王園龍， 曹 林， 鄧敏捷， 馬一平，趙振利， 牛蘇燕， 王曉丹， 范國(guó)強(qiáng)

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)泡桐研究所，河南 鄭州 450002； 2.北京師范大學(xué)地理與遙感科學(xué)學(xué)院，北京 100875)

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利用高通量測(cè)序分析白花泡桐鹽脅迫相關(guān)microRNAs

王園龍1， 曹 林1， 鄧敏捷1， 馬一平2，趙振利1， 牛蘇燕1， 王曉丹1， 范國(guó)強(qiáng)1

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)泡桐研究所，河南 鄭州 450002； 2.北京師范大學(xué)地理與遙感科學(xué)學(xué)院，北京 100875)

為了鑒定和研究白花泡桐中與鹽脅迫相關(guān)的microRNAs(miRNAs)，構(gòu)建了對(duì)照組PF2和處理組PF2-S4 2個(gè)小RNA文庫(kù)。采用高通量測(cè)序技術(shù)總共鑒定出來(lái)了33個(gè)已知miRNA和80個(gè)新miRNA，在這些miRNAs中分別有27個(gè)(3個(gè)已知miRNA和24個(gè)新miRNA)差異顯著表達(dá)和有45個(gè)(13個(gè)已知miRNA和32個(gè)新miRNA)差異極顯著表達(dá). 最后采用qRT-PCR技術(shù)驗(yàn)證了5個(gè)miRNA。

白花泡桐；microRNAs；鹽脅迫；高通量測(cè)序

木本植物不僅在水土保持和維持自然界碳循環(huán)中起關(guān)鍵作用，而且為工業(yè)、造紙業(yè)等民生行業(yè)提供重要的原材料[1]。但是它們經(jīng)常遭受到環(huán)境中包括鹽脅迫在內(nèi)的多種生物和非生物脅迫而導(dǎo)致減產(chǎn)甚至死亡。當(dāng)今土壤鹽漬化不單是干旱半干旱地區(qū)的問(wèn)題，已演變成為世界范圍內(nèi)影響農(nóng)林業(yè)發(fā)展的重要因素。全球范圍內(nèi)超過(guò)10%的陸地正在遭受到不同程度的鹽漬化侵害而且還呈現(xiàn)不斷加重的趨勢(shì)[2]。所以對(duì)植物的抗鹽脅迫研究及育種已經(jīng)成為擺在植物新品種培育科研工作者面前的一道急需解決的難題。泡桐因其生長(zhǎng)迅速，材性優(yōu)良，適合農(nóng)桐間作而被廣泛種植在世界范圍內(nèi)250萬(wàn)hm2的農(nóng)田中[3,4]。泡桐產(chǎn)業(yè)的發(fā)展可以為帶來(lái)良好的經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益，但是土壤鹽漬化約束著泡桐產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。所以在泡桐的抗鹽脅迫基礎(chǔ)研究中首先鑒定出泡桐抗鹽脅迫相關(guān)基因，將有助于弄清楚泡桐的抗鹽機(jī)制，并且有針對(duì)性地進(jìn)行泡桐的新品種培育。近年來(lái)，有關(guān)泡桐抗叢枝病[5-7]，抗干旱[3, 6,8,9]的轉(zhuǎn)錄組研究取得了一定的進(jìn)展，找到了與泡桐叢枝病發(fā)病及干旱相關(guān)的基因，但是至今為止還沒(méi)有關(guān)于泡桐抗鹽脅迫等相關(guān)分子領(lǐng)域的研究報(bào)道。microRNAs(miRNAs)是一類內(nèi)源性非編碼sRNAs，在轉(zhuǎn)錄后水平上起到負(fù)調(diào)控基因表達(dá)的作用[10]。植物中，miRNAs參與包括生長(zhǎng)、發(fā)育、新陳代謝和抗脅迫等多種生物學(xué)過(guò)程[11]。目前，大量響應(yīng)植物生長(zhǎng)發(fā)育以及與脅迫相關(guān)的miRNAs被鑒定出來(lái)[10,12-14]。近年來(lái), 范國(guó)強(qiáng)等[4,15, 16]采用高通量測(cè)序技術(shù)已鑒定了二、四倍體泡桐種的差異表達(dá)miRNAs并且預(yù)測(cè)分析了它們的功能。然而，至今還未有關(guān)于鹽脅迫下泡桐的miRNAs的研究報(bào)道。本研究構(gòu)建了處理組和對(duì)照組2個(gè)sRNA文庫(kù)來(lái)鑒定分析鹽脅迫下白花泡桐的miRNAs，并采用qRT-PCR方法來(lái)驗(yàn)證鹽脅迫下白花泡桐差異表達(dá)miRNAs的準(zhǔn)確性。以期為揭示miRNAs調(diào)控鹽脅迫條件下白花泡桐體內(nèi)基因表達(dá)的分子機(jī)制，闡明鹽脅迫的分子機(jī)理奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

植物材料為河南農(nóng)業(yè)大學(xué)林木生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的二倍體白花泡桐組織培養(yǎng)苗。在溫度(25±2)℃，光強(qiáng)130 μmol·m-2·s-1，光照時(shí)間16 h·d-1的條件下進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)30 d。而后移植到室外培養(yǎng)30 d后選擇生長(zhǎng)一致植株單株栽植于裝有等量普通園土的營(yíng)養(yǎng)缽中，正常生長(zhǎng)50 d后進(jìn)行鹽脅迫處理。

以土壤含鹽量(NaCl質(zhì)量/干土質(zhì)量×100%)分別為0，0.4%設(shè)置處理試驗(yàn)且命名為PF2和PF2-S4。每個(gè)處理組設(shè)置3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。具體試驗(yàn)方法如下：(1)分別稱取每缽中所需NaCl的質(zhì)量，平均分成3份；(2)取1份完全溶于水后施入園土中，缽底墊有托盤，將滲水重新倒入缽中，避免鹽分損失，每3 d進(jìn)行1次，共計(jì)3次；(3)每次處理時(shí)，對(duì)照組PF2只加入等量水；(4)鹽分添加完畢后，每2 d澆1次水，維持75%相對(duì)土壤含水量下培養(yǎng)20 d。處理結(jié)束后，分別摘取幼苗新梢頂端第二對(duì)葉片，立即用液氮速凍后保存于-86 ℃冰箱中備用。

1.2 白花泡桐sRNA文庫(kù)的構(gòu)建及測(cè)序

本試驗(yàn)采用pBIOZOL(杭州博日)植物提取試劑提取白花泡桐總RNA，而后使用NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)和Agilent 2100生物分析儀對(duì)總RNA進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)。本試驗(yàn)的PF2和PF2-S4文庫(kù)構(gòu)建及測(cè)序交由深圳華大基因研究院采用高通量測(cè)序平臺(tái)Illumina HiSeqTM2000完成。

1.3 白花泡桐sRNA信息分析

高通量測(cè)序所得的50 nt序列，通過(guò)過(guò)濾得到可信的目標(biāo)序列，對(duì)這些序列的質(zhì)量、長(zhǎng)度及樣品間公共序列進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。通過(guò)目標(biāo)序列分類注釋，可以獲得樣品中包含的各組分及表達(dá)量信息．對(duì)未注釋的小RNA片段來(lái)進(jìn)行新miRNA預(yù)測(cè)．隨后對(duì)已知miRNA和新miRNA進(jìn)行差異分析。

1.4 已知miRNAs的鑒定

利用SOAP軟件將長(zhǎng)度在18～30 nt的高質(zhì)量片段(clean reads)匹配到白花泡桐轉(zhuǎn)錄組(http://trace.ncbi.nlm.nih.gov/Traces/sra/)。隨后完美匹配序列用Blast軟件(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/staff/tao/URLAPI/blastall/)與NCBI GeneBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和Rfam 11.0 (http://rfam.janelia.org/)數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，篩選和去除同rRNAs, scRNAs, snoRNAs, snRNAs, tRNA等相關(guān)的序列。將這2文庫(kù)中剩下的序列比對(duì)到miRBase 21.0(http://www.mirbase.org/ftp.shtml)中的已知植物miRNAs上鑒定白花泡桐已知miRNAs。

1.5 新miRNAs的鑒定

將未注釋的sRNA用于白花泡桐新miRNA的預(yù)測(cè)。使用mireap軟件 (http://sourceforge.net/projects/mireap/files/mireap/)預(yù)測(cè)2個(gè)文庫(kù)中新miRNA，繪制新miRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)圖。如果序列存在Meyers等人描述的標(biāo)準(zhǔn)：序列的長(zhǎng)度范圍在18～25 nt之間，最低自由能(minimum free energy，MFE)不高于-18 kcal·mol-1，miRNA與miRNA*之間的對(duì)稱度為7 nt、最長(zhǎng)距離為100 nt、堿基配對(duì)數(shù)為10 nt，可以看作白花泡桐中新miRNA[17]。

1.6 2個(gè)文庫(kù)中miRNA的差異表達(dá)分析

根據(jù)每個(gè)miRNA分別在PF2和PF2-S4庫(kù)中的相對(duì)表達(dá)豐度確定miRNA的差異表達(dá)，如果miRNA的fold change值 ≥1或者≤-1且P-values≤0.05，定義其在2庫(kù)中差異顯著表達(dá)；如果miRNA的fold change值≥1或者≤-1且P-values≤0.01，則定義其在2庫(kù)中差異極顯著表達(dá)。

具體計(jì)算方法如下：

(1)miRNA在各自庫(kù)中表達(dá)量歸一化值=miRNA表達(dá)量/clean reads總數(shù)*1 000 000，如果結(jié)果是0，將其變更為0.01。

(2)某一miRNA的fold change值=log2(PF2-S4庫(kù)中miRNA表達(dá)量的歸一化值/PF2庫(kù)中miRNA表達(dá)量的歸一化值)。

(3)P-values計(jì)算公式。

其中：N1代表PF2文庫(kù)序列總數(shù)；N2代表PF2-S4文庫(kù)序列總數(shù)；x代表某一miRNA在PF2文庫(kù)的表達(dá)量；y代表某一miRNA在PF2-S4文庫(kù)的表達(dá)量。

1.7qRT-PCR驗(yàn)證差異表達(dá)miRNAs

為了驗(yàn)證鹽脅迫下白花泡桐中差異表達(dá)miRNAs及其靶基因的存在和表達(dá)模式，隨機(jī)選擇了5個(gè)差異表達(dá)miRNA進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證。將生長(zhǎng)狀況良好且生長(zhǎng)一致的白花泡桐組培苗進(jìn)行0.4%濃度的鹽脅迫處理，處理方法同1.1，對(duì)對(duì)照組和處理組葉片進(jìn)行總RNA的提取，且總RNA提取與檢測(cè)方法同1.2。

PCR操作程序參照SuperScriptIIIplatinumSYBRGreenone-stepqRT-PCRkit(Invitrogen，USA)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。使用CFX96TMReal-TimePCRSystem(Bio-Rad,Hercules,CA)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其反應(yīng)體系總體積為20μL，其中，10μLSSIIIandplatinumMix、0.4μL5×buffer、0.4μLReverseprimer(10μmol·L-1)、0.4μLForwardprimer(10μmol·L-1)、0.4μLReverseuniverseprimer(10μmol·L-1)、500ngRNA，最后，用DEPC處理過(guò)的無(wú)菌水補(bǔ)至20μL。擴(kuò)增程序?yàn)椋?0 ℃，3min；95 ℃，5min；40循環(huán)(95 ℃，15s；55 ℃，30s); 40 ℃, 10min。每個(gè)樣品進(jìn)行3次技術(shù)重復(fù)。數(shù)據(jù)處理使用2-△△CT方法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量，以內(nèi)參U6rRNA進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，將白花泡桐(對(duì)照樣品PF2)的表達(dá)量作為“1”，計(jì)算出處理樣品的表達(dá)量，并作圖分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 白花泡桐sRNA文庫(kù)的構(gòu)建及測(cè)序

根據(jù)鄧敏捷等人的不同質(zhì)量濃度鹽處理下白花泡桐生理響應(yīng)研究結(jié)果，選用0.4%土壤含鹽量作為測(cè)序處理組處理質(zhì)量濃度[18]。利用Solexa/Illumina測(cè)序技術(shù)分別構(gòu)建PF2和PF2-S4 2個(gè)小RNA的cDNA文庫(kù)。在PF2和PF2-S4庫(kù)中，分別有12 248 047條和11 942 362條rawreads。然后分別去除測(cè)序質(zhì)量較低的序列、帶有5′接頭污染的序列、無(wú)插入片段的序列、沒(méi)有3′接頭序列、包含polyA的序列、小于18nt的片段，共得到12 060 908條和11 855 951條cleanreads。在2個(gè)樣品間共有序列種數(shù)1 176 068條，占庫(kù)中所有序列百分?jǐn)?shù)為16.53%；共有序列總量17 053 689條，占庫(kù)中所有序列百分?jǐn)?shù)為71.30%。測(cè)序結(jié)果表明2個(gè)樣品間序列種類上的差異比較大，但公共部分的序列表達(dá)比較集中，說(shuō)明了2個(gè)樣品在測(cè)序整體上的一致性是比較好的。

對(duì)PF2和PF2-S4文庫(kù)中sRNA進(jìn)行長(zhǎng)度作圖分析(圖1)，2個(gè)文庫(kù)中24nt長(zhǎng)度的sRNA峰值最高，分別占到sRNA總量的43.70%(PF2)和41.76%(PF2-S4)；其次是21nt長(zhǎng)度序列，分別占到sRNA總量的22.06%(PF2)和24.84%(PF2-S4)。相似的結(jié)果也出現(xiàn)在毛泡桐[4]和南方泡桐[15]等其他泡桐種的測(cè)序結(jié)果中。同時(shí)長(zhǎng)度處于20～24nt間的sRNA總數(shù)分別占其sRNA總量的92.96%(PF2)和91.88%(PF2-S4)，表明了2個(gè)樣品的sRNA文庫(kù)中均富含miRNA。

圖1 對(duì)照組(PF2)和處理組(PF2-S4)白花泡桐樣品中小RNAs的長(zhǎng)度分布

2.2 sRNA分類注釋

將sRNA匹配到Genbank數(shù)據(jù)庫(kù)和Rfam數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行sRNA的分類注釋確保每一個(gè)unique sRNA都有唯一的注釋。按照Genbank數(shù)據(jù)庫(kù)的優(yōu)先級(jí)大于Rfam數(shù)據(jù)庫(kù)且rRNAetc>known miRNA> piRNA>repeat>exon>intron的優(yōu)先級(jí)順序?qū)RNA遍歷，沒(méi)有比上任何注釋信息的sRNA用unannote表示。其中分類注釋結(jié)果中的rRNA總量可以作為一個(gè)樣品的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，植物樣品中的rRNA總量所占比例應(yīng)低于60%(表1)。PF2和PF2-S4中rRNA總量所占比例分別為3.43%和4.22%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。說(shuō)明2個(gè)樣品的sRNA是測(cè)序所得的真實(shí)可信的數(shù)據(jù)。

表1 白花泡桐對(duì)照組(PF2)與處理組(PF2-S4)小RNA分類

2.3 白花泡桐中已知miRNAs的鑒定

將PF2和PF2-S4庫(kù)中完全匹配到白花泡桐轉(zhuǎn)錄組的序列與miRBase 21.0數(shù)據(jù)庫(kù)成熟的miRNA序列進(jìn)行同源性比對(duì)，鑒定出白花泡桐已知miRNA序列33條，其中對(duì)照組(PF2)和處理組(PF2-S4)中均特有6條，2庫(kù)共有21條。鑒定出的33個(gè)已知miRNA中，有20個(gè)miRNAs分別屬于12個(gè)家族，13個(gè)miRNAs的家族未知。平均前體長(zhǎng)度和平均最低自由能分別為155 nt和-58.2 kcal·mol-1。MIR156家族、MIR166家族、MIR167-1家族、MIR168家族和MIR169-1家族在2庫(kù)中均有較高的表達(dá)量。不同的家族表達(dá)量差異較大，而且即使是同一家族中的不同成員，其表達(dá)量也有較大差異。比如MIR167-1家族中pfo-miR167d和pfo-miR167e在2 個(gè)文庫(kù)中的表達(dá)量明顯低于其他3個(gè)家族成員。結(jié)果中有趣的是已知miRNA中只有20 nt，21 nt和22 nt這3個(gè)序列長(zhǎng)度，長(zhǎng)度為21 nt的miRNA最多，共有21個(gè)，其次有9個(gè)22 nt長(zhǎng)的miRNA。這個(gè)結(jié)果與其他植物的研究結(jié)果一致，即長(zhǎng)度為21 nt 的miRNAs 表達(dá)豐度最高[19]，這也說(shuō)明了鑒定出的白花泡桐中和與鹽脅迫相關(guān)的已知miRNAs的準(zhǔn)確性。

2.4 白花泡桐中新miRNAs的鑒定

如表1所示PF2庫(kù)中沒(méi)有注釋(unannote)的sRNA有4 063 862種，共計(jì)8 899 321條；在PF2-S4庫(kù)中沒(méi)有注釋的sRNA有4 008 628種，共計(jì)8 346 779條。利用Mireap軟件對(duì)2個(gè)庫(kù)中unannote序列進(jìn)行miRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)等特征的篩選，共獲得新miRNA序列80條，其中PF2庫(kù)中特有序列34條，PF2-S4庫(kù)中特有序列29條，PF2庫(kù)和PF2-S4庫(kù)中共有序列17條。新miRNA的序列長(zhǎng)度在20 nt到23 nt之間，其中長(zhǎng)度為21 nt的新miRNA數(shù)量最多，有37條。平均前體長(zhǎng)度和平均最低自由能分別為156 nt和-47.7 kcal·mol-1。與預(yù)測(cè)出來(lái)的2個(gè)庫(kù)中已知miRNAs的表達(dá)量相比，新miRNAs的表達(dá)量總體上呈現(xiàn)較低的水平。

2.5 PF2和PF2-S4文庫(kù)中miRNAs的差異表達(dá)分析

對(duì)白花泡桐miRNA在PF2庫(kù)和PF2-S4庫(kù)中表達(dá)量進(jìn)行差異分析。與對(duì)照組PF2庫(kù)相比，在處理組PF2-S4庫(kù)中有27個(gè)miRNAs(3個(gè)已知miRNA和24個(gè)新miRNA)差異顯著表達(dá)；45個(gè)miRNAs(13個(gè)已知miRNA和32個(gè)新miRNA)差異極顯著表達(dá)(表2)。這些顯著差異和極顯著差異表達(dá)的miRNAs可能在白花泡桐的抗鹽脅迫中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。

2.6 qRT-PCR驗(yàn)證差異表達(dá)miRNA

為了進(jìn)一步驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果的準(zhǔn)確性，本研究隨機(jī)選取了5個(gè)差異表達(dá)的脅迫相關(guān)miRNAs進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證，分析鹽脅迫相關(guān)miRNAs的相對(duì)表達(dá)差異(圖2)。結(jié)果顯示，與測(cè)序結(jié)果相比，除pfo-mir890之外，pfo-miR159、pfo-miR167d、pfo-miR5021a、pfo-mir5301的表達(dá)量變化與測(cè)序的結(jié)果完全相同，說(shuō)明測(cè)序結(jié)果的可靠性。

表2 PF2和PF2-S4文庫(kù)中miRNA的差異表達(dá)分析

續(xù)表 Continuing table

注： * ：差異顯著；**：差異極顯著。

Note：*：significant difference； **：more significant difference.

圖2 差異表達(dá)miRNAs的qRT-PCR驗(yàn)證

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)采用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)PF2和PF2-S4 2個(gè)sRNAs文庫(kù)中的已知miRNA和新miRNA進(jìn)行鑒定。通過(guò)對(duì)2個(gè)文庫(kù)的小RNA長(zhǎng)度分布圖進(jìn)行分析得出了2樣品中均富含miRNA，說(shuō)明測(cè)序結(jié)果是值得信賴的；盡管有一些sRNA可能是由降解途徑產(chǎn)生，但PF2和PF2-S4的長(zhǎng)度分布沒(méi)有明顯的差異，說(shuō)明了sRNAs的長(zhǎng)度分布可能獨(dú)立于鹽脅迫而被植物其他機(jī)制控制[20]。

根據(jù)PF2和PF2-S4中miRNAs的表達(dá)分析，找到了72個(gè)與鹽脅迫相關(guān)的miRNA。其中，一些miRNAs在白花泡桐正常的生長(zhǎng)發(fā)育中不容易檢測(cè)到，但在受到鹽脅迫時(shí)會(huì)受到特異性表達(dá)而被鑒定出來(lái)；相反，一些miRNA在白花泡桐正常的生長(zhǎng)發(fā)育中可以特異表達(dá)，但受到鹽脅迫后會(huì)被抑制從而在處理后不能被鑒定出來(lái)；還有一些miRNAs在受到鹽脅迫前后發(fā)生差異表達(dá)，這些差異顯著表達(dá)和差異極顯著表達(dá)的miRNA通過(guò)上調(diào)或者下調(diào)其表達(dá)量來(lái)響應(yīng)鹽脅迫。對(duì)鑒定出來(lái)的miRNAs進(jìn)行差異表達(dá)分析，發(fā)現(xiàn)分別在PF2和PF2-S4庫(kù)中共12個(gè)特有的已知miRNA均差異顯著表達(dá)或差異極顯著表達(dá)；2個(gè)庫(kù)中共63個(gè)特有的新miRNA中，有52個(gè)miRNAs差異顯著表達(dá)或差異極顯著表達(dá)，這些miRNAs很可能在泡桐抗鹽脅迫相關(guān)的過(guò)程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。

總之，本試驗(yàn)是國(guó)內(nèi)外首次基于泡桐轉(zhuǎn)錄組對(duì)白花泡桐抗鹽脅迫miRNA進(jìn)行研究，采用高通量測(cè)序分析方法鑒定出了白花泡桐與鹽脅迫相關(guān)的miRNA。然后采用qRT-PCR方法驗(yàn)證了白花泡桐miRNAs的存在。通過(guò)miRNA在2個(gè)小RNAs文庫(kù)的差異表達(dá)情況，找到與鹽脅迫相關(guān)的miRNA，有關(guān)白花泡桐抗鹽脅迫的miRNA研究將為研究木本植物的耐鹽機(jī)制提供直接和有效的參考。

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(責(zé)任編輯：蔣國(guó)良)

Analysis of salt stress-responsive microRNAs inPaulowniafortuneiby high-throughput sequencing

WANG Yuanlong1, CAO Lin1, DENG Minjie1, MA Yiping2,ZHAO Zhenli1,NIU Suyan1, WANG Xiaodan1, FAN Guoqiang1

(1.Institute of Paulownia, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China; 2.School of Geography,Beijing Normal University,Beijing 100875,China)

To identify and investigate salt-related microRNAs(miRNAs) inPaulowniafortunei(P.fortunei), we constructed and sequenced two small RNA libraries (PF2 and PF2-S4). A total of 33 conserved and 80 novel miRNAs were identified in the two libraries by high-throughput sequencing. Among these miRNAs, 27 miRNAs (3 conserved and 24 novel) were differentially expressed and 45 miRNAs (13 conserved and 32 novel) were significantly differentially expressed in response to salt stress inP.fortunei, respectively. Finally, 5 of the miRNAs were confirmed by qRT-PCR.

Paulowniafortunei; microRNAs; salt stress; high-throughput sequecning

2015-01-20

王園龍(1989-)，男，河南濮陽(yáng)人，碩士研究生，主要從事泡桐生物技術(shù)方面的研究。

范國(guó)強(qiáng)(1964-)，男，河南禹州人，教授，博士生導(dǎo)師。

1000-2340(2015)04-0461-07

S792.43

A