鄭夢琳等

摘 要 建立了實時熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）偶聯(lián)高特性核酸侵入反應(yīng)檢測單核苷酸多態(tài)性（SNP）的方法。優(yōu)化了體系中flap核酸內(nèi)切酶1（FEN1酶）和野生型檢測探針等用量，確定了最佳反應(yīng)條件，即FEN1酶用量為1.5 U，野生型檢測探針用量為0.125 μmol/L，0.5 μmol/L Invader突變型檢測探針，各0.25 μmol/L通用野生型（VIC）和突變型（FAM）熒光共振轉(zhuǎn)移發(fā)卡探針，顯著降低了野生型樣本和突變型樣本背景信號，避免了背景信號對檢測結(jié)果分型的干擾。采用本方法對編碼乙醛脫氫酶2（ALDH2）基因ALDH2*2位點21例樣本、細(xì)胞色素P450 2C19基因CYP2C19*2和CYP2C19*3位點各19例樣本進(jìn)行分型檢測，結(jié)果表明， ALDH2*2位點GG純合10例，GA雜合8例，AA純合3例；CYP2C19*2位點GG純合9例，GA雜合8例，AA純合2例；CYP2C19*3位點GG純合18例，GA雜合1例。使用焦磷酸測序進(jìn)行驗證，兩種方法檢測結(jié)果一致。本方法特異性好、操作簡便、耗時短、成本低，可實現(xiàn)對SNP單管閉管無污染的分型檢測。

關(guān)鍵詞 實時熒光PCR； 核酸侵入反應(yīng)； 單核苷酸多態(tài)性； 乙醛脫氫酶2基因； 細(xì)胞色素P450 2C19基因