★ 丁志軍羅美蘭 廖銀根 許時(shí)貴 徐瑞 （江西省皮膚病專科醫(yī)院藥劑科 南昌 330001）

HPLC法同時(shí)測定氯地霜中氯霉素、醋酸地塞米松的含量

★ 丁志軍*羅美蘭 廖銀根 許時(shí)貴 徐瑞 （江西省皮膚病?？漆t(yī)院藥劑科 南昌 330001）

目的：建立高效液相色譜法同時(shí)測定氯地霜中氯霉素和醋酸地塞米松含量的方法。方法：Agilent C18色譜柱（150mm×4.6 mm，5μm）；流動相為甲醇（A）-水（B），梯度洗脫；流速1.0m L/m in；柱溫20℃；檢測波長240 nm。結(jié)果：氯霉素、醋酸地塞米松的線性范圍分別為0.784～7.840μg（r=0.999 8）、0.019 84～0.198 40μg（r=0.999 7）；平均加樣回收率分別為99.00%、98.91%，RSD分別為0.29%、0.89%（n=6）。結(jié)論：該方法簡便準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于氯地霜的質(zhì)量控制。

氯地霜；氯霉素；醋酸地塞米松；高效液相色譜法

氯地霜是我院制劑室自制制劑（批準(zhǔn)文號：贛藥制字H20090303），由氯霉素、醋酸地塞米松、羥苯乙酯等組成的水包油型乳膏劑，具有抗菌、消炎作用，臨床上常用于皮炎、濕疹、痤瘡等，療效良好。制劑原標(biāo)準(zhǔn)對2種主要成分的含量測定分別采用抗生素微生物檢定法、高效液相色譜法。但抗生素微生物檢定法的專屬性差，凡具有抗菌活性的物質(zhì)都會干擾測定結(jié)果，并且操作繁瑣，影響因素多，難以掌握，致使測定結(jié)果不準(zhǔn)確，為了更好地控制制劑的質(zhì)量，保證制劑療效，故筆者研究建立了梯度洗脫高效液相色譜法同時(shí)測定氯地霜中2種主要成分的含量。

1 材料

1.1 儀器 Agilent1260高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；BP-211D Sartorius電子天平（德國）；UV-2401紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）。

1.2 試藥 氯霉素對照品（供含量測定用，中國食品藥品檢定研究院，批號130555-201203）；醋酸地塞米松對照品（含量99.2%，中國食品藥品檢定研究院，批號100122-201206）；甲醇（色譜純，Merck公司）；水（重蒸餾水，江西省皮膚病專科醫(yī)院制劑室）；其余試劑均為分析純；氯地霜（每20 g含氯霉素0.2 g與醋酸地塞米松5mg，江西省皮膚病專科醫(yī)院制劑室，批號131001,131101,131201）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent C18（150mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇（A）-水（B），梯度洗脫（見表1）；流速：1.0m L/m in；柱溫：20℃；檢測波長：240 nm；進(jìn)樣量10μL。

表1 梯度洗脫條件

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取氯霉素對照品、醋酸地塞米松對照品適量，精密稱定，置量瓶中，加流動相溶解制成每1m L分別含392.00,9.92μg的對照品溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品適量（約相當(dāng)于氯霉素、醋酸地塞米松分別為20,0.5mg），精密稱定，加甲醇約20m L，置60℃水浴中加熱，攪拌使氯霉素及醋酸地塞米松溶解，轉(zhuǎn)入50m L量瓶中，同法操作2次，放冷至室溫，用甲醇稀釋定容至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻2h以上，取出，迅速濾過，續(xù)濾液放至室溫，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 取按氯地霜處方工藝方法制備的缺氯霉素、缺醋酸地塞米松的陰性樣品適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.2.4 專屬性試驗(yàn) 按上述色譜條件，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果供試品在與對照品色譜圖相應(yīng)的位置上有相同的氯霉素峰、醋酸地塞米松峰，而陰性對照無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液2.0,5.0, 10.0,15.0,20.0μL分別注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，氯霉素的回歸方程為：Y＝610.789 7X＋2.780 5（r＝0.999 8），線性范圍為0.784～7.840μg；醋酸地塞米松的回歸方程為：Y＝2262.147 8X＋1.170 7（r＝0.999 7），線性范圍為0.019 84～0.198 40μg。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 取對照品溶液，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，測得氯霉素、醋酸地塞米松平均峰面積值，RSD分別為0.50%、0.84%，表明精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液，分別在0，2，4，6，8 h進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10μL，測得氯霉素、醋酸地塞米松平均峰面積值，RSD分別為0.48%（n＝5）和1.39%（n＝5），表明氯霉素、醋酸地塞米松在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品6份，精密稱定，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，進(jìn)樣量為10μL，測得峰面積值，計(jì)算氯霉素、醋酸地塞米松含量，RSD分別為1.34%，1.69%，表明此法重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批已知含量的樣品（批號131001）6份，分別精密加入一定量的氯霉素、醋酸地塞米松對照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，進(jìn)樣量為10μL。結(jié)果見表2。

2.2.10 樣品含量測定 取本品3批，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，進(jìn)樣量為10μL，按外標(biāo)法計(jì)算氯地霜中氯霉素、醋酸地塞米松標(biāo)示量的百分含量。結(jié)果見表3。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表3 樣品含量測定結(jié)果（n=3）

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 分別取氯霉素、醋酸地塞米松對照品溶液，用紫外分光光度計(jì)在200～600 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果二者分別在277，240 nm波長處有最大吸收，但因處方中氯霉素與醋酸地塞米松的含量比為40∶1，為了兼顧二者的檢測靈敏度，經(jīng)試驗(yàn)摸索，最終選擇240 nm為檢測波長。

3.2 分析方法的確定 與抗生素微生物檢定法比較，梯度洗脫反相高效液相色譜法測定氯地霜中氯霉素和地塞米松的含量，能使制劑中的組分與輔料有效分離，輔料對測定結(jié)果無干擾，靈敏度高，操作簡單，快速，結(jié)果準(zhǔn)確，更加適合于氯地霜生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制。

［1］國家藥典委員會.中國藥典·二部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄93、附錄29.

Simultaneous Determ ination of chloramphenicol and Dexamethasone Acetate in Compount Pexamethasone Cream by HPLC

DING Zhi-jun,LUO M ei-lan,LIAO Yin-gen,XU Shi-gui,XU Rui
Departmentof Pharmacy,Dermatology Special Hospital of Jiangxi Province,Nanchang 330001,China.

Objective:To establish an HPLCmethod for the simultaneous determination of chloramphenicol and dexamethasone acetate in Compount Pexamethasone cream.Methods：The chromatographic separation was performed on a Agilent C18column with amixture of methanol-water asmobile phase at the flow rate of 1.0 mL/min，the column temperature wasmaintained at 20℃and the detection wavelength was 240 nm．Results：The calibration curves in the range of 0.784~7.840μg（r=0.999 8）for chloramphenicol and 0.019 84~0.198 40μg（r=0.999 7）for dexamethasone acetate were good linear，respectively.The average recoveries were 99.00%and 98.91%；RSD were 0.29%and 0.89%（n=6）.Conclusion:An accuratemethod can be used for the quality control of Compount Pexamethasone cream．

Compount Pexamethasone cream;chloramphenicol;dexamethasone acetate;HPLC

R927.2

B

2014-03-18）編輯：曾文雪

*第一作者：丁志軍，男，碩士，中藥師、工程師。研究方向：中藥（藥物）制劑。Tel：15070917985,E-mail：dzj7880@126.com。