繆菊連，黃照昌，李紅艷，楊麗娟

(1.大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院藥物研究所，大理 671000；2.大理藥業(yè)股份有限公司，大理 671000)

正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選羥丙基-β-環(huán)糊精對(duì)右旋龍腦的增溶條件*

繆菊連1，黃照昌2，李紅艷2，楊麗娟1

(1.大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院藥物研究所，大理 671000；2.大理藥業(yè)股份有限公司，大理 671000)

目的 探討羥丙基-β-環(huán)糊精對(duì)右旋龍腦溶解度的影響。方法 采用氣相色譜法測(cè)定右旋龍腦含量，設(shè)計(jì)L16(45)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選超聲時(shí)間、羥丙基-β-環(huán)糊精濃度、溫度、攪拌時(shí)間對(duì)右旋龍腦溶解度的影響。結(jié)果 超聲時(shí)間為60 min，羥丙基-β-環(huán)糊精濃度25%，溫度25 ℃，攪拌時(shí)間8 h，右旋龍腦溶解度為59.80 mg·mL-1。結(jié)論 羥丙基-β-環(huán)糊精對(duì)右旋龍腦溶解度有很大的提高。

羥丙基-β-環(huán)糊精；右旋龍腦；溶解度

右旋龍腦(bomeolum)原名龍腦香，又稱天然冰片，俗稱梅片，分子式為C10H180，原產(chǎn)于印尼的蘇門答臘群島，最早是從龍腦香[Dryobalanops arornatica Gaertmer]的樹干經(jīng)水蒸汽蒸餾的結(jié)晶產(chǎn)物，國內(nèi)現(xiàn)為將樟科植物樟[CinnamomunCamphora(L.) Presl]的新鮮枝葉經(jīng)水蒸汽蒸餾取其結(jié)晶產(chǎn)物即得。其氣清香，味苦、辛涼，有通諸竅、散郁火、消腫止痛、消熱解毒、去翳明目、開竅醒神、化腐生肌、抗癌治癌等藥用功效，是名貴珍稀藥材和高級(jí)香料[1]。右旋龍腦容易升華，制劑加工過程中損失較大[2]。為提高其穩(wěn)定性，20世紀(jì)80年代有學(xué)者進(jìn)行了右旋龍腦的包合研究[3-4]。另一方面，右旋龍腦的水溶解度小，約為0.3 mg·mL-1，液體制劑的開發(fā)存在一定困難。如何提高右旋龍腦的溶解度及溶出度，也是制劑研究者關(guān)注的課題。杜松等[5]采用羥丙基-β-環(huán)糊精與β-環(huán)糊精研究相溶解度問題，證明右旋龍腦與β-環(huán)糊精生成不溶性包合物，β-環(huán)糊精不能增加右旋龍腦的溶解度。右旋龍腦與羥丙基-β-環(huán)糊精生成可溶性包合物，羥丙基-β-環(huán)糊精可以增加右旋龍腦的溶解度，但沒有對(duì)影響溶解度的因素做系統(tǒng)研究。筆者采用羥丙基-β-環(huán)糊精水溶液法，通過正交實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選羥丙基-β-環(huán)糊精提高右旋龍腦溶解度較佳的實(shí)驗(yàn)條件，為右旋龍腦的羥丙基-β-環(huán)糊精包合物液體制劑的制備提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 7890A氣相色譜儀(Agilent公司)；SB5200DT超聲清洗機(jī)[必能信超聲(上海)有限公司]；HZS-H水浴震蕩器(哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司)。

1.2 試藥 右旋龍腦對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)：110881-200803，純度：99.2%)，羥丙基-β-環(huán)糊精(西安德立化工有限公司，批號(hào)：20100327，純度：99.8%)，右旋龍腦包合物(自制，純度：93.7%)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 右旋龍腦含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件 色譜柱：PEG-20M DB-WAX(30 m×0.53 mm，0.25 μm)；柱溫：170 ℃；氫火焰離子化檢測(cè)器(hydrogenflame ionization detector，F(xiàn)ID)。進(jìn)樣口溫度：170 ℃；氮?dú)饬髁浚?0 mL·min-1；氫氣流量：60 mL·min-1；空氣流量：50 mL·min-1[6]。

2.1.2 溶液的制備 對(duì)照品溶液制備：精密稱取右旋龍腦 20.0 mg，置10 mL 量瓶，以無水乙醇溶解并定容，搖勻，即為對(duì)照品溶液。供試品溶液制備：精密稱取右旋龍腦包合物樣品適量，置于10 mL量瓶，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，超聲 20 min，冷卻至室溫，定容，過濾，即為供試品溶液。陰性樣品溶液的制備：取不含右旋龍腦的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法操作，制成缺右旋龍腦的陰性樣品溶液。

2.1.3 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液0.25，0.5，1.25，2.5，5 mL置于10 mL量瓶，用無水乙醇稀釋至刻度，混勻。各取 1 μL 注入氣相色譜儀測(cè)定。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=721 660X-5 678.9，r=0.999 8,表明右旋龍腦在0.05～1.00 mg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，且陰性樣品不干擾右旋龍腦測(cè)定。

2.1.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取右旋龍腦包合物，按供試品的制備操作，平行重復(fù) 6 次，測(cè)定右旋龍腦的含量，RSD為2.04%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液1 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，求得右旋龍腦峰面積的RSD為1.57%，表明精密度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取右旋龍腦包合物，按供試品的制備操作，樣品溶液放置 0，2，4，8，12，24 h 后，精密吸取1 μL，測(cè)定右旋龍腦含量，RSD為1.16%，表明溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密吸取已知含量的右旋龍腦包合物溶液置10 mL量瓶中，加入一定量的右旋龍腦對(duì)照品溶液，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，進(jìn)樣1 μL測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

2.1.8 樣品的測(cè)定 精密吸取供試品溶液1 μL 注入氣相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算含量。

2.2 包合物的的制備 右旋龍腦的制備：取樟科植物樟[CirmamonunCamphora(L) Presl]的新鮮枝葉，經(jīng)水蒸汽蒸餾，揮發(fā)油0 ℃冷藏得到析出的結(jié)晶，結(jié)晶再用石油醚(60～90 ℃)重結(jié)晶2次，得純度為93.7%的右旋龍腦。包合物制備：配制不同濃度羥丙基-β-環(huán)糊精適量，分別加入用少量無水乙醇[7]溶解的右旋龍腦(足量)，超聲一定時(shí)間，再在振蕩器上平衡震蕩一定時(shí)間，包合液室溫放置過夜，用孔徑0.45 μm微孔濾膜過濾，得到的濾液冷凍干燥，精密稱重得固體包合物的量[8]。

表1 右旋龍腦加樣回收率實(shí)驗(yàn)

2.3 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化包合工藝 根據(jù)文獻(xiàn)及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以羥丙基-β-環(huán)糊精濃度、超聲時(shí)間、恒溫?cái)嚢钑r(shí)間及恒溫溫度為4個(gè)考察因素制訂4水平正交表，按照L16(45)正交表進(jìn)行正交設(shè)計(jì)。右旋龍腦溶解度=固體包合物中的量/配置環(huán)糊精的水量。因素水平見表2，實(shí)驗(yàn)結(jié)果及直觀分析見表3，方差分析見表4。

表2 L16(45)正交實(shí)驗(yàn)因素水平

由極差R可知，各因素對(duì)右旋龍腦溶解度影響順序?yàn)锳>B>D>C，即羥丙基-β-環(huán)糊精濃度為最主要影響因素，其次是超聲時(shí)間和恒溫溫度，最后是攪拌時(shí)間，從方差分析表4可知因素A 4個(gè)水平因素對(duì)右旋龍腦溶解度效果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，B、C和D水平內(nèi)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果并結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)性的要求，確定較好的實(shí)驗(yàn)方案為A4B1C1D1，即右旋龍腦溶解度較高的實(shí)驗(yàn)條件為：羥丙基-β-環(huán)糊精濃度25%，超聲時(shí)間為60 min，攪拌時(shí)間8 h，溫度25 ℃。

表3 L16(45)正交實(shí)驗(yàn)安排與結(jié)果

A.羥丙基-β-環(huán)糊精濃度；B.超聲時(shí)間；C.攪拌時(shí)間；D.溫度

表4 方差分析表

F0.05(3,3)=9.280；A.羥丙基-β-環(huán)糊精濃度；B.超聲時(shí)間；C.攪拌時(shí)間；D.溫度

2.4 工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 據(jù)以上所優(yōu)選條件，重復(fù)較佳工藝5次，同時(shí)測(cè)定右旋龍腦包合率，結(jié)果見表5。右旋龍腦包合率計(jì)算公式如下：右旋龍腦包合率(%)=包合物中右旋龍腦量/右旋龍腦加入量×100%。平均溶解度為59.80 mg·mL-1，平均包合率82.39%，該工藝穩(wěn)定。

3 討論

表5 工藝驗(yàn)證結(jié)果

右旋龍腦在水中溶解度很小，為了提高包合效果，可用少量乙醇等有機(jī)溶劑溶解。用少量無水乙醇溶解后放入配制羥丙基-β-環(huán)糊精相同量的水中，溶解度約為10.8 mg·mL-1，將其用羥丙基-β-環(huán)糊精制備成包合物后，溶解度增加到59.80 mg·mL-1，溶解度增加約5.5倍，比杜松等[5]研究溶解度為32 mg·mL-1增加約1.88倍；用超聲震蕩，可加快右旋龍腦的溶解平衡。在制備右旋龍腦羥丙基-β-環(huán)糊精包合物的供試品溶液含量測(cè)定時(shí)，應(yīng)選擇合適的脫包方法，由于乙醇具有較強(qiáng)的極性，能完全破壞右旋龍腦羥丙基-β-環(huán)糊精包合物，從而使右旋龍腦完全游離出來[9]，便于包合物含量的測(cè)定。羥丙基-β-環(huán)糊精是環(huán)糊精的衍生物，極易溶于水，是目前研究最多、對(duì)藥物增溶和提高藥物穩(wěn)定性效果最好的環(huán)糊精衍生物[10]。右旋龍腦制成羥丙基-β-環(huán)糊精包合物后溶解度有很大的提高，又可減少揮發(fā)損失。

[1] 李時(shí)珍.本草綱目(木部第三十四卷)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1982：1960-1970.

[2] 馬琳，周慶華.冰片損失量的測(cè)定[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，1994，10(3)：38-39.

[3] 夏開元，閆汝南，楊維嘉，等.應(yīng)用β-環(huán)糊精保存牛黃解毒片中揮發(fā)成分的實(shí)驗(yàn)研究[J].中成藥研究，1987，11(6)：5-6.

[4] 姚波，廖工鐵，洪諍，等.冰片β-環(huán)糊精包結(jié)物包結(jié)方法的研究[J].中成藥研究，1987，11(11)：1-2.

[5] 杜松，黃海，劉美鳳，等.天然冰片與兩種β-環(huán)糊精的相溶解度研究[C].廣州：廣州醫(yī)藥2006年藥學(xué)(羊城)論壇/沙龍，2006：115-117.

[6] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：56.

[7] 林雄，褚克丹.醒鼻凝膠劑中天然冰片的β-環(huán)糊精包合工藝研究[J].海峽藥學(xué)，2008，20(4)：14-16.

[8] 王靖，張鐵軍，廖茂梁，等.冰片-羥丙基-β-環(huán)糊精包合的研究[J].天津中醫(yī)藥，2007，24(2)：150-152.

[9] JOSEF P T，TERUHIKO H S.Effects of ethanol on for-mation of inclusion complexes of hydroxypropyl cyclodextrins with testosterone or with methyl orange[J].Int J Pharm，1992，80(3)：243-251.

[10] 崔福德.藥劑學(xué)[M].7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：358.

2014-01-22

2014-02-25

*大學(xué)生科研基金項(xiàng)目(KYSX2013084)

繆菊連(1977-)，女，云南宣威人，副教授，碩士，從事藥劑學(xué)的研究與教學(xué)工作。電話：(0)15125282836，E-mail：582090645@qq.com。

R286；TQ460.1

B

1004-0781(2015)02-0266-03

DOI 10.3870/yydb.2015.02.035