者雷公藤甲素血清濃度測定及其藥動學(xué)研究中也應(yīng)用該法。這些研究給我們很大的啟示，在分析速度、靈敏度和分離度方面UPLC 法分別是HPLC 法的9 倍、3 倍及1.7 倍，具有出峰時間短和分離效果更好等特點，在同樣條件下，UPLC 的分辨率能夠認(rèn)出更多的色譜峰，同時還減少了溶劑的用量從而降低了分析成本。對于組分復(fù)雜的中藥及中藥復(fù)方，分離困難等導(dǎo)致的問題都可以通過超高效液相色譜法來解決。

3.3 色譜聯(lián)用技術(shù)

色譜聯(lián)用技術(shù)(hyphenated techniqueschromatography，HTC)隨著現(xiàn)代檢測技術(shù)的發(fā)展色譜聯(lián)用技術(shù)得到了進一步的發(fā)展，尤其是串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展。由于單一的色譜分析法在定性、定結(jié)構(gòu)方面的比較差，一般只是通過各組分的保留時間來定性，但如果在待測定的中藥及其復(fù)方組分完全未知時進行定性分析就明顯地困難了，因此一種色譜分離模式往往很難將一個復(fù)雜的混合物中的所有組分都很好地分開。那么隨著一些定性和定結(jié)構(gòu)的分析手段如質(zhì)譜(MS)、紫外光譜(UV)、等離子體發(fā)射光譜(ICP－AES)，核磁共振波譜(NMR)等技術(shù)的發(fā)展，確定一個組分是什么結(jié)構(gòu)的化合物就比較容易了，因此色譜聯(lián)用技術(shù)在體內(nèi)藥物分析中使得研究者很重視并廣泛使用。如GC－MS 及HPLC－MS 聯(lián)用技術(shù)、LC－MS－MS 聯(lián)用技術(shù)、UPLC－ESI－MS 聯(lián)用的分析方法等。Hyun－moon Back 等［21］采用簡便且快速的HPLC－MS/MS 法研究了大鼠灌胃KIOM－MA128 后血漿中苦參堿的濃度測定及其藥代動力學(xué)變化。其采用等度洗脫，流動相為甲醇:水=5∶1，最低檢測限為10ng/ml。M.Liu 等［22］利用LC－MS/MS 法同時測定了大鼠灌胃中藥復(fù)方骨疏丹后血漿中淫羊霍苷、淫羊藿次苷Ⅱ、王草素三種有效成分。Shulan Su等［23］采用UHPLC－MS 法研究了少腹逐瘀湯在大鼠體內(nèi)的3 種有效生物活性成分芳香族酸的藥代動力學(xué)特征。Waiou Zhao 等［24］采用LC－MS－MS 測定了冬青苷和冬青屬植物提取液中有效成分在體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征。Huimei Huang 等［25］采用HPLC–ESI－MS/MS 分析方法，研究了麝香保心丸中5種蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯有效成分的藥代動力學(xué)特征及其組織分布，結(jié)果顯示有良好的線性關(guān)系。TaoYang 等［26］也應(yīng)用UPLC－ESI－MS 分析方法研究了正常和肝纖維化大鼠灌胃(15g·kg－1)扶正化瘀方后代謝物中六種木酚素的鑒定和定量。色譜柱:ACQUITYUPLC HSST18 column (100mm－2.1mm，i. d.1.7mm);流動相:0.1%甲酸和乙腈;進樣量5ul，結(jié)果成功地測定了六種有效成分，六種成分的LLOQ 分別是1.78、1.78、3.57、3.57、1.40和7.14ng·mL－1，此法進一步為扶正化瘀方的臨床應(yīng)用作出了有意義的指導(dǎo)。Niancui Luo 等［27］應(yīng)用UPLC－MS/MS 法對中藥當(dāng)歸根在大鼠血漿中多種生物有效成份的藥代動力學(xué)進行了研究。很多研究表明色譜聯(lián)用技術(shù)法得到了很廣泛的應(yīng)用，進一步促進了中藥復(fù)方藥代動力學(xué)研究。

4 展望

中藥及其中藥復(fù)方藥代動力學(xué)的研究發(fā)展時間較短，但通過研究者的不斷地探索和研究使其得到進一步的完善。如今研究較多的是單味中藥的單體成分和中藥復(fù)方的化學(xué)成分和藥理活性的研究，但是由于中藥復(fù)方成分更為復(fù)雜，所產(chǎn)生的藥效可能是其中多種成分相互作用的結(jié)果，且有配伍后及各種干擾因素的存在，僅僅研究中藥復(fù)方中的個別成分是不能完全來體現(xiàn)出某一中藥復(fù)方的藥代動力學(xué)特征，以及對不明確藥效成分的中藥及其復(fù)方的作用機制方面的研究的也受到很大的限制。因此這些將成為中藥及其復(fù)方藥代動力學(xué)研究的難點和必須思考的問題。

另外，在研究方法上，也面臨了許多困難如下:①由于大部分復(fù)方發(fā)揮藥效作用的成分有多種，使得藥代動力學(xué)研究的指標(biāo)成分確定困難;②許多復(fù)方中的有效成分含量較低，使其在血、尿和組織中的血藥濃度更低且難以檢測，這將要求研究者選擇有足夠靈敏的檢測方法;③被檢測成分可能會受到具有相似結(jié)構(gòu)的化合物的干擾及多種中藥及其復(fù)方配伍的影響;④生物樣品中可能存在干擾被測成分分離的內(nèi)源性雜質(zhì)、代謝產(chǎn)物及被吸收入血的其他成分等。這些都將增加了生物樣品測定在研究方法學(xué)上的難度。

因此，基于以上問題我們有必要在進行中藥復(fù)方藥動學(xué)研究之前考慮，怎樣選擇合適的檢測指標(biāo)或研究的目標(biāo)物，怎樣選擇一個滿意的體內(nèi)藥物濃度測定方法，能準(zhǔn)確、精密、穩(wěn)定低檢測出中藥及其復(fù)方中的有效成分，及怎樣準(zhǔn)確且客觀地評價中藥及其復(fù)方中多種有效成分的整體藥代動力學(xué)過程等。今后，在研究中藥及其復(fù)方藥代動力學(xué)時首先要在中醫(yī)用藥理論指導(dǎo)下進行，對生物樣品中的中藥藥效成分初步進行定性，而后進行方法學(xué)方法驗證及考察。隨著現(xiàn)代各種新的技術(shù)和新的檢測技術(shù)的發(fā)展(如HPLC 法、UPLC 法及色譜聯(lián)用技術(shù)法等)，研究者通過采用各研究方法的優(yōu)勢，更加深入地對中藥及其復(fù)方中單種和多種有效成分的藥代動力學(xué)進行探索性研究，實現(xiàn)量到質(zhì)的變化。由于我國目前藥代動力學(xué)研究大部分還停留在原形藥物成分的研究水平，其中即使對代謝產(chǎn)物進行研究也僅僅是局限到推測的色譜峰或是代謝產(chǎn)物的鑒定，那么今后的研究要加強對重要的活性代謝產(chǎn)物的藥代動力學(xué)特點的研究。這對中國傳統(tǒng)中醫(yī)藥進入現(xiàn)代化，進入國際市場都有著潛在的經(jīng)濟價值和一定的社會意義。

［1］聶彥彥. 復(fù)方血塞通滴丸指紋圖譜與藥代動力學(xué)研究［D］. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

［2］彭成成，金慧子，柳潤輝. 中藥復(fù)方藥動學(xué)研究方法概述［J］. 藥學(xué)實踐雜志，2015，33(1):5－8.

［3］畢京峰，閻博華，段鋒. 中藥復(fù)方新藥研發(fā)中的藥代動力學(xué)研究方法學(xué)［J］. 中國臨床藥理學(xué)雜志，2015，31(16):1671－1673.

［4］黃熙，臧益民，夏天，等. 試論“證治藥動學(xué)”新假說［J］.中藥藥理與臨床，1994，10(6):43.

［5］賀玉琢. 日本漢方藥“血清藥理學(xué)”，“血清藥化學(xué)”的研究概況［J］. 國外醫(yī)學(xué):中醫(yī)中藥分冊，1998，20(5):3.

［6］楊奎，蒲旭峰. 論“中藥胃腸藥動學(xué)研究”的意義及對策［J］. 中國實驗方劑學(xué)雜志，1998，4(1):36.

［7］余健，辛艷飛，宣堯仙. 中藥藥代動力學(xué)研究進展［J］中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2014，32(6):1337－1340.

［8］楊翠翠，李林. 中藥有效成分藥物代謝動力學(xué)研究方法［J］. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2011，29(9):2006－2008.

［9］李成洪，李英倫，周曉容. 中藥復(fù)方禽病康在雞體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究［J］. 中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2009，28(2):5－7.

［10］赫梅生，王堯光. 用動物急性死亡率法估計藥物體存率與表觀半衰期［J］. 中國藥理學(xué)報，1988，4(1):5－7.

［11］劉雅敏，張黎莉，婁玉鈐，等. 藥物累積法研究熱痹清片的藥物動力學(xué)［J］. 遼寧中醫(yī)雜志，2006，33(9):1171－1172.

［12］馬昕. 淺談中藥復(fù)方的藥代動力學(xué)［J］. 北方藥學(xué)，2011，8(11):18－19.

［13］HommaM，OkaK and TaniguchiC.Systematic Analysis of Post Administrative Saiboku—Tourine by Liquid Chromatography to Determine Pharmacokinetics of Traditional Chinese Medicine［J］.Biomed Chromatogr，1997，11(3):125－131.

［14］張壯，秦臘梅，陳可冀. 犬一次口服芎芍膠囊后芍藥甙的藥代動力學(xué)［J］. 中國實驗方劑學(xué)雜志，2000，6(6):21－24.

［15］黃健忠. 梔子柏皮湯不同配伍在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究［J］. 中國實用醫(yī)藥，2015，10(5):283.

［16］伍小波. 現(xiàn)代儀器分析方法在中藥藥動學(xué)研究中的應(yīng)用［J］. 現(xiàn)代中醫(yī)藥，2004，6(1):51－54.

［17］Q.Qian，S.L.Li and E.Sun.Metabolite Profiles of Icariin in Rat Plasma by Ultra－Fast Liquid Chromatography Coupled to Triple－Quadrupole/Time－of－Flight Mass Spectrometry［J］.Pharm.Biomed.Anal，2012，(66):392－398.

［18］Qian Wanga，Peng Jianga and Fu YuanYe.Identification and Pharmacokinetics of Multiple Constituents in Rat Plasma after Oral Administration of Yin chen zhu fu Decoction［J］.Journal of Ethnopharmacology，2014，153(3):714－724.

［19］Xiaochen Huang，Shulan Su and Wenxia Cui.Simultaneous Determination of Paeoniflorin，Albiflorin，F(xiàn)erulic Acid，Tetrahydropalmatine，Protopine，Typhaneoside，SenkyunolideI in Beagle Dogs Plasma by UPLC–MS/MS and its Application to Apharmacokinetic Study after Oral Administration of Shaofu Zhuyu Decoction［J］.Journal of Chromatography B，2014，(962):75－81.

［20］李穎，汪永忠，羅歡，等. 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者雷公藤甲素血清濃度測定及其藥動學(xué)研究［J］. 中國中醫(yī)藥信息雜志，2014，21(1):85－87.

［21］Hyun－moon Back，Byungjeong Song and Jung－woo Chae.Determination of Matrine in Rat Plasma after Oral Administration of Novel Korean Herbal Medicine KIOMMA128 and Application of PK［J］.Journal of Analytical Methods in Chemistry，2015，(43):1632.

［22］M.Liu，H.Liu and X.Lu.Simultaneous Determination of Icariin，Icariside II and Osthole in Rat Plasma after Oral Administration of The Extract of Gushudan (A Chinese Compound Formulation)by LC－MS/MS ［J］. Chromatogr.B，2007，860(1):113－120.

［23］Shulan Su，Wenxia Cui and Jin－Ao Duan.UHPLC－MS Simultaneous Determination and Pharmacokinetic Study of Three Aromatic Acids and One Monoterpene in Rat Plasma after Oral Administration of Shaofu Zhuyu Decoction［J］.The American Journal of Chinese Medicine，2013，41(3):697－715.

［24］Waiou Zhao，Li Pang.LC－MS/MS Determination and Pharmacokinetic Study of Pedunculoside in Rat Plasma after Oral Administration of Pedunculoside and Ilex rotunda Extract［J］.Molecules，2015，(20)5:9084－9098.

［25］Huimei Huang，YonggeYang and ChaoLv.Pharmacokinetics and Tissue Distribution of Five Bufadienolides from the Shexiang Baoxin Pill Following Oral Administration to Mice［J］.Journal of Ethnopharmacology，2015，(161):175－185.

［26］TaoYanga，ShanLiua and Tian HuiZheng.Comparative Pharmacokinetics and Tissue Distribution Profiles of Lignin Components Innormal and Hepatic Fibrosis Rats after Oral Administration of Fuzheng Huayu Recipe［J］.Journal of Ethnopharmacology，2015，(166):305－312.

［27］Niancui Luo，Zhenhao Li and Dawei Qian.Simultaneous Determination of Bioactive Components of Radix Angelicae Sinensis–Radix Paeoniae Alba Herb Couple in Rat Plasma and Tissues by UPLC–MS/MS and its Application to Pharmacokinetics and Tissue Distribution［J］.Journal of Chromatography B，2014，(963):29－39.