王向娟

(杭州市中醫(yī)院中藥房，杭州 310000)

保心寧膠囊中柚皮苷與新橙皮苷的含量測定

王向娟

(杭州市中醫(yī)院中藥房，杭州 310000)

目的 建立高效液相色譜(HPLC)法測定保心寧膠囊中柚皮苷和新橙皮苷的含量。方法 色譜柱：Agilent XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：甲醇-1%冰醋酸(35：65)；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測波長：283 nm；進樣量10 μL。結果 柚皮苷在0.074～2.210 μg范圍內(nèi)，新橙皮苷在0.077～2.317 μg范圍內(nèi)線性關系良好；柚皮苷的平均回收率為97.73%，RSD為1.66%(n=9)，新橙皮苷的平均回收率為97.23%，RSD為1.24%(n=9)。結論 該方法操作簡單，專屬性強，重復性好，可用于保心寧膠囊的質(zhì)量控制。

保心寧膠囊；柚皮苷；新橙皮苷；色譜法，高效液相；含量測定

保心寧膠囊由丹參干浸膏、三七生粉、當歸干浸膏、枳殼干浸膏、生姜浸膏混勻、干燥、裝膠囊制成，具有活血化瘀、行氣止痛的功效，臨床用于治療心絞痛、心律失常，可改善冠心病癥狀[1]。原標準收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》(中藥成方制劑)第11冊，僅包括了性狀、紫外鑒別、化學顯色鑒別及膠囊劑的常規(guī)檢查，并無含量測定[1]。含量測定項的缺失，無法保證該藥的質(zhì)量，筆者在本實驗中以柚皮苷和新橙皮苷為對照，采用高效液相色譜(HPLC)法，對方中的枳殼進行含量測定，以期全面控制該藥質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1200系列高效液相色譜儀，包括脫氣機(JP73066435)、四元泵(DE62969922)、自動進樣器(DE64772263)、柱溫箱(DE90374667)、DAD檢測器(DEAA304509)；色譜儀工作站采用Chemistation工作站。AG285型電子天平(METTLER TOLEDO公司)。

1.2 試劑與藥品 柚皮苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110722-201111，含量以93.2%計)；新橙皮苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111857-201102，含量以99.6%計)；保心寧膠囊(武漢雙龍藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：110701，110702，110703，采用批號110701樣品進行方法學研究)。陰性樣品(采用自購藥材，模擬工藝制備)。試劑：甲醇為色譜純，其他為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-1%冰醋酸(35：65)；流速：1.0 mL·min-1，柱溫：30 ℃，檢測波長：283 nm，進樣量10 μL，理論板數(shù)按圖譜中的柚皮苷峰計算，應不低于3 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取柚皮苷對照品36.83 mg(以柚皮苷計)，新橙皮苷對照品38.62 mg(以新橙皮苷計)，共同置于100 mL量瓶，用適量甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備溶液，精密吸取該溶液5.0 mL，置25 mL量瓶，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液(每毫升溶液中含柚皮苷73.66 μg、新橙皮苷77.24 μg)。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物約0.2 g，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加入適量甲醇，超聲處理(250 W，33 kHz)20 min，取出，放冷，用甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液 按處方量稱取各組分，除去枳殼后，按標準中的制法制成陰性樣品，取該陰性樣品，按照上述供試品溶液的制備方法，制成陰性樣品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性實驗 分別精密吸取“2.2”項對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10 μL，按照上述色譜條件，注入高效液相色譜儀進行分析，記錄色譜圖。結果表明，供試品色譜圖中分別呈現(xiàn)與對照品色譜圖中保留時間相一致的兩個色譜峰，柚皮苷和新橙皮苷峰的分離度好，且與相鄰色譜峰的分離度均>1.5，陰性樣品無干擾。見圖1。

2.4 線性關系考察 精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液1.0，5.0，10.0，15.0，20.0，25.0，30.0 μL注入高效液相色譜儀，以各待測組分的峰面積為縱坐標，各待測組分的進樣量(μg)為橫坐標進行回歸計算，得柚皮苷的回歸方程為：Y=816.81X+1.854 0，r=0.999 9(n=7)，得到新橙皮苷的回歸方程為：Y=882.51X+4.146 15，r=0.999 9(n=7)。上述實驗結果表明：柚皮苷在0.074～2.210 μg范圍內(nèi)，新橙皮苷在0.077～2.317 μg范圍內(nèi)，進樣量與峰面積均呈現(xiàn)良好的線性關系。

A.對照品；B.供試品；C.陰性樣品；1.柚皮苷；2.新橙皮苷

圖1 3種溶液HPLC色譜圖

2.5 精密度實驗 分別精密吸取“2.2.1”項柚皮苷、新橙皮苷混合對照品溶液10 μL，按照上述色譜條件，注入高效液相色譜儀進行分析，連續(xù)進樣6次，記錄圖譜，分別計算柚皮苷、新橙皮苷峰面積，RSD分別為0.38%和0.46%(n=6)。結果表明本方法的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實驗 分別精密吸取同一份供試品溶液10 μL，按照上述色譜條件，分別在0，2，4，6，8，10 h各注入高效液相色譜儀進行分析，記錄圖譜。各圖譜中，柚皮苷與新橙皮苷峰面積的RSD分別為1.6%、1.5%(n=6)。上述結果表明，供試品溶液在10 h內(nèi)峰面積基本穩(wěn)定。

2.7 重復性實驗 取同一批供試品，按“2.2.2”項供試品溶液的制備方法處理，平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測定，柚皮苷和新橙皮苷的平均含量分別為18.55，19.36 mg·g-1，RSD分別為1.3%和1.6%(n=6)，表明方法重復性較好。

2.8 加樣回收率實驗 精密稱取同一批保心寧膠囊(批號：110701)內(nèi)容物9份(約0.1 g)，分別置50 mL量瓶，每3份為一組，分別加入對照品儲備溶液(每毫升分別含柚皮苷0.368 3 mg、新橙皮苷0.386 2 mg)4.0，5.0，6.0 mL，再各加入甲醇適量，按“2.2.2”中供試品溶液制備方法處理，照上述色譜條件測定，各取10 μL注入高效液相色譜儀，測定柚皮苷與新橙皮苷的含量，計算回收率，結果見表1，2。柚皮苷平均加樣加樣回收率97.73%，RSD=1.66%，新橙皮苷平均加樣回收率97.23%，RSD=1.24%。

表1 柚皮苷加樣回收率測定結果

表2 新橙皮苷加樣回收率測定結果

2.9 樣品含量測定 取3批樣品，按供試品溶液制備方法制備，按上述色譜條件測定計算，結果見表3。

表3 樣品中柚皮苷和新橙皮苷含量測定結果mg·g-1

3 討論

3.1 測定指標的選擇 本品臨床上用于治療心絞痛、心律失常、冠心病等，因此，處方中活血化瘀的丹參、三七被認為是君藥、臣藥，在質(zhì)量標準的研究中也以研究丹參、三七的質(zhì)量控制為主，如原兒茶醛、丹參酮Ⅱ A、丹酚酸B、人參皂苷Rg1等的含量測定[2-8]。但筆者認為，中醫(yī)理論認為“氣為血之帥、血為氣之母”，因此在處方的組成中除了生血、活血、祛瘀的藥材之外，需要配伍以破氣除弊的枳殼，且本品的功效“行氣止痛”主要是枳殼發(fā)揮藥效，枳殼在處方中的作用與其他藥材相輔相成，因此很有必要研究枳殼的含量測定項目。柚皮苷與新橙皮苷的活性較強，是枳殼含量測定的指標性成分，因此選擇柚皮苷與新橙皮苷對本品中的枳殼進行質(zhì)控。

3.2 波長的選擇 采用二極管陣列檢測器對柚皮苷、新橙皮苷進行在線光譜檢測，結果顯示在283 nm處，兩者均有最大吸收，故選用283 nm作為測定波長。

3.3 流動相的選擇 筆者比較了《中華人民共和國藥典》2010年版中乙腈-磷酸-水、甲醇-冰醋酸-水以及甲醇-水3種流動相，結果甲醇-水系統(tǒng)為流動相峰形較寬，新橙皮苷峰與雜質(zhì)峰完全無法分開，甲醇-磷酸-水系統(tǒng)中新橙皮苷峰與雜質(zhì)峰分離效果不佳，如要達到較好的分離效果，新橙皮苷的出峰時間達到70 min，而甲醇-冰醋酸-水溶液系統(tǒng)只要30 min即可達到良好的分離度。且在比較過程中發(fā)現(xiàn)，冰醋酸濃度高于0.5%時，柚皮苷與新橙皮苷的峰形以其與雜質(zhì)峰的分離度均較好，故選擇甲醇-1%冰醋酸水溶液系統(tǒng)。

3.4 提取條件的考察 在提取方式上比較了超聲處理20，30 min，回流30，60 min幾種方法，結果均無明顯差異。為了方便操作，選擇用甲醇超聲20 min即可。在提取溶劑的選擇上，比較乙醇、甲醇、50%甲醇的提取效果，結果50%甲醇提取雜質(zhì)更多，乙醇的提取效果比甲醇略低，故采用甲醇作為提取溶劑。

3.5 耐用性的考察 曾使用了安捷倫公司XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、迪馬公司DiamonsilTMC18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、島津公司Shimadzu VP-ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)對本品進行分析，結果3種不同品牌C18柱均能在上述色譜條件下得到很好的分離，色譜柱耐用性較好。

本法操作簡便，結果準確、靈敏度高，重復性好，可以有效用于本品中枳殼的質(zhì)量控制。

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2014-02-13

2014-03-14

王向娟(1984-)，女，浙江義烏人，中藥師，學士，研究方向：中藥學。電話：(0)15925643819，E-mail：wxj_0807@163.com。

R286；R927.1

B

1004-0781(2015)02-0258-04

DOI 10.3870/yydb.2015.02.032