彭曉濤，程凱，徐玲，李由

(1.北京醫(yī)院針灸按摩科，北京 100730；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院)

·基礎(chǔ)研究·

電針三陰交對自然圍絕經(jīng)期大鼠雌二醇和大腦皮層神經(jīng)遞質(zhì)的影響

彭曉濤1，程凱2，徐玲2，李由2

(1.北京醫(yī)院針灸按摩科，北京 100730；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院)

目的 研究電針三陰交對自然圍絕經(jīng)期大鼠卵巢雌二醇(E2)和大腦皮層神經(jīng)遞質(zhì)的影響。方法 本實(shí)驗(yàn)以自然衰老大鼠為模型，將大鼠以隨機(jī)數(shù)字法分為治療組(電針組)、模型組(對照組)、正常組(青年組)，每組7只。治療組大鼠予三陰交電針治療，隔日一次，共治療15 次。其他兩組大鼠進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)，不進(jìn)行針刺，隔日抓取。采用高效液相色譜-配以電化學(xué)檢測法(HPLC-ECD)測定各組大腦皮層中神經(jīng)遞質(zhì)的含量，酶聯(lián)免疫吸附法測定卵巢E2含量。結(jié)果 E2模型組的E2含量比正常組顯著降低(P<0.01)，治療組的E2含量比模型組顯著升高(P<0.01)。與正常組比較，模型組大鼠多巴胺(DA)含量下降不明顯(P>0.05)，NE的含量顯著下降(P<0.01)，5-羥色胺(5-HT)的含量升高顯著(P<0.01)；模型組的5-HT/去甲腎上腺素(NE)值顯著升高(P<0.01)。與模型組比較，治療組大鼠的DA含量升高顯著(P<0.01)，NE的含量也明顯升高 (P<0.05)，5-HT的含量顯著降低(P<0.01)，治療組的5-HT/NE值降低顯著(P<0.01)。結(jié)論 電針三陰交可以有效調(diào)節(jié)自然衰老圍絕經(jīng)期大鼠卵巢E2和大腦皮層神經(jīng)遞質(zhì)的含量。

圍絕經(jīng)期;電針;穴,三陰交;雌二醇;大鼠,Sprague-Dawley

圍絕經(jīng)期是婦女從生育期過渡到老年期的轉(zhuǎn)折點(diǎn)，在這一時(shí)期由于激素水平的變化所導(dǎo)致的一系列以自主神經(jīng)功能紊亂為主的癥候群，即圍絕經(jīng)期綜合征(PMS)。本病的主要臨床表現(xiàn)有骨關(guān)節(jié)痛、疲乏、情緒波動(dòng)、頭痛、失眠、潮熱、出汗等[1-3]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)的治療方法以激素替代療法(HRT)為首選，雖然療效確切，但其相關(guān)副作用的報(bào)道[4-6]亦屢見不鮮。針灸治療本病療效肯定[7]。三陰交穴作為肝脾腎三經(jīng)之匯，尤為首選[8]。本實(shí)驗(yàn)以自然衰老的圍絕經(jīng)期大鼠為模型，通過電針三陰交穴，觀察大鼠卵巢E2和大腦皮層神經(jīng)遞質(zhì)[去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)]的變化，探討E2與神經(jīng)遞質(zhì)的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皆購于北京維通利華動(dòng)物中心[SCXK(京)2012-0001]。清潔級(jí)SD大鼠共40只,3月齡SD大鼠7只,體質(zhì)量(220±20)g;11～15月齡SD 大鼠33 只，體質(zhì)量(320±20)g。實(shí)驗(yàn)室溫度(20±2)℃，濕度65%,12 h光暗周期,自由攝食、飲水。在上述條件下飼養(yǎng)30 d，自第30天晚上，禁食12 h，于第31天上午統(tǒng)一取材。

1.2 動(dòng)物模型及分組 雌性SD大鼠在11～15月齡時(shí)的激素水平及生理病理變化與人類婦女圍絕經(jīng)時(shí)期相似，通過陰道組織涂片法[9]進(jìn)行3個(gè)動(dòng)情周期(約15 d)的連續(xù)監(jiān)測。根據(jù)動(dòng)情間期陰道分泌物及細(xì)胞學(xué)的變化[10]，結(jié)果顯示大鼠處于動(dòng)情間期，符合圍絕經(jīng)期的變化規(guī)律，提示該月齡大鼠已經(jīng)進(jìn)入圍絕經(jīng)期。故而本實(shí)驗(yàn)選擇的動(dòng)物模型為11～15月齡的SD大鼠。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)，篩選出14只大鼠，以隨機(jī)數(shù)字法分組：治療組7只，模型組7只。7只3月齡的SD大鼠為正常組。

1.3 治療方法 固定大鼠，取雙側(cè)三陰交(大鼠后肢，內(nèi)踝尖直上10 mm)，直刺3 mm，連接電針儀。頻率：2/100 Hz，交替刺激；波形：疏密波；強(qiáng)度：0.1～0.2 mA，以針柄輕微顫動(dòng)為好，留針20 min，隔天1次，共15次。其他兩組不針刺，僅給予與治療組等量抓取和固定刺激。第31天統(tǒng)一取材，取材前禁食12 h。

1.4 取材和指標(biāo)含量測定 取材時(shí),大鼠快速斷頭,剝離大腦皮層;解剖腹腔,取左側(cè)卵巢。液氮保存，并放入-80 ℃冰箱。

卵巢E2采用酶免法測定；大腦皮層神經(jīng)遞質(zhì)(DA、NE、5-HT)采用高效液相色譜-配以電化學(xué)檢測法(HPLC-ECD)測定。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS21.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料先進(jìn)行正態(tài)分布t檢驗(yàn)，組間差異進(jìn)行ANOVA單因素方差分析，相關(guān)性分析采用Pearson法。

2 結(jié)果

2.1 電針三陰交穴對自然圍絕經(jīng)期大鼠卵巢E2的影響 與正常組[(671.21±140.60) pmol/L]相比，模型組的E2含量[(213.37±63.38) pmol/L]顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。和模型組相比，治療組的E2含量[(462.90±157.77) pmol/L]顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.2 電針三陰交穴對自然圍絕經(jīng)期大鼠大腦皮層中神經(jīng)遞質(zhì)的影響 見表1。

表1 各組大鼠大腦皮層中DA、NE、5-HT的比較

組別鼠數(shù)(只)DANE5-HT5-HT/NE正常組70.02±0.010.36±0.160.50±0.122.35±0.96模型組70.01±0.010.07±0.01b0.96±0.23b8.78±1.34b治療組70.03±0.01a0.21±0.03c0.51±0.16a4.12±1.90a

注：與模型組比較,aP<0.01，cP<0.05;與正常組比較,bP<0.01

2.3 圍絕經(jīng)期大鼠E2與神經(jīng)遞質(zhì)的相關(guān)性 結(jié)果表明，各組大鼠的E2與神經(jīng)遞質(zhì)的變化趨勢具有高度的相關(guān)關(guān)系。其中E2與NE、DA等兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)呈正相關(guān)，與5-HT呈負(fù)相關(guān)。利用回歸方法進(jìn)行分析顯示，E2與NE呈顯著正相關(guān)(y=2.337x - 0.074，r=0.995，P<0.01)，與DA無相關(guān)關(guān)系(r=0.069，P>0.05)。E2與5-HT呈負(fù)相關(guān)(y=-3.721x+1.113，r=0.807，P<0.01)。

3 討論

圍絕經(jīng)期綜合征在中醫(yī)屬于“絕經(jīng)前后諸癥”的范疇，在歷代文獻(xiàn)的記載，散在于多種病癥之中，如“失眠”、“臟躁”、“郁證”等。中醫(yī)理論認(rèn)為，本病與肝、脾、腎三臟關(guān)系密切。腎為先天之本，脾為后天氣血生化之源，女子則以肝為先天。腎氣虛，天癸竭，氣血不足，血海空虛，且肝腎同源，肝失疏泄，故而諸癥皆現(xiàn)。針灸治療本病，通過對相應(yīng)穴位的刺激，改善機(jī)體功能紊亂，調(diào)節(jié)人體內(nèi)分泌、神經(jīng)、免疫系統(tǒng)的失調(diào)，從而緩解相關(guān)癥狀，達(dá)到治療的目的。針灸治療的療效肯定，且安全無毒副作用，逐漸被人們所認(rèn)可。三陰交穴，是足太陰脾經(jīng)穴位，又是足三陰經(jīng)之交匯穴，可通調(diào)臟腑，有補(bǔ)肝益腎，健脾和胃，通經(jīng)活血，利濕化濁之功效，是臨床治療本病的首選穴位。

在圍絕經(jīng)期綜合征的發(fā)生發(fā)展過程中，激素水平的變化是其主要原因。卵巢作為女性的性腺，是分泌雌激素的主要場所，隨著卵巢功能衰退，E2的分泌明顯減少，實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦顯示，模型組的卵巢E2含量較正常組明顯降低(P<0.01)，符合生理變化規(guī)律。E2的減少，導(dǎo)致心血管系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、骨骼系統(tǒng)、糖脂代謝及神經(jīng)遞質(zhì)活性的異常[11-14]，出現(xiàn)抑郁、失眠、骨質(zhì)疏松、糖脂代謝紊亂等癥狀。電針三陰交后，治療組大鼠卵巢E2明顯升高(P<0.01),表明電針三陰交可以改善圍絕經(jīng)期雌激素低分泌狀態(tài)，延緩卵巢的衰老，從而緩解圍絕經(jīng)期綜合征的相關(guān)癥狀。

圍絕經(jīng)期綜合征的臨床表現(xiàn)多以自主植物神經(jīng)功能紊亂為主，如焦慮、潮熱、抑郁等，其發(fā)病機(jī)制可能與大腦皮層中樞神經(jīng)遞質(zhì)的濃度變化有關(guān)。其中，研究顯示，5-HT的濃度改變，可能對下丘腦的體溫調(diào)節(jié)中樞引起刺激而引發(fā)潮熱[15]，與失眠[16]和抑郁[17]亦有相關(guān)性。DA可能抑制促性腺激素釋放激素(GnRH)的分泌[18]，而NE的下降可能引發(fā)失眠[19]和抑郁[20]。興奮性遞質(zhì)與抑制性遞質(zhì)的釋放，需要協(xié)調(diào)的比例，才能維持穩(wěn)定的功能。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，NE的含量較正常組下降(P<0.01)，而5-HT則明顯升高(P<0.01)，進(jìn)而使5-HT/NE升高(P<0.01)。電針三陰交可以顯著調(diào)節(jié)DA、NE、5-HT的含量(P<0.01、P<0.05、P<0.01)，降低5-HT/NE的比值(P<0.01)。提示電針三陰交穴可以有效調(diào)節(jié)圍絕經(jīng)期大鼠大腦皮層神經(jīng)遞質(zhì)的含量，改善相關(guān)癥狀。

同時(shí)，E2和神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)行了回歸分析，結(jié)果顯示，E2與5-HT 呈負(fù)相關(guān)(P<0.01),與NE呈正相關(guān)(P<0.01)，表明E2與中樞神經(jīng)遞質(zhì)之間存在相關(guān)性關(guān)系，兩者之間相互作用、相互影響，共同調(diào)節(jié)機(jī)體的平衡。

[1] 笪紅英,李冬華,吳潔.圍絕經(jīng)期婦女相關(guān)問題的調(diào)查與分析[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué),2014,42(5):543-545.

[2] 劉曉燕.更年期和雌激素補(bǔ)充新觀念[J].首都醫(yī)藥,2012,14(4):57-58.

[3] 劉青，賴昭興，柳青，等.深圳市南山區(qū)圍絕經(jīng)期綜合征發(fā)生現(xiàn)狀調(diào)查[J].中國性科學(xué),2014,20(10):5-9.

[4] 曹衛(wèi)紅,彭經(jīng)緯,梁新國.激素替代療法治療圍絕經(jīng)期綜合征的進(jìn)展[J].海南醫(yī)學(xué),2013,(24):3679-3681.

[5] 章詩琪,胡運(yùn)濤,曹袁媛,等.激素替代治療圍絕經(jīng)期綜合征與乳腺癌關(guān)系的meta分析[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2009,44(3):399-402.

[6] 張巍,郭鳳軍,吳飛.圍絕經(jīng)期及絕經(jīng)后使用激素治療的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展,2014,23(3):226-228.

[7] 趙魁平,張志梅,陳生,等.圍絕經(jīng)期綜合征的針灸治療概況[J].甘肅中醫(yī)，2009,22 (10):37-38.

[8] 汪怡新,沈梅紅.針灸治療圍絕經(jīng)期綜合征臨床選穴規(guī)律探析[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2014,16(2):122-124.

[9] 鄭玲，徐莉莉，李曉泓，等.逆灸對自然更年期大鼠熱休克蛋白及應(yīng)激激素的影響[J].中國針灸，2010，30(2)：135-139.

[10] 苗明三.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，1997：165-166.

[11] 黃海玲,譚慧歡,趙瓊芝,等.葛根素與雌二醇對去卵巢大鼠子宮的影響[J].重慶醫(yī)學(xué),2013,42(1):37-39.

[12] Stearns V,Hayes DF.Approach to menopausal symptoms in women with breast cancer[J].Curr Treat Options Oncol，2002，3 (2):179.

[13] 蘇汝,劉興漠,鄧穎輝.骨質(zhì)疏松患者472例X線表現(xiàn)及骨密度分析[J].中國臨床康復(fù),2004,8(2):4355.

[14] 汪艷麗,季其仁,肖玲玲，等.圍絕經(jīng)期、絕經(jīng)后婦女性激素水平的變化及其與糖、脂代謝的關(guān)系[J].安徽醫(yī)學(xué),2005,26(1):27-28.

[15] Mc Ewen BS,Alves SE.Estrogen actions in the central nervous system[J].Endocr Rev,1999,20(3):279-307.

[16] 范利鋒，王平仁，蘭培敏.睡眠機(jī)制的研究進(jìn)展[J].臨床內(nèi)科雜志，2005,22(10):662 -664.

[17] Müller CP,Carey RJ,Huston JP,et al.Serotonin and psychostimulant addiction:focus on 5-HT1A receptors[J].Prog Neurobiol,2007,81(3):133-178.

[18] Pine A,Shiner T,Seymour B,et al.Dopamine,time,and impulsivity in humans[J].J Neurosci,2010,30(26):8888-8896.

[19] 江帆.與睡眠相關(guān)的中樞單胺類遞質(zhì)[J].國外醫(yī)學(xué):精神病學(xué)分冊 ,2001,28(1):55.

[20] 顏文偉.關(guān)于情感性精神病的生化研究[M].精神病學(xué)譯文特集，1998:39-56.

The efficacy of electro-acupuncturing Sanyinjiao on estradiol and cerebral neurotransmitters in natural premenopausal rats

PengXiaotao*,ChengKai，XuLin,LiYou

(*DepartmentofAcupuncture&Massage,BeijingHospital,Beijing100730,China)

Objective To investigate the efficacy of electro-acupuncturing (EA) Sanyinjiao on estradiol and cerebral neurotransmitters in natural premenopausal rats.Methods The natural aging rats was slected as animal model.The rats were randomly divided into treatment group (EA group),model group (control group),the normal group (youth group),7 rats in each group.Rats in EA group were treated by Sanyinjiao acupuncture every other day,and totally 15 times.Other groups of rats were feed routine and crawled every other day without acupuncture.Cortex neurotransmitter levels of each group were determined by HPLC with electrochemical detection (HPLC-ECD).The contents of estradiol of each group were detected by enzyme-linked immunosorbent assay.Results Estradiol level of model group was significantly lower than that of the normal groups(P<0.01).Compared with model group,Estradiol was increased significantly in treatment group (P<0.01).Compared with normal group,DA was decreased in model group,but no statistical significance (P>0.05),while the NE was decreased and 5-HT increasing significantly (P<0.01).The ratio of 5-HT/NE was increased significantly in model group(P<0.01).Compared with the model group,DA and NE of treatment group were significantly increased (P<0.01,P<0.05),but 5-HT was significantly decreased (P<0.01).The ratio of 5-HT/NE was decreased significantly in treatment group when compared with model group (P<0.01).Conclusion EA Sanyinjiao can effectively regulate the ovarian estradiol and cerebral cortex neurotransmitters of natural aging perimenopausal rats.There are significant correlation between estradiol and the cerebral cortex neurotransmitters including DA,NE and 5-HT.

Perimenopause ;Electroacupuncture;Point SP6 (Sanyinjiao);Estradiol;Rats,Sprague-Dawley

彭曉濤，醫(yī)師,Email:happypger@163.com

R711.51

A

10.3969/J.issn.1672-6790.2015.05.019

2015-07-10)