★ 熊耀斌傅纓俞紅資曉飛楊慧（.江西省醫(yī)學科學研究院 南昌330006；.南昌大學第二附屬醫(yī)院 南昌330006）

草珊瑚流浸膏對肝纖維化大鼠的保護作用及其機制研究*

★ 熊耀斌1傅纓2俞紅1資曉飛2楊慧1（1.江西省醫(yī)學科學研究院 南昌330006；2.南昌大學第二附屬醫(yī)院 南昌330006）

目的:觀察和研究草珊瑚流浸膏對肝纖維化大鼠肝功能及肝纖維化指標的影響。方法：將SD大鼠隨機分為空白組、模型組、蟲草組、草珊瑚組及聯(lián)合（草珊瑚+蟲草）組，采用40%四氯化碳（CCl4）每周2次、皮下注射6周制作的大鼠肝纖維化模型，各治療組經灌胃給藥6周后，在麻醉狀態(tài)下采血，檢測血清肝功能和肝纖維化指標及金屬蛋白酶組織抑制因子-1（TIMP-1），以發(fā)酵蟲草菌粉作為陽性對照。結果：與模型組比較，蟲草及草珊瑚組肝纖維化程度明顯減輕，谷丙轉氨酶（ALT）和谷草轉氨酶（AST）降低、白蛋白（ALB）升高極為明顯（P<0.01）；同時非常顯著降低肝纖維化指標及TIMP-1（P<0.01）。結論：提示草珊瑚流浸膏對肝纖維化大鼠肝損傷及肝纖維化具有一定的保護作用。

草珊瑚；肝纖維化；大鼠

現(xiàn)代藥理學研究表明，草珊瑚（Sarcandra glabra）具有抗菌消炎、抗腫瘤、調節(jié)機體免疫等多種生物活性[1-2]，目前臨床上主要用于治療腫瘤、胃潰瘍、細菌性痢疾及各種口腔疾病[3-5]。本實驗通過四氯化碳大鼠模型觀察草珊瑚流浸膏抗肝纖維化的作用及其機制，為其臨床應用提供實驗依據和參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SD大鼠S P F級，體重（175±25g），雄性，分籠飼養(yǎng)，自由攝食和水。上海西普爾-必凱實驗動物有限公司購買，質量合格許可證號SI X K（滬）2008-0016。

1.2 實驗藥物及試劑 發(fā)酵蟲草菌粉（金水寶膠囊）由江西濟民可信金水寶制藥有限公司生產（110616）；草珊瑚流浸膏（相對密度1.24g/m L）由江西江中制藥有限公司提供；四氯化碳（CC l4）、分析純（A R），購自天津市恒興化學試劑制造有限公司，批號20080908，用純橄欖油配成40%（V/V）的應用液，純橄欖油購自上海嘉里食品工業(yè)有限公司，批號20080707。

2 實驗動物分組與用藥

50只SD大鼠按體重隨機分成5組，每組10只，自由進食和水。先普通飼養(yǎng)5天，第1周除正常組10只大鼠外，其余大鼠參照文獻并有所改進，均用四氯化碳開始造模[6]，每只大鼠每次皮下注射40%四氯化碳橄欖油0.3m L/100g體重，每周2次，連續(xù)10周；第11、12周，每周給藥1次。正常組大鼠給予等劑量純橄欖油。從第7周開始，正常及模型組同等條件下喂養(yǎng)，不給藥，每天每只大鼠灌服1m L/100g體重蒸餾水；蟲草對照組：以發(fā)酵蟲草菌粉按172mg/100g體重灌胃；草珊瑚組：草珊瑚流浸膏按856mg/100g體重灌胃；聯(lián)合治療組：以發(fā)酵蟲草菌粉86mg/100g體重及草珊瑚流浸膏428mg/100g體重灌胃，每天1次，連續(xù)6周。末次灌胃24h后，在麻醉狀態(tài)下通過下腔靜脈取血，取小塊肝左葉做病理檢測。

3 觀察內容

3.1 一般情況 每周稱體重1次，以調整用藥劑量；逐日觀察大鼠活動、進食量、毛色等情況，并記錄死亡數。

3.2 肝功能指標 采用全自動生化分析儀測定血清ALT、AST、ALB水平。

3.3 HA、PC-Ⅲ、C-IV及LN采用放射免疫分析法測定，測定盒由上海海軍醫(yī)學研究所提供，嚴格按照測定盒說明書中的方法操作。

3.4 TIMP-I采用酶聯(lián)免疫分析（ELISA）方法測定，試劑盒由上海西唐生物科技有限公司提供，嚴格按照測定盒說明書中的方法操作。

3.5 檢測肝臟纖維化程度 取小塊肝臟，甲醛固定，石蠟包埋，HE染色并觀察，參照2006年修訂的肝纖維化中西醫(yī)結合診療指南評價肝組織纖維化程度[7]。

4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件，One way ANOVA方差分析，LSD多重比較，計量資料以均數±標準差表示。

5 實驗結果

5.1 各實驗組大鼠肝組織纖維化程度 正常組10只大鼠均成活。肝組織病理檢測，肝細胞未見變性與壞死,肝內未見纖維組織增生,匯管區(qū)不擴大,小葉結構清晰,肝組織正常。40只大鼠造模過程中死亡10只，其中2只為操作失誤，成活率為75%。死亡大鼠常見精神及活動度差，進食少，毛發(fā)稀疏，解剖發(fā)現(xiàn)多有肝腫大伴腹水；模型組可見大片肝細胞壞死和炎性浸潤,部分為脂肪變性,匯管區(qū)纖維組織增生,被分隔的肝細胞團呈不同程度的再生及假小葉形成；蟲草和草珊瑚組則以匯管區(qū)周圍纖維化，纖維間隔形成伴小葉結構改變?yōu)橹鳌?/p>

5.2 各實驗組大鼠血清ALT、AST及ALB的含量變化與空白組相比，模型組ALT、AST及ALB都有明顯的改變（P<0.01）；與模型組相比，治療組降低ALT、AST和升高ALB作用較為明顯（P<0.01或0.05），但草珊瑚與蟲草組之間沒有統(tǒng)計學差異（P>0.05）；聯(lián)合組顯著升高A L B水平，且與蟲草組相比有顯著差異（P< 0.05），結果見表1。

表1 各實驗組大鼠肝功能的變化（±s）

表1 各實驗組大鼠肝功能的變化（±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與蟲草組比較，□P＜0.05（下同）。

組別 ALB /mg·mL-1n ALT /U·L-1AST /U·L-1空白組 36.9±1.8 10 57±7.6 220.5±36.6模型組 8 134.6±36.2**314.1±41.8**29.9±1.9**蟲草組 8 110.6±21.3**△256.6±22.3△△33±2.1**△△草珊瑚組 8 93.6±13.1**△△228.5±48.5△△33.9±1.5**△△聯(lián)合組 35.3±1.6△△□6 97.2±9.5**△△229.5±38.6△△

5.3 各實驗組大鼠血清肝纖維化四項指標含量的變化 與空白組相比，模型組肝纖維化指標HA、PC-Ⅲ、C-Ⅳ和LN非常明顯升高（P<0.01）；與模型組比較，蟲草、草珊瑚及聯(lián)合組肝纖維化四項指標都非常顯著的降低（P<0.01），但各治療組之間的作用無明顯差異（P>0.05），結果見表2。

5.4 各實驗組大鼠血清TIMP-1含量的變化 與空白組相比，模型組TIMP-1含量有明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，各治療組都有非常明顯的降低（P＜0.01），但聯(lián)合組TIMP-1含量與蟲草及草珊瑚組比較均有顯著性差異（P＜0.05），結果見表3。

表2 各實驗組大鼠血清肝纖維化指標含量的變化（±s） ng·mL-1

表2 各實驗組大鼠血清肝纖維化指標含量的變化（±s） ng·mL-1

組別LN n HA PC-Ⅲ空白組137.6±25.9**蟲草組 8 129.3±28.5△△69.8±18.7△△草珊瑚組 8 144.9±30.1△△75±17.7△△10 128.3±18.5模型組 8 322.9±62.8**22.6±1.8 32.5±2.7**25.5±3.7*△△27.2±1.6**△△69.7±11.8聯(lián)合組 78.1±21.1△△6 140.4±18.2△△26±2.7*△△C-IV 52.6±9.3 81.8±8.5**56.7±7.4△△62±10.7△△56.4±14.3△△

表3 各實驗組大鼠血清TIMP-1含量的變化（±s） ng·mL-1

表3 各實驗組大鼠血清TIMP-1含量的變化（±s） ng·mL-1

注：與草珊瑚組比較，◇P＜0.05。

組別 n TIMP-1空白組 10 25.7±4.5模型組 8 38.9±4.2**蟲草組 8 25±4.7△△草珊瑚組 8 24.6±5.3△△聯(lián)合組 6 30.8±5.9*△△□◇

6 討論

肝纖維化的逆轉是當今醫(yī)學的難題及世界范圍內一個主要的健康問題。許多研究都不同程度地證實蟲草菌絲抗肝纖維化的有效性[8-9]，其機制與減少肝內膠原的沉積，抑制I、III型前膠原基因的表達，促進膠原降解有關[10-11]。

草珊瑚又名腫節(jié)風，入藥歷史悠久，其化學成分復雜，生物活性多樣，毒性小，具有清熱涼血、活血消斑、祛風通絡等功效，其提取物具有較好的安全性[2，12]。與模型組相比，本實驗發(fā)現(xiàn)，蟲草對照及草珊瑚組降低大鼠血清ALT、AST和升高ALB作用較為明顯（P<0.01或0.05），且后者的作用似乎更強，但兩者之間沒有明顯差異（P>0.05），表明發(fā)酵蟲草菌粉及草珊瑚流浸膏均具有保肝降酶的作用；聯(lián)合治療組卻能明顯升高ALB水平且與蟲草組有顯著性差異（P <0.05），而血清ALB含量的升高與促進早期肝細胞的再生有關[13]，提示兩者配伍在這方面的作用可能會加強。已知血清纖維化指標對肝纖維化的發(fā)生發(fā)展密切相關[14]，抑制肝細胞外基質生成與沉積，促進其降解是抗肝纖維化治療的關鍵所在。本實驗結果顯示：各治療組大鼠血清HA、PC-Ⅲ、C-Ⅳ和LN與模型組比較有非常顯著的降低（P<0.01），但各治療組之間無明顯差異（P>0.05），提示蟲草、草珊瑚及聯(lián)合組均具有一定的抗肝纖維化的作用。與模型組比較，各治療組TIMP-1含量都有非常明顯的降低（P< 0.01），表明其抗肝纖維化作用與降低TIMP-1的表達有關。因為TIMP-1表達降低，膠原酶活性增強，有助于肝纖維化的降解[15]；但聯(lián)合組TIMP-1含量與蟲草及草珊瑚組比較均有顯著性差異（P<0.05），提示中藥配伍的效果不是簡單地疊加。當然，聯(lián)合組數量不多亦有可能受到影響，由此可見草珊瑚流浸膏具有一定的抗肝纖維化作用，且與降低TIMP-1的表達有關。

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Effects of Liquid Extract of Sarcandra G labra to Anti-hepatic Fibrosis in Rats

XIONG Yao-bin1,FU Ying2,YU Hong1,ZIXiao-fei2,YANG Hui1
1.Jiangxi Academy ofMedical Sciences,Nanchang 330006,China;
2.The Second Affiliated Hospital of Nanchang University,Nanchang 330006,China.

Objective:To study the effects of sarcandra glabra liquid extract（SG）on hepatic fibrosis rats in liver function and fibrosis index.Methods：Fifty male Sprague Dawley（SD）rats were divided into blank group（BG）,model group（MG）,fermented cordyceps sinensis powder（CS）,SG and joint groups（JG）randomly.Except the rats in the BG，others were induced to hepatic fibrosis by the subcutaneous injection of 40%carbon tetrachloride（CCl4）twice a week for 6 weeks．Then，those rats in treating groupswere administered with CSand SG via stomach-tube-pouting for 6 weeks．At the end of experiments，all ratswere drew blood under anesthesia,the serum indexes of hepatic function and fibrosis andmetalloproteinase tissue inhibiting factor-1（TIMP-1）weremeasured,CSas positive control.Results：Compared with MG,CS,SG and JG groups significantly reduced hepatic fibrosis degree and alanine aminotransferase（ALT）and aspertate aminotransferase（AST）,the albumin（ALB）were significantly increased（P<0.01）,at the same time hepatic fibrosis indexes and TIMP-1 reduced significantly（P<0.01）.Conclusion：The results demonstrated that SG had certain protected effects on ratswith hepatic injure and fibrosis.

sarcandra glabra；hepatic fibrosis；rat

R285.5

A

2014-06-09）編輯：萬崇毅

江西省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研計劃項目（2011A150）；南昌市科技局社會發(fā)展支撐計劃項目。

**第一作者：熊耀斌，碩士，研究員。研究方向：中西醫(yī)結合肝病、腫瘤。E-mail:xiongybt@163.com。