吳俊偉等

摘要：采用急性致死試驗方法，評估了尼羅羅非魚鹽堿選育二代幼魚的半致死鹽度、半致死（碳酸鹽）堿度與半致死鹽堿度。結(jié)果表明，選育二代幼魚96 h半致死鹽度為21.809 g/L；96 h半致死堿度為8.514 g/L。10 g/L鹽度條件下，96 h半致死堿度為5.925 g/L；15 g/L鹽度條件下，96 h半致死堿度為4.583 g/L；20 g/L鹽度條件下，96 h半致死堿度為1.897 g/L。該結(jié)果為羅非魚耐鹽堿選育研究與養(yǎng)殖利用提供了基礎(chǔ)資料。

關(guān)鍵詞：尼羅羅非魚；選育二代；鹽堿度；半致死濃度；急性致死試驗

隨著我國對內(nèi)陸淡水生態(tài)環(huán)境的重視與保護加強，淡水養(yǎng)殖利用水域?qū)⒚媾R短缺。另一方面，我國尚存在著大量未被利用的鹽堿水域，這類鹽堿水域具有高鹽、高堿、高pH和復(fù)雜離子組成等特點，常規(guī)魚類品種基本無法進行養(yǎng)殖[1]。因此，培育出耐鹽堿能力強的新品種，對開發(fā)利用鹽堿水域及發(fā)展水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)具有重要現(xiàn)實意義。尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）生長快速、極易繁殖、耐受能力強，是羅非魚養(yǎng)殖中的最大品種[2]。研究表明，未經(jīng)過馴化尼羅羅非魚的最適生長鹽度為5‰～10‰[3]，直接轉(zhuǎn)入的鹽度上限為18‰[4]，緩慢轉(zhuǎn)入的鹽度上限為36‰[5]。堿性毒性試驗表明，尼羅羅非魚幼魚在pH為9.44、總堿度為41.6 mmol/L條件下96 h內(nèi)全部存活，對堿度的耐受能力高于常規(guī)淡水養(yǎng)殖種類[6]，因此，尼羅羅非魚可以作為耐鹽堿養(yǎng)殖品種的培育對象。本課題組自2012年始開展了尼羅羅非魚鹽堿馴化與選育試驗，2013年、2014年分別得到了選育一代、選育二代。本研究以尼羅羅非魚選育二代幼魚為研究對象，通過急性致死試驗，評估選育二代幼魚的鹽堿耐受能力。

1材料與方法

1.1試驗材料

選育基礎(chǔ)群體分別取自上海海洋大學(xué)羅非魚種質(zhì)資源試驗站的新吉富羅非魚選育后代（F16）、山東省淡水水產(chǎn)研究所轉(zhuǎn)引2006年由馬來西亞引進的吉富羅非魚后代和河北中捷國家級羅非魚良種場于2001年轉(zhuǎn)引國內(nèi)1994年從菲律賓直接引進的吉富品系后代（F13）。2012年6月，將當年繁育魚苗（基礎(chǔ)群體）運至河北中捷國家級羅非魚良種場，開展鹽堿耐受性與馴化選育試驗；2013年6月，由基礎(chǔ)群體繁殖獲得了選育一代，重復(fù)馴化選育試驗；2014年6月，由選育一代繁殖獲得了選育二代。

1.2試驗用水

單鹽組是通過良種場內(nèi)的鹽鹵水和地下水一定比例配制而成。單堿組是由NaHCO3分析純和良種場內(nèi)地下深井水配制而成。鹽堿混合組是先通過鹽鹵水和深井水配制成不同的鹽度，再加入一定比例的NaHCO3分析純，配制成各鹽堿梯度。配好的試驗水體沉淀2 d后，取出上層清水用于試驗。試驗水鹽度值用WYY-I型光學(xué)折射鹽度計測量，堿度值用 HI83200型多參數(shù)水質(zhì)檢測儀測量。

1.3急性致死試驗

試驗在室內(nèi)玻璃水族缸（0.3 m×0.7 m×05 m）中進行。根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，各實驗組濃度梯度設(shè)置如下：（1）單鹽組 設(shè)5個濃度梯度（18、20、22、24、26 g/L）；（2）單堿組 設(shè)6個濃度梯度（2、4、6、8、10、12 g/L）；（3）鹽堿混合組 設(shè)9個濃度梯度（鹽度10、15、20 g/L，堿度2、4、6 g/L組合）。試驗開始前一天停止喂食，挑選體質(zhì)健康、規(guī)格相近的幼魚（0.6～0.7 g），直接放入各試驗組中，每個試驗組隨機放置50尾幼魚，設(shè)置3個重復(fù)組。采取微充氧方式保證水體中溶氧充足，試驗期間不換水，注意觀察，及時撈出死魚。記錄放養(yǎng)后24 h、48 h、72 h、96 h幼魚死亡尾數(shù)。

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

整理數(shù)據(jù)，并用SPSS 22.0 軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計算在不同鹽度、堿度及鹽堿混合濃度下特定時間（24 h，48 h，72 h，96 h）的半致死濃度。不同處理間用單因素方差分析和Duncans多重比較進行分析。

2結(jié)果與分析

2.1鹽度試驗

由表1可知，尼羅羅非魚選育二代幼魚在18 g/L鹽度下96 h內(nèi)全部存活；在20 g/L鹽度下48 h開始死亡，96 h死亡率約1/6；在22 g/L鹽度下，24 h內(nèi)開始死亡，96 h時死亡率超過一半；在24 g/L鹽度下，24 h內(nèi)就有大量幼魚死亡；在26 g/L鹽度下，幼魚基本無法適應(yīng)。根據(jù)幼魚的致死情況，計算出選育二代24 h，48 h，72 h，96 h的半致死鹽度分別為23.078 g/L，22.618 g/L，22.203 g/L，21.809 g/L。

表1不同鹽度下尼羅羅非魚選育二代幼魚致死情況

鹽度/g·L-1死亡數(shù)/尾24 h48 h72 h96 h1800002003102322435673902411312313014326136143150150

2.2堿度試驗

由表2可見，尼羅羅非魚選育二代幼魚在2、4、6 g/L 堿度下96 h 內(nèi)全部存活；在8 g/L 堿度下，24 h內(nèi)有近1/3死亡，96 h死亡率為2/5；在10 g/L 堿度下，24 h內(nèi)已有近半數(shù)死亡，到96 h死亡率為4/5；在12 g/L 堿度下，幼魚基本無法適應(yīng)。選育二代24 h，48 h，72 h，96 h的半致死堿度分別是9.541 g/L，9.112 g/L，8.824 g/L，8.514 g/L。

表2不同堿度下尼羅羅非魚選育二代的致死情況

NaHCO3濃度

/g·L-1不同處理時間下的死亡數(shù)/尾24 h48 h72 h96 h2000040000600008475656601073809712012130143150150

2.3鹽堿混合試驗

2.3.110 g/L鹽度下的鹽堿混合組由表3可見，在10 g/L鹽度條件下，選育二代幼魚在堿度為2，4 g/L時96 h內(nèi)都不死亡；當堿度為6 g/L時，24 h開始死亡，96 h死亡數(shù)目已超過試驗魚總數(shù)的1/2。10 g/L鹽度條件下，選育二代幼魚的96 h半致死堿度為5.925 g/L。

2.3.215 g/L鹽度下的鹽堿混合組在15 g/L鹽度條件下，選育二代幼魚在堿度為2 g/L時96 h內(nèi)都不死亡；當堿度為4 g/L時，幼魚24 h后開始死亡，96 h死亡一半；堿度為6 g/L時，12 h內(nèi)就有死亡，96 h死亡率約為4/5。15 g/L鹽度條件下，選育二代幼魚的96 h半致死堿度為4.583 g/L。

表3不同鹽堿度下尼羅羅非魚選育二代的致死情況

鹽度NaHCO3

濃度/g·L-1不同處理時間下的死亡數(shù)/尾12 h24 h48 h72 h96 h101520200000400000601633508020000040275063836235080931132105370779049014315015015061271501501501502.3.320 g/L鹽度下的鹽堿混合組在20 g/L鹽度條件下，選育二代幼魚在堿度2 g/L時12 h內(nèi)就有死亡，96 h死亡數(shù)目達到總數(shù)的3/5；在堿度4 g/L時，12 h內(nèi)就有大量幼魚死亡，24 h幾乎全部死亡；堿度6 g/L時，幼魚基本無法適應(yīng)。20 g/L鹽度條件下，選育二代幼魚的96 h半致死堿濃度為1.897 g/L。

3結(jié)論與討論

鹽度急性致死試驗表明，隨著鹽度升高，選育二代幼魚耐受性能表現(xiàn)下降，96 h半致死鹽度為21.809 g/L。與基礎(chǔ)群體幼魚和選育一代幼魚相比，選育二代幼魚比基礎(chǔ)群體（18.584 g/L）、選育一代（21.691 g/L）都有一定提高[7-9]，選育二代幼魚與選育一代半致死鹽度間差異不顯著，但與基礎(chǔ)群體幼魚的半致死鹽度間差異顯著。表明經(jīng)鹽堿馴化選育，尼羅羅非魚選育世代鹽度耐受性能有所提高。

堿度急性致死試驗中，當堿度達到8 g/L時，選育二代幼魚才會開始死亡，隨著堿度的升高，耐受值也在不斷下降。選育二代幼魚96 h半致死堿度（8.514 g/L）明顯高于基礎(chǔ)群體幼魚的半致死堿度（7.705 g/L），略高于選育一代幼魚的半致死堿度（8.238 g/L）[8-9]。選育二代幼魚和選育一代幼魚的堿度耐受性能間差異不顯著，與基礎(chǔ)群體幼魚的堿度耐受性能間差異顯著。

在鹽堿混合試驗中，幼魚死亡率隨鹽堿度的升高而增大。當鹽度從10 g/L提高到15、20 g/L時，選育二代幼魚96 h半致死堿度分別為5925 g/L，4.583 g/L，1.897 g/L，堿度耐受值會隨鹽度的升高而迅速下降。相較于選育一代幼魚的96 h半致死堿度（5.766 g/L，4.311 g/L，1872 g/L）有一定的提高，較基礎(chǔ)群體幼魚的96 h半致死堿度（鹽度為10、15 g/L時，半致死堿度為4.435 g/L，2.930 g/L）則有較大的提高[9]。有研究認為，鹽堿混合對魚類的毒理作用并不是單個因子的作用，而是幾個方面共同作用的結(jié)果[10-13]。在本試驗中，同一鹽度下，幼魚死亡率隨堿度升高增加；同一堿度下，鹽度越高，幼魚死亡尾數(shù)越多，這也說明了鹽度和堿度之間對尼羅羅非魚存活率存在著協(xié)同作用。

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（收稿日期：2015-04-27）