黃蓓，劉華鋼，梁美艷，朱丹，黃敏

壯藥黃花調(diào)氣飲的質(zhì)量控制*

黃蓓1，劉華鋼2，梁美艷3，朱丹2，黃敏1

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院藥物研發(fā)中心，南寧 530011；2.廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，南寧 530021；3.廣西壯族自治區(qū)梧州市食品藥品檢驗(yàn)所，梧州 543000)

目的 建立壯藥黃花調(diào)氣飲的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用薄層色譜法對黃芪、山銀花、甜茶進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法測定山銀花中綠原酸含量，Ultimate色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，甲醇-水-冰醋酸(20：80：1)為流動相，柱溫30 ℃，流速1.0 mL·min-1，檢測波長327 nm，進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果 黃芪、山銀花、甜茶薄層色譜斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)。綠原酸在0.141 6～0.991 2 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 9)，平均回收率為102.2%，RSD為0.68%。結(jié)論 該方法簡便易行，重復(fù)性較好，可用于壯藥黃花調(diào)氣飲的質(zhì)量控制。

壯藥；黃花調(diào)氣飲；色譜法，薄層；色譜法，高效液相

壯藥黃花調(diào)氣飲為劉華鋼教授根據(jù)民間驗(yàn)方，運(yùn)用壯醫(yī)獨(dú)特的“調(diào)氣機(jī)，通三道”治療原則和臨床診療經(jīng)驗(yàn)研制而成的茶劑，該制劑現(xiàn)正在進(jìn)行制劑注冊申請。制劑處方由黃芪、山銀花、大棗、浮小麥、甜茶組成，生產(chǎn)工藝為取黃芪、浮小麥、大棗加水煎煮2次，合并煎液，濾過，濾液濃縮成清膏后，加入山銀花、甜茶粗粉，烘干，粉碎成粗粉，制成袋泡茶。其具有順氣解毒、調(diào)氣補(bǔ)虛的功用，可通調(diào)氣道，順氣解毒，用于四時(shí)感冒，尤以虛人感冒、老人感冒、小兒感冒更宜[1-3]。為了控制制劑質(zhì)量，對處方中黃芪、山銀花、甜茶進(jìn)行薄層色譜(thin layer chromatography，TLC)法鑒別，并采用高效液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)法測定制劑中山銀花[4]的有效成分綠原酸[5-6]。所建立的方法具有較好的分離度、重復(fù)性、專屬性，且操作簡便準(zhǔn)確，可以有效地控制壯藥黃花調(diào)氣飲的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津高效液相色譜儀(包括LC-20A元泵，SIL-20A標(biāo)準(zhǔn)自動進(jìn)樣器，SPD-20A紫外-可見檢測器，CTO-20A柱溫箱，CBM-20A工作站)；Sartorius BP211D電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；SK2200LHC超聲波清洗機(jī)(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)；Agilent8453紫外-可見分光光度計(jì)(美國安捷倫)；LG16-W高速離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；硅膠G板、聚酰胺薄膜(浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠)。

1.2 試藥 黃芪對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號：20120502)；綠原酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110753-200413)；甜茶對照藥材(南寧生源中藥飲片有限責(zé)任公司，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)韋松基教授鑒定為薔薇科植物甜葉懸鉤子RubussuavissimusS.Lee的干燥葉，批號：100201)；甲醇(色譜純，美國 Fisher 公司)；水為超純水，其余試劑為分析純。壯藥黃花調(diào)氣飲(批號：20110605，20110610，20110614)由廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院制劑室生產(chǎn)。

2 TLC鑒別

2.1 山銀花 取本品0.5 g，加甲醇10 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺山銀花的陰性對照樣品0.5 g，同法制成陰性對照溶液。再取綠原酸對照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[7]實(shí)驗(yàn)，吸取上述溶液各2 μL分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以36%乙酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈光(波長365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。缺山銀花陰性樣品無相應(yīng)斑點(diǎn)。見圖1。

1～3.供試品；4.綠原酸；5.陰性對照

2.2 黃芪 取本品3.5 g，加甲醇30 mL，超聲處理1 h，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100～200目，10 g，內(nèi)徑為10 mm)上，用40%甲醇100 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗2次，每次20 mL，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺黃芪的陰性對照樣品3.5 g，同法制成陰性對照溶液。再取黃芪對照藥材3 g，加甲醇30 mL，超聲處理1 h，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100～200目，5 g，內(nèi)徑為10 mm)上，從“用40%甲醇100 mL洗脫”起，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述溶液各5～10 μL分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯(5：5)為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏后，置紫外燈光(波長365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。見圖2。

2.3 甜茶 取本品1.0 g，加甲醇10 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺甜茶的陰性對照樣品1.0 g，同法制成陰性對照溶液。再取甜茶對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述溶液各5～10 μL分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(8：2：0.4)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈光(波長365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。見圖3。

1～3.供試品；4.黃芪對照藥材；5.陰性對照

1-3.sample；4.Astragaliradixreference ；5.negative control

Fig.2 TLC chromatogram ofAstragaliradix

1-3.sample；4.Foliumrubisuavissimireference；5.negative control

Fig.3 TLC chromatogram ofFoliumrubisuavissimi

3 HPLC法測定山銀花中綠原酸

3.1 色譜條件 Ultimate色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸(20：80：1)為流動相；柱溫30 ℃；檢測波長327 nm；流速1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量10 μL[8-9]。

3.2 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品適量，制成每毫升含綠原酸70 μg 。

3.3 供試品溶液的制備 取本品約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液5 mL，置25 mL棕色瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.4 陰性樣品溶液的制備 分別按處方比例及制劑制備工藝制備不含山銀花的陰性樣品，再按“3.3”項(xiàng)下方法制備，即得。

3.5 專屬性實(shí)驗(yàn) 取陰性樣品溶液、對照品溶液和樣品溶液，按照“3.1”項(xiàng)下色譜條件，注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣量10 μL，陰性溶液在綠原酸色譜峰處無干擾峰出現(xiàn)，表明對被測成分無干擾。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于6 000。見圖4。

3.6 線性關(guān)系考察 精密稱取綠原酸對照品1.77 mg置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成濃度為70.8 μg·mL-1的綠原酸對照品溶液，取上述綠原酸對照品溶液分別進(jìn)樣2，4，6，8，10，12，14 μL記錄綠原酸峰面積值。以對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，對應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=3.2×106X-22 423(r=0.999 9)，結(jié)果表明綠原酸進(jìn)樣量在0.141 6～0.991 2 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

3.7 精密度實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)行分析測定綠原酸峰面積值，計(jì)算綠原酸含量RSD值為0.35%。

3.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，8，10，12 h進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10 μL，分別測定其峰面積值，RSD=0.37%(n=7)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定，

3.9 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品，按“3.3”項(xiàng)下方法重復(fù)提取6份作為供試品溶液，按“3.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測定，記錄綠原酸峰面積，求出其含量，計(jì)算RSD值為0.25%(n=6)。

3.10 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取己知含量的樣品6份，每份約0.5 g，分別精密加入4.29 mg·mL-1綠原酸對照品溶液1 mL，按“3.3”項(xiàng)下方法制備供試品，按照“3.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，進(jìn)樣量10 μL，測定峰面積，綠原酸的加樣回收率為102.2%，RSD為0.68%。見表1。

3.11 樣品測定 按上述色譜條件測定3批制劑中綠原酸含量，每批制劑測3份，平均含量分別為8.01，7.90，7.92 mg·g-1。

4 討論

筆者曾對制劑中另二味藥大棗、浮小麥進(jìn)行過薄層鑒別[10]，結(jié)果在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，有相同顏色的熒光斑點(diǎn)，但陰性對照存在干擾，大棗和浮小麥的薄層鑒別不宜作為壯藥黃花調(diào)氣飲的薄層鑒別項(xiàng)目。

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，綠原酸對照品溶液在327 nm波長處有最大吸收[11-14]。取綠原酸對照品的甲醇溶液，在紫外分光光度計(jì)上進(jìn)行掃描，測得最大吸收波長為327 nm，與文獻(xiàn)報(bào)道相吻合，故本實(shí)驗(yàn)采用327 nm為檢測波長。

筆者曾試用流動相：乙腈-0.4%磷酸溶液(13：87)[15]，甲醇-水-冰醋酸(15：85：1)，甲醇-水-冰醋酸(25：75：1)，甲醇-水-冰醋酸(20：80：1)。實(shí)驗(yàn)條件摸索證實(shí)，采用流動相甲醇-水-冰醋酸(20：80：1)時(shí)，樣品中綠原酸與其他雜質(zhì)峰分離較好，并能在15 min內(nèi)出峰完畢，達(dá)到分析要求，故選擇甲醇-水-冰醋酸(20：80：1)為流動相。

筆者比較25，30，35 ℃柱溫對高效液相色譜的影響，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，柱溫對綠原酸峰的分離度和保留時(shí)間影響不大，因此選擇較接近室溫的柱溫30 ℃。

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Quality Control ofHuanghuaTiaoqiDecoction ofZhuangMedicine

HUANG Bei1, LIU Huagang2, LIANG Meiyan3, ZHU Dan2, HUANG min1

(1.RuikangHospitalAffiliatedtoGuangxiUniversityofChineseMedicine,GuangxiZhuangAutonomousRegion,Nanning530011,China; 2.GuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China; 3.WuzhouFoodandDrugAdministration,GuangxiZhuangAutonomousRegion,Wuzhou543000,China)

Objective To develop a quality control standard ofhuanghuatiaoqidecoction ofZhuangMedicine. Methods Thin layer chromatography (TLC) was applied to identifyAstragaliradix,Loniceraeflos, andFoliumrubisuavissimi.HPLC was employed to determine the content of chlorogenic acid inLoniceraeflos.The chromatography conditions consisted of Ultimate column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) with mobile phase of methaonl-water-glacial acetic acid (20：80：1), column temperature of 30 ℃, flow rate of 1.0 mL·min-1, UV detection wavelength of 327 nm, and injection volume of 10 μL. ResultsAstragaliradix,Loniceraeflos,Foliumrubisuavissimiwere indentified by TLC.Chlorogenic acid showed a good linear relationship at a range of 0.141 6-0.991 2 μg,r=0.999 9.The average recovery was 102.2%, and RSD was 0.68%. Conclusion The methods are shown to simple to operate, and can be used for the quality control ofhuanghuatiaoqidecoction ofZhuangMedicine.

ZhuangMedicine;Huanghuatiaoqidecoction; Chromatography, thin layer; Chromatography, high performance liquid

2014-02-25

2014-06-06

*廣西中醫(yī)藥管理局項(xiàng)目(GZYZ-10-31)；廣西教育廳項(xiàng)目(201010LX051)；廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(桂科攻0332007)

黃蓓(1975-)，女，廣西南寧人，副主任中藥師，學(xué)士，從事新藥研發(fā)工作。電話：(0)13217718960，E-mail：pp0425pp@163.com。

劉華鋼(1956-)，女，教授，博士生導(dǎo)師，博士，主要從事藥理學(xué)及藥劑學(xué)研究。電話：0771-5700208，E-mail：hgliu206@263.net。

R286；R927.2

B

1004-0781(2015)02-0252-04

DOI 10.3870/yydb.2015.02.030