張亞維 河南省安陽(yáng)市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 455000

社區(qū)獲得性肺炎是在院外由細(xì)菌、病毒、衣原體和支原體等多種微生物所引起的，主要臨床癥狀是咳嗽、伴或不伴咳痰和胸疼［1］。其發(fā)病的幾率呈逐年上升趨勢(shì)，已成為研究的熱點(diǎn)。相關(guān)研究報(bào)道，主要是由革蘭陽(yáng)性菌所致，其中以肺炎鏈球菌最為常見，其陽(yáng)性率占已知病原的40%～60%。明確引起肺炎的致病菌并選擇較為敏感的抗生素，是該病的基本治療原則，常規(guī)的診斷方法包括痰培養(yǎng)、血培養(yǎng)及呼吸道分泌物檢測(cè)［2］，但隨著抗生素的濫用，這些方法都存在著一些缺陷，其對(duì)肺炎鏈球菌的檢出率較低，目前臨床上迫切尋求一種方法，代替或補(bǔ)充傳統(tǒng)痰培養(yǎng)對(duì)肺炎鏈球菌進(jìn)行診斷。本文選擇熒光定量PCR對(duì)社區(qū)獲得性肺炎患者肺炎鏈球菌進(jìn)行檢測(cè)，取得了不錯(cuò)的效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院檢驗(yàn)科2010年9月－2014年9月社區(qū)獲得性肺炎患者86例，男49例，女37例，年齡12～78歲，平均年齡46歲，所有患者均為首次患病，且未使用抗生素進(jìn)行治療。均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)2006年《社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指南》制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 方法 分別于入院后12h內(nèi)收集患者痰液，采集呼吸道分泌物標(biāo)本前均用生理鹽水漱口3次，指導(dǎo)患者咳出深部痰液，置于無(wú)菌痰盒里。對(duì)無(wú)法自然咳痰患者，給予霧化吸入誘導(dǎo)咳痰。合格痰標(biāo)本留取1ml于滅菌離心管中（熒光定量PCR用），－80℃冰箱保存待檢，其余送做痰培養(yǎng)。采用半定量方法對(duì)痰液進(jìn)行培養(yǎng)，＋＋＋區(qū)域的菌落診斷為感染；采用熒光定量PCR提取細(xì)菌DNA，菌落計(jì)數(shù)≥104cfu／ml認(rèn)為有感染意義，菌落計(jì)數(shù)＜104cfu／ml的認(rèn)為污染。所用儀器及試劑均由北京鼎國(guó)生物科技有限公司提供，并按照說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，采用Fisher精確概率法痰培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果與熒光定量PCR檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

2 結(jié)果

痰培養(yǎng)方法檢測(cè)到肺炎鏈球菌感染例數(shù)為4例，檢出率為4.7%：熒光定量PCR檢測(cè)肺炎鏈球菌感染例數(shù)為26例，檢出率為30.2%。熒光定量PCR對(duì)社區(qū)獲得性肺炎患者的檢出例數(shù)顯著高于傳統(tǒng)痰培養(yǎng)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。見表1。

表1 患者治療前各項(xiàng)指標(biāo)比較

3 討論

雖然傳統(tǒng)的痰培養(yǎng)廣泛應(yīng)用于肺炎鏈球菌的檢測(cè)，但其缺乏較高的敏感度及特異度，所以仍存在較大爭(zhēng)議［3］。相關(guān)研究已經(jīng)報(bào)道，TaqMan熒光定量PCR方法能特異地檢測(cè)和鑒定流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌，具有靈敏度高和快速檢測(cè)的特點(diǎn)，其為熒光定量PCR應(yīng)用于肺炎鏈球菌的檢測(cè)提供了理論基礎(chǔ)。

由于血培養(yǎng)及痰培養(yǎng)在對(duì)呼吸道病原體的檢出敏感度較低，所以缺乏一個(gè)合適的金標(biāo)準(zhǔn)作為定量，CR界定感染與污染的參考，因此關(guān)于界定定量PCR結(jié)果陽(yáng)性值的問(wèn)題在許多研究中都被提出［4］。本文中，用SP起始模板DNA含量≥104cfu／ml為熒光定量PCR的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，為了排除假陽(yáng)性，筆者在初始就采用肺炎鏈球菌特異度的 引 物 及 探 針［5］。

熒光定量PCR不僅對(duì)肺炎鏈球菌的檢出率較高，且其方便快速，能短期為臨床治療提供依據(jù)［6］。熒光定量PCR對(duì)多種樣本都有效，如胸腔積液、唾液等，有待于臨床拓展應(yīng)用。但由于痰培養(yǎng)分離出的致病菌仍是藥敏實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，并且能夠一次培養(yǎng)分離出多種致病菌，且熒光定量PCR花費(fèi)較高，因此痰培養(yǎng)在臨床中的地位仍然重要。若是能將熒光定量PCR作為痰培養(yǎng)的補(bǔ)充并與之聯(lián)合應(yīng)用，將大大提高病原體的檢出率和臨床治療效果。

總之，熒光定量PCR將為肺炎鏈球菌的檢測(cè)提供一種新的方法，值得臨床推廣應(yīng)用。

［1］中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)慢性阻塞性肺疾病學(xué)組.慢性阻塞性肺疾病診治指南（2007年修訂版）〔J〕.中華結(jié)核和呼吸雜志，2007，30（1）：8－17.

［2］中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)慢性阻塞性肺疾病學(xué)組.慢性阻塞性肺疾病診治指南（2013年修訂版）〔J〕.中華結(jié)核和呼吸雜志，2013，36（4）：255－264.

［3］WHO.Pneumococcal conjugate vaccine for childhood immunization－WHO position paper〔J〕.Wkly Epidemiol Rec，2007，82（12）：93－104.

［4］Rudan I，Boschi－Pinto C，Biloglav Z，et al.Pidemiology and etiology of childhood pneumonia〔J〕.Bull World Health Organ，2008，86（5）：408－416.

［5］張育才，陸權(quán).嚴(yán)重肺部感染的呼吸支持療法〔J〕.實(shí)用兒科臨床雜志，2009，24（4）：250－252.

［6］Mushy TF，Brauer AL，Sethi S，et al.Haemophilus haemolytic－US：a human respiratory tract commensal to be distinguished from Haemophilus influenzae〔J〕.J Infect Dis，2007，195（1）：81－89.