秦淑美鄒建香陳 華

(1.江蘇省金湖縣動物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600; 2.江蘇省金湖縣動物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600; 3.江蘇省金湖縣動物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600)

小鵝瘟病毒抗原免疫雞對蛋黃抗體產(chǎn)生規(guī)律的研究

秦淑美1鄒建香2陳 華3

(1.江蘇省金湖縣動物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600; 2.江蘇省金湖縣動物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600; 3.江蘇省金湖縣動物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600)

小鵝瘟病是3周齡以內(nèi)雛鵝的一種急性或亞急性的敗血性傳染病,傳播快、發(fā)病率和致死率高。本試驗通過對產(chǎn)蛋雞注射不同劑型小鵝瘟病毒的抗原,檢測抗體產(chǎn)生規(guī)律,找出制造高效率、高質(zhì)量抗小鵝瘟病毒蛋黃抗體的方法,為防治小鵝瘟病的發(fā)生和發(fā)展,降低養(yǎng)鵝的風(fēng)險積累資料。

小鵝瘟抗原;免疫;抗體

小鵝瘟是由小鵝瘟病毒引起的雛鵝急性或亞急性的敗血性傳染病。本病主要侵害出殼后4～20日齡的雛鵝，具有傳播快，發(fā)病率和致死率高的特點。本病以消化道和中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂為特征。小鵝瘟病毒屬于細小病毒科，細小病毒屬，鵝細小病毒。病毒球形，無囊膜，二十面體對稱，單股DNA病毒。對不良環(huán)境的抵抗力強。本病毒存在于患病雛鵝的肝，脾，腎，胰，腦，血液，腸道和心肌等各臟器及組織中，病毒初次分離時，將病料制成懸液接種于12～14日齡易感鵝胚的絨尿腔或絨尿膜，鵝胚一般在接種后5～8d死亡，鵝胚分離病毒連續(xù)通過多次傳代后，對胚胎致死時間穩(wěn)定在3～5d。本試驗通過收集接種了標準的小鵝瘟病毒株，48～120h死亡的鵝胚絨尿液，加入0.05%甲醛，置37℃24h滅活后，置4℃冰箱保存待用。

各種抗生素和磺胺藥對小鵝瘟病均無治療作用。本病的特異性防治依賴于被動免疫。在本病流行區(qū)域，或已被本病毒污染的炕房，雛鵝出炕后立即皮下注射蛋黃抗體，可達到預(yù)防或控制本病的流行和發(fā)生。蛋黃抗體的瓊擴效價必須在1：8以上，抗體用量與效價有密切關(guān)系。因此生產(chǎn)中非常需要蛋黃抗體預(yù)防和治療小鵝瘟。

本次試驗通過給蛋雞注射小鵝瘟病毒的不同劑型免疫抗原，檢測雞蛋黃中小鵝瘟抗體的產(chǎn)生規(guī)律，為生產(chǎn)環(huán)保，科學(xué)，高效，特效，無毒副作用的小鵝瘟蛋黃抗體積累資料。

1 材料和試劑

（1）水劑抗原：滅活小鵝瘟病毒絨尿液加生理鹽水1：1稀釋。

油劑抗原：滅活小鵝瘟病毒絨尿液與礦物油1：1混勻。

（2）瓊擴平板（8%氯化鈉溶液中加入1.0g優(yōu)質(zhì)瓊脂粉，加熱融化后，加入終濃度為0.01%硫柳貢防腐，澆制凝膠板，冷卻后置4℃保存。）

（3）標準小鵝瘟瓊擴診斷抗原。（4）健康產(chǎn)蛋雞36只。

2 方法

（1）免疫方法：每只雞肌肉注射水劑抗原1.0ml。共注射12籠，每籠3只。從第6天開始，每3-5天取蛋檢測，至抗體下降接近（0-1）log2時進行二次免疫。

再次免疫分二組：第一組6籠：每只雞肌肉注射1.0ml水劑抗原，第二組6籠：每只雞肌肉注射1.0ml油劑抗原。

（2）抗體檢測：免疫前后檢測雞蛋黃中抗小鵝瘟病毒的瓊擴抗體。每組取同一天生的蛋分成若干組，每只蛋取等量蛋黃混合作1：1稀釋，離心棄脂肪后，取液作檢測。將瓊擴凝膠板按中央1孔外圍6孔打孔，孔徑3mm，間距4mm，加樣量為25μl，同時做陰陽性血清對照。加樣后置37℃濕盒孵育24h，再室溫放置24～48h，觀察判定結(jié)果：與標準抗原形成白色沉淀線的抗體最大稀釋倍數(shù)即為蛋黃抗體的效價。

3 試驗經(jīng)過和結(jié)果

取小鵝瘟水劑抗原，翅下肌肉注射1.0ml小鵝瘟病毒抗原瓊擴抗體為陰性的普通蛋雞36只，雞群未有應(yīng)激現(xiàn)象。雞只正?；顒印a(chǎn)蛋。隨后定期集蛋并檢測其抗小鵝瘟病毒抗體水平。

第27d，測得雞蛋黃中抗小鵝瘟抗體滴度下降到（0～1）log2時，對雞群進行分組。一組注射油劑抗原每只1.0ml。另一組注射水劑抗原1.0ml/只。

收集的雞蛋分組，1：1稀釋蛋黃離心棄脂肪后取液檢測，結(jié)果如下：

一免后蛋黃中抗體水平如下：

二免后蛋黃中抗體水平如下：

4 小結(jié)

（1）水劑型抗原首次免疫雞只，只要6d就能產(chǎn)生超過有效治療和預(yù)防小鵝瘟病毒感染的抗體效價3log2，平均抗體水平達到5.8log2。

（2）首次水劑型抗原刺激機體產(chǎn)生的有效抵制小鵝瘟病毒感染的蛋黃抗體水平（高于5.8log2）維持的時間短，只能維持20d左右。20d以后，蛋黃抗體水平已低至3log2，抗體滴度已不能有效保護雛鵝抵抗外界強毒的感染，27d時，部分雞只的蛋黃抗體已檢測不到。

（3）第27d，分水劑和油劑兩種劑型再次接種免疫雞只，水劑型抗原再次加強免疫后12d，抗體水平上升到3.6log2，然后一直維持這樣的水平（3～6）log2。二次免疫后的2個月內(nèi)，蛋黃抗體最高只能達到6log2。二次免疫后54d時，蛋黃抗體降至3.4log2。油劑型再次加強免疫后，蛋黃抗體水平上升的很快很強，免疫后2個月最高可達到11.2log2。并且維持的時間更為持久，二次免疫54d時，機體產(chǎn)生的蛋黃抗體仍在7.4log2，比水劑抗原產(chǎn)生的滴度高出4log2。

5 分析和討論

本試驗用小鵝瘟病毒抗原水劑和油劑兩種劑型免疫產(chǎn)蛋雞，第一次用水劑可以讓雞群在短時間內(nèi)快速產(chǎn)生抗小鵝瘟病毒的蛋黃抗體，當抗體下降到一定值時用水劑和油劑進行第二次免疫，產(chǎn)生的蛋黃抗體水平有明顯的區(qū)別，水劑型產(chǎn)生的蛋黃抗體無論在維持高滴度效價的時間和最高滴度效價都遠不如油劑型好。因此，在相同劑量的前提下，二免用油劑型的抗原對蛋黃免疫抗體產(chǎn)生效果更好。

[1]刁有祥.簡明水禽疾病診斷與防治原色圖譜[M].化學(xué)工業(yè)，2009.