曾亮明

(福州大北農(nóng)生物技術(shù)有限公司，福建福州350014)

豬繁殖與呼吸綜合征是當(dāng)今國(guó)內(nèi)乃至世界養(yǎng)豬業(yè)的主要?dú)⑹?，如何有效地控制豬繁殖與呼吸綜合征帶來(lái)的危害，保證養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，一直以來(lái)是全球性的豬病熱點(diǎn)。針對(duì)本病，筆者就近年來(lái)防控PRRS的工作經(jīng)驗(yàn)、教訓(xùn)和學(xué)習(xí)心得談幾點(diǎn)不成熟的看法，謹(jǐn)與同行交流。

1 當(dāng)前PRRS對(duì)豬群危害的主要表現(xiàn)

1.1 繁殖障礙時(shí)有發(fā)生

母豬繁殖障礙主要表現(xiàn)為妊娠后期母豬的流產(chǎn)、早產(chǎn)、難產(chǎn)、產(chǎn)死胎；圍產(chǎn)期母豬的持續(xù)高熱；初生仔豬的大批死亡；公豬精液受損、母豬返情率高，發(fā)病豬場(chǎng)的病程約4個(gè)月，圍產(chǎn)期母豬的病死率3%～5%不等，哺乳仔豬的全群死亡率高達(dá)40%左右，母豬返情率高達(dá)50%。

由藍(lán)耳病導(dǎo)致的繁殖障礙現(xiàn)象在很多情況下都能發(fā)生。

首先在PRRS陰性或無(wú)臨床危害的陽(yáng)性（感染低毒力毒株或感染率較低）豬場(chǎng)。如果很難長(zhǎng)時(shí)間地與外界切斷所有的聯(lián)系，那么一旦強(qiáng)毒株入侵，勢(shì)必暴發(fā)PRRS。

其次，許多免疫了藍(lán)耳病疫苗的豬場(chǎng)，仍然存在嚴(yán)重的繁殖障礙現(xiàn)象，即使種豬群加強(qiáng)藍(lán)耳病疫苗的免疫，該現(xiàn)象仍不能得到有效解決。

1.2 致死性呼吸道障礙隨處可見(jiàn)

致死性呼吸道障礙多發(fā)生在陽(yáng)性 （毒力偏強(qiáng)，感染率高）豬場(chǎng)。盡管之前有研究發(fā)現(xiàn)，在陽(yáng)性豬場(chǎng)內(nèi)，母乳抗體可使大部分初生仔豬獲得3～4周的被動(dòng)免疫保護(hù)，但從目前國(guó)內(nèi)的情況看，母乳抗體的保護(hù)是極其有限的，甚至許多早期（14日齡左右）免疫過(guò)PRRS弱毒疫苗的仔豬仍然發(fā)病，主要表現(xiàn)為保育豬繼發(fā)感染（副豬嗜血桿菌、鏈球菌等）嚴(yán)重，發(fā)病高峰多出現(xiàn)在40～60日齡，藥物防制無(wú)明顯效果，死淘率15%～40%不等。

1.3 藍(lán)耳病導(dǎo)致的免疫抑制日趨嚴(yán)重

1.3.1 影響豬瘟免疫質(zhì)量

豬瘟免疫檢測(cè)不達(dá)標(biāo)的現(xiàn)象越來(lái)越普遍，許多豬場(chǎng)的母豬豬瘟抗體陽(yáng)性率徘徊在60%左右。碰上這種現(xiàn)象，許多豬場(chǎng)會(huì)理性地深挖豬瘟疫苗及免疫操作等因素，這是必要的，但往往對(duì)藍(lán)耳病因素缺乏關(guān)注。

關(guān)于藍(lán)耳病影響豬瘟免疫質(zhì)量的問(wèn)題，國(guó)內(nèi)許多專(zhuān)家很早就發(fā)現(xiàn)并呼吁關(guān)注。早在2001年，西南農(nóng)業(yè)大學(xué)佘永健教授從臨床現(xiàn)象結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)求證了該現(xiàn)象的存在。中國(guó)農(nóng)大楊漢春教授于2005年通過(guò)攻毒實(shí)驗(yàn)證實(shí)并著文報(bào)道了該現(xiàn)象的存在。

筆者從近幾年的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)總結(jié)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)豬群中藍(lán)耳病抗體S/P值高的比例偏大（未免群S/P值＞1.0者比例＞10%；免疫群S/P值＞2.0者比例＞10%），且S/P值離散度偏大（樣品S/P值變異系數(shù)超過(guò)40%）時(shí)，該豬群豬瘟抗體檢測(cè)合格率不理想。以2011年福州大北農(nóng)技術(shù)服務(wù)檢測(cè)中心對(duì)全國(guó)200多個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)的跟蹤檢測(cè)數(shù)據(jù)看，100%符合以上規(guī)律。

1.3.2 毒力偏強(qiáng)疫苗導(dǎo)致嚴(yán)重的免疫抑制

眾所周知，藍(lán)耳病導(dǎo)致免疫抑制。在此筆者著重關(guān)注的是接種毒力偏強(qiáng)的PRRS活疫苗導(dǎo)致免疫抑制的問(wèn)題。這種現(xiàn)象主要表現(xiàn)為持續(xù)免疫某種PRRS活疫苗一定時(shí)期后，豬群繼發(fā)感染加重，豬場(chǎng)生產(chǎn)水平持續(xù)惡化。這是許多豬場(chǎng)認(rèn)為免疫PRRS疫苗無(wú)效甚至有害的根源。

2 藍(lán)耳病的免疫機(jī)制

2.1 體液免疫

IgM感染后5～7天出現(xiàn)，2～3周降至檢測(cè)限以下，IgG感染后7～10天出現(xiàn)，4周達(dá)高峰，中和抗體（NAs）感染后3周出現(xiàn)，60天達(dá)高峰，并以較低水平長(zhǎng)期存在。

多年的免疫實(shí)踐揭示，免疫PRRS疫苗所產(chǎn)生的特異性體液免疫的臨床保護(hù)意義是極其有限的。有幾個(gè)原因值得我們考慮。一、許多抗體在免疫后一周左右出現(xiàn)并持續(xù)存在數(shù)月，但與保護(hù)作用無(wú)關(guān)；二、中和性抗體產(chǎn)生延遲，免疫后3周才出現(xiàn)，并以較低水平長(zhǎng)期存在，低水平的中和性抗體不僅不能控制病毒的復(fù)制，反而增強(qiáng)PRRSV在肺泡巨噬細(xì)胞中的復(fù)制（抗體依賴性增強(qiáng)作用，ADE）。

PRRSV的ADE現(xiàn)象在體外和體內(nèi)都已被證實(shí)，在培養(yǎng)物中加入一定滴度的PRRSV抗體，可使PRRSV的增殖滴度提高10～100倍；在病毒中加入一定量PRRSV抗體，再注射妊娠中期的胎兒，結(jié)果比單獨(dú)注射PRRSV的致病性顯著增強(qiáng)。

所以藍(lán)耳病的特異性體液免疫的臨床保護(hù)意義存在許多不確定的因素?？v觀歷年來(lái)PRRSV滅活疫苗臨床應(yīng)用的局限性，能給我們更多的啟示。

2.2 特異性細(xì)胞免疫

免疫PRRS弱毒疫苗后，誘導(dǎo)的特異性細(xì)胞免疫水平低。因?yàn)?，T細(xì)胞對(duì)PRRSV的初次反應(yīng)弱，PRRSV特異性的IFN-γ分泌細(xì)胞最早在接種后3周出現(xiàn)，之后10周在50～100萬(wàn)單位/每百萬(wàn)外周血單核細(xì)胞（PBMCs）范圍內(nèi)不規(guī)律地波動(dòng)（水平偏低），感染1年后T細(xì)胞反應(yīng)逐步增強(qiáng)，在接種后48周IFN-γ分泌細(xì)胞增長(zhǎng)到400～500萬(wàn)單位/每百萬(wàn) PBMCs。

一般，如偽狂犬基因缺失疫苗，接種后3周IFN-γ分泌細(xì)胞數(shù)量在200～300萬(wàn)單位/每百萬(wàn)PBMCs間波動(dòng)，這是免疫PRV基因缺失疫苗能產(chǎn)生有效的特異性細(xì)胞免疫保護(hù)的根源。而免疫PRRS弱毒疫苗IFN-γ分泌水平低，提示產(chǎn)生的特異性細(xì)胞免疫力低，沒(méi)有臨床保護(hù)意義。

2.3 巨噬細(xì)胞默許感染的改變

巨噬細(xì)胞默許感染的改變是針對(duì)PRRSV弱毒疫苗免疫假定賦予的功能，這是目前大多數(shù)PRRS弱毒疫苗的主要臨床功能。研究表明，巨噬細(xì)胞默許感染的改變是免疫調(diào)節(jié)所致，但其完整機(jī)制尚未明了，實(shí)驗(yàn)室研究和田間使用表明，這種機(jī)制對(duì)PRRS的防控作用是極其脆弱的。因?yàn)?，近幾年大量免疫過(guò)PRRS弱毒疫苗的豬群仍然可以感染其他毒株，并暴發(fā)藍(lán)耳病。

2.4 PRRS特異性免疫的現(xiàn)實(shí)啟示

綜上所述，PRRS弱毒疫苗在臨床免疫中產(chǎn)生的特異性免疫力是極其脆弱的。從多年的防控實(shí)踐中，我們發(fā)現(xiàn)許多免疫過(guò)PRRS弱毒疫苗的仔豬，繼發(fā)感染現(xiàn)象仍然十分嚴(yán)重。造成這種現(xiàn)象的根本原因是PRRS弱毒疫苗免疫保護(hù)力在仔豬早期缺席所致。眾所皆知，PRRSV破壞的主要是豬的肺泡巨噬細(xì)胞，致使豬體的非特異免疫功能受到傷害，導(dǎo)致繼發(fā)感染加重。

通常，我們于14日齡左右對(duì)仔豬免疫PRRS弱毒疫苗，免疫后難以產(chǎn)生有效的特異性免疫保護(hù)。即仔豬14日齡左右免疫PRRS弱毒疫苗后，大多數(shù)情況下只能使其獲得藍(lán)耳病弱毒的一致性感染，而相應(yīng)的特異性免疫保護(hù)極其微弱。由此我們發(fā)現(xiàn)，14日齡免疫過(guò)PRRS弱毒疫苗的仔豬，第一，仍然一直受到養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)藍(lán)耳病野毒的攻擊，非特異性免疫功能遭受?chē)?yán)重破壞；第二，隨著仔豬群非特異性免疫功能的降低，細(xì)菌性疾病隨時(shí)可以乘虛而入。 細(xì)菌性疾病多數(shù)是環(huán)境中的常在菌，以副豬嗜血桿菌為例，仔豬出生后一周齡就可以在其鼻腔內(nèi)分離到該菌，隨著日齡的增長(zhǎng)，該菌逐漸向仔豬的肺部移生，而且在很多情況下，抗生素對(duì)副豬嗜血桿菌的這種移生現(xiàn)象的封阻作用極其有限，一旦遇上非特異性免疫功能遭受?chē)?yán)重破壞的仔豬，該菌就能輕易突破肺部屏障，形成菌血癥，導(dǎo)致臨床常見(jiàn)的多發(fā)性漿膜炎。

所以，PRRS弱毒疫苗特異性免疫力低下是許多豬場(chǎng)免疫PRRS弱毒疫苗無(wú)效甚至有害（免疫毒力偏強(qiáng)疫苗，雪上加霜，產(chǎn)生免疫抑制）的癥結(jié)所在。而“特異性免疫力低下”是目前大多數(shù)藍(lán)耳病弱毒疫苗共同存在的硬傷。

3 佐劑改良PRRSV弱毒疫苗的探索

3.1 實(shí)驗(yàn)概況

3.1.1 材料

“藍(lán)定抗”抗原 （CH1-R株藍(lán)耳病弱毒疫苗）：產(chǎn)品批2011002 106.0TCID50/頭。“藍(lán)定抗”專(zhuān)用佐劑（稀釋液）：批號(hào)2011002。PRRSV強(qiáng)毒 （TJ株）：5代，4～8周齡藍(lán)耳病抗原抗體陰性豬，肌注105.0TCID50/頭，觀察21天應(yīng)5/5發(fā)病，致少 3/5 死亡（45，5/5，4/5）。

3.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

15頭同窩仔豬,無(wú)任何疫苗免疫，實(shí)驗(yàn)前篩選：CSFV抗原、抗體，PRRSV抗原、抗體，PRV gE抗體，PCV-2抗體、抗原皆為陰性，飼養(yǎng)于無(wú)菌室內(nèi)。

3.1.3 實(shí)驗(yàn)方法

將實(shí)驗(yàn)豬（34日齡）隨機(jī)分成3組，每組5頭豬。A組：肌注藍(lán)定抗抗原1頭份＋專(zhuān)用佐劑2毫升。B組：肌注藍(lán)定抗抗原1頭份＋常規(guī)稀釋液2毫升。C組：注射等量生理鹽水。免疫后1、3、5、7、14、21、28 天采血分析細(xì)胞免疫指標(biāo)。 免疫后28天攻毒TJ株（3倍標(biāo)準(zhǔn)劑量），并于攻毒后 1、3、5、7、14、21、28 天采血分析細(xì)胞免疫指標(biāo)。

3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.2.1 細(xì)胞因子的變化

IFN-γ檢測(cè)分析顯示：免疫3天，專(zhuān)用佐劑（稀釋液）組開(kāi)始產(chǎn)生IFN-γ。說(shuō)明相對(duì)其他組，專(zhuān)用佐劑使更多的豬在早期產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫力。

IFN-γ濃度變化情況

IFN-γ檢測(cè)分析顯示：免疫3天，專(zhuān)用佐劑（稀釋液）組開(kāi)始產(chǎn)生IFN-γ。說(shuō)明相對(duì)其他組，專(zhuān)用佐劑使更多的豬在早期產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫力。

IL-18濃度變化情況

IL-18檢測(cè)分析顯示：專(zhuān)用佐劑（稀釋液）組IL-18產(chǎn)生速度快（3天），濃度高，適時(shí)消減。說(shuō)明相對(duì)其他組，專(zhuān)用稀釋液組豬群產(chǎn)生細(xì)胞免疫更快、更強(qiáng)，攻毒后，炎癥反應(yīng)更少。

3.2.2 淋巴細(xì)胞濃度的變化

淋巴細(xì)胞濃度分析表明：相對(duì)其他組，專(zhuān)用佐劑（稀釋液）組豬群非特異性免疫（NK）和細(xì)胞免疫（T、Th、Ts、Tc）沒(méi)有抑制；攻毒后，相對(duì)其他組，專(zhuān)用佐劑（稀釋液）組非特異性免疫（NK）和細(xì)胞免疫（T、Th、Ts、Tc）穩(wěn)步回升，提供堅(jiān)強(qiáng)的細(xì)胞免疫保護(hù)力。

3.2.3 藍(lán)定抗的田間表現(xiàn)

藍(lán)定抗是CH1-R株藍(lán)耳病弱毒疫苗，繼承了CH1-R株安全、交叉保護(hù)力強(qiáng)的優(yōu)秀品質(zhì)，同時(shí)配合專(zhuān)用佐劑，彌補(bǔ)了其他藍(lán)耳病弱毒疫苗特異性保護(hù)力低的弊端。2011年7月～2012年5月，在全國(guó)1000多萬(wàn)頭豬使用藍(lán)定抗的記錄顯示：①免疫副反應(yīng)極小，對(duì)種豬和仔豬都十分安全。②日常免疫，藍(lán)耳病預(yù)防效果突出，仔豬早期（14日齡左右）免疫藍(lán)定抗，可顯著減少后期副豬嗜血桿菌繼發(fā)感染的問(wèn)題。對(duì)繁殖障礙問(wèn)題，免疫可以快速得到有效解決，這與藍(lán)定抗可以快速提供堅(jiān)強(qiáng)的特異性保護(hù)息息相關(guān)。③配合抗生素使用，還能用于藍(lán)耳病以及其他病毒性疾病的緊急處理，收到預(yù)想不到的效果。