王玲，呂永艷，程志偉，杜高唐，李金林，付石軍，孫國強*

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東 青島 266109；2.山東濱州市濱城區(qū)畜牧獸醫(yī)局，山東 濱州256620；3.山東濱州市畜牧獸醫(yī)局，山東 濱州256618；4.山東濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州256618)

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復(fù)合酵母培養(yǎng)物對奶牛產(chǎn)奶性能、氮排放及血液生化指標(biāo)的影響

王玲1，呂永艷1，程志偉2，杜高唐3，李金林4，付石軍4，孫國強1*

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東 青島 266109；2.山東濱州市濱城區(qū)畜牧獸醫(yī)局，山東 濱州256620；3.山東濱州市畜牧獸醫(yī)局，山東 濱州256618；4.山東濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州256618)

為研究飼料中添加復(fù)合酵母培養(yǎng)物對奶牛產(chǎn)奶性能、氮排放及血液生化指標(biāo)的影響，選取年齡、體重、產(chǎn)奶量及泌乳期相近(135±15) d的荷斯坦奶牛24頭，隨機(jī)分為4組，每個處理6個重復(fù)，對照組和3個試驗組的復(fù)合酵母培養(yǎng)物添加量分別為精料濃度的0，0.8%，1.0%，1.2%，隨精料飼喂，測定產(chǎn)奶量、乳成分、氮排放及血液生化指標(biāo)，結(jié)果表明，1)試驗2組日均產(chǎn)奶量顯著高于對照組(P<0.05)，各試驗組分別比對照組提高8.48%，10.05%，8.97%。2)復(fù)合酵母培養(yǎng)物能顯著提高乳脂和乳蛋白率(P<0.05)，顯著降低牛奶體細(xì)胞數(shù)(P<0.05)，以試驗2組最低。3)在氮排放量上，試驗2組顯著低于對照組(P<0.05)，各試驗組比對照組分別降低8.47%，12.01%，9.36%。4)在血液生化指標(biāo)方面，復(fù)合酵母培養(yǎng)物能提高血清中總蛋白、球蛋白、血糖、胰島素水平(P<0.05)，降低尿素氮水平(P<0.05)。由此可見，本試驗條件下，綜合考慮產(chǎn)奶量、乳成分、氮排放及血液生化指標(biāo)，復(fù)合酵母培養(yǎng)物的最佳添加量為精料濃度的1.0%。

復(fù)合酵母培養(yǎng)物；產(chǎn)奶性能；氮排放；血液生化指標(biāo)

復(fù)合酵母培養(yǎng)物是經(jīng)嚴(yán)格控制條件發(fā)酵后連同培養(yǎng)基一起加工制得的產(chǎn)品，其主要由假絲酵母菌、釀酒酵母菌的代謝產(chǎn)物組成，同時還含有少量枯草芽孢桿菌、乳酸菌的代謝產(chǎn)物。那日蘇等[1]研究發(fā)現(xiàn)育肥綿羊日飼喂10 g/(只·d)酵母培養(yǎng)物日增重提高11.1%，飼喂5 h后pH比飼喂前降低0.23%，氨氮濃度降低25.10%，復(fù)合酵母培養(yǎng)物能改善瘤胃內(nèi)環(huán)境指標(biāo)。宋麗華等[2]飼喂150 g/(頭·d)酵母培養(yǎng)物后發(fā)現(xiàn)產(chǎn)奶量平均每天增加0.88 kg/頭，乳脂率提高0.23%，乳蛋白率提高0.37%，乳糖降低0.11%，體細(xì)胞數(shù)降低45.8%，乳品質(zhì)得到顯著提高。然而，龔月生等[3]對國內(nèi)外大量關(guān)于酵母培養(yǎng)物的研究進(jìn)行總結(jié)后得出酵母培養(yǎng)物對采食量的影響范圍為-4.4%～27.3%，乳產(chǎn)量為-7.3%～17.5%，乳脂率為5.77%～33.46%，由此可以看出，對采食量、產(chǎn)奶量、乳品質(zhì)的影響不盡相同，且酵母培養(yǎng)物的最佳飼喂量差異也較大。近年來，我國學(xué)者們通過調(diào)整飼糧結(jié)構(gòu)、添加瘤胃調(diào)控劑等方法在提高奶牛生產(chǎn)性能和免疫功能方面取得了一定的效果[4-7]，促進(jìn)了奶牛養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展。隨著奶牛養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，飼料的需求量日益增長，每年大豆進(jìn)口數(shù)量不斷激增，我國已經(jīng)成為世界上主要的大豆進(jìn)口國家，蛋白飼料資源緊缺和蛋白飼料利用率偏低已經(jīng)成為制約奶牛業(yè)進(jìn)一步發(fā)展的關(guān)鍵因素。通過營養(yǎng)調(diào)控手段提高蛋白飼料的利用率，不僅能節(jié)約蛋白飼料資源，同時對降低環(huán)境污染和減少奶牛飼養(yǎng)成本具有重要的意義。由于酵母培養(yǎng)物具有提高瘤胃微生物活性和提高瘤胃內(nèi)氨氮利用率的作用，目前酵母培養(yǎng)物在奶牛上的研究主要集中在提高泌乳初期奶牛的產(chǎn)奶量上，且市場上使用的酵母培養(yǎng)物多為單一酵母菌種制成，而關(guān)于兩個酵母菌種與少量枯草芽孢桿菌、乳酸菌共同制成復(fù)合酵母培養(yǎng)物的應(yīng)用效果鮮有研究，同樣，奶牛飼糧中添加復(fù)合酵母培養(yǎng)物對蛋白飼料利用率、氮排放、血液生化指標(biāo)的影響情況以及復(fù)合酵母培養(yǎng)物在泌乳中期奶牛飼糧中適宜添加水平的研究也鮮有報道。本試驗擬通過在泌乳中期奶牛飼糧中添加不同水平復(fù)合酵母培養(yǎng)物，探討復(fù)合酵母培養(yǎng)物對奶牛主要養(yǎng)分采食量、日均產(chǎn)奶量、乳成分、氮排放及血液生化指標(biāo)的影響，以期在提高奶牛產(chǎn)奶性能的同時節(jié)省蛋白質(zhì)飼料資源和降低奶牛氮排放，同時確定復(fù)合酵母培養(yǎng)物在泌乳中期奶牛飼糧中的適宜添加水平。為實現(xiàn)奶牛業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1試驗設(shè)計

本試驗采用單因素隨機(jī)區(qū)組設(shè)計，于2014年10月-2014年12月在青島某奶牛原種場進(jìn)行。選用體況良好、日均產(chǎn)奶量、胎次(2.55±1.24)、體重和泌乳期相近(135±15) d的荷斯坦奶牛24頭，隨機(jī)分為4組，每組6個重復(fù)。對照組和3個試驗組的復(fù)合酵母培養(yǎng)物添加量分別為精料濃度的0，0.8%，1.0%，1.2%，采用逐級混勻的方法將復(fù)合酵母培養(yǎng)物與精料混勻，即先與復(fù)合酵母培養(yǎng)物等重量的精料混合均勻，將此混合物再與等重量的精料混勻，依此進(jìn)行直到最后，將與復(fù)合酵母培養(yǎng)物混勻的精料分為3份，每次取其中1份與粗飼料混勻制成全混合日糧(total mixed ration,TMR)飼喂奶牛。整個試驗期為70 d，其中預(yù)試期14 d，正試期56 d。 試驗中所用復(fù)合酵母培養(yǎng)物購自深圳某公司，其主要由假絲酵母菌、釀酒酵母菌的代謝產(chǎn)物組成，同時還含有少量枯草芽孢桿菌、乳酸菌的代謝產(chǎn)物。

1.2飼養(yǎng)管理

試驗牛采用舍飼飼養(yǎng)，采用利拉伐擠奶設(shè)備日擠奶2次(3:30，15:00)，日飼喂TMR飼糧3次(4:00，11:00，16:00)，每次采食均用頸夾將其固定。奶牛采食后在運動場自由運動和飲水，常規(guī)光照、驅(qū)蟲和管理。TMR組成及其營養(yǎng)水平見表1。其中精料補充料購自濰坊某公司。

1.3樣品采集及處理

1.3.1飼料樣 預(yù)試期每隔2 d逐次稱每頭牛的TMR投料量和剩料量，正式期每隔10 d逐個稱1次每頭牛的TMR投料量和剩料量，參照張麗英[8]主編的《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)》中的四分法收集TMR料樣和剩料樣，65℃烘箱中烘干，制成風(fēng)干樣，用于后續(xù)營養(yǎng)成分分析。

1.3.2糞樣 于預(yù)試期開始當(dāng)天，正試期第28天、正試期結(jié)束時采集3次糞樣，采用全收糞法，連續(xù)3 d進(jìn)行24 h全收糞，混合每天所收集的糞樣，稱重留樣，按每100 g 糞樣加10%硫酸25 mL 進(jìn)行固氮處理后，放入冰箱-20℃冷凍保存，采樣期的最后1 d按每天收集到的糞樣比例混合3 d經(jīng)固氮處理后的糞樣，放入烘箱中65℃烘干，制成風(fēng)干樣。

表1 TMR料組成和營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the diets TMR (DM basis)

1)產(chǎn)奶凈能為計算值，其他指標(biāo)為實測值。NEL was a calculated value and others were measured values.

1.3.3奶樣 預(yù)試期開始，正試期每隔15 d采樣1次，均按早、晚產(chǎn)奶量的比例共收集65 mL乳樣，其中50 mL乳樣加入重鉻酸鉀防腐劑(0.6 mg/mL)混合均勻，4℃冷藏用于乳成分檢測。剩余15 mL經(jīng)3000 r/min離心10 min，取4 mL離心乳樣，加入等體積的三氯乙酸(TCA)(25%)，靜置5 min后于4500 r/min下離心20 min去蛋白，取1.5 mL處理好的奶樣-20℃冷凍用于乳中尿素氮指標(biāo)測定。

1.3.4尿樣 預(yù)試期開始，正試期第28天，正試期結(jié)束時采樣，采用點收尿法，采取人工接尿結(jié)合膀胱取尿的方式，即每次采樣時，將牛用頸夾固定后，把導(dǎo)尿管插到膀胱里采取膀胱取尿的方式依次采集每頭牛的尿樣，若采集過程中牛出現(xiàn)自主排尿的姿勢，有專人負(fù)責(zé)接尿，連續(xù)收集3 d，每天收集2次，每隔12 h收集1次，每天在前1 d的基礎(chǔ)上延后4 h收集，濃 H2SO4調(diào)整尿液pH為2～3，-20℃保存。

1.3.5血樣 于預(yù)試期開始當(dāng)天，正試期第28天，正試期結(jié)束當(dāng)天，晨飼前頸靜脈采血20 mL/頭，于3500 r/min離心15 min，取上層血清，-20℃冷凍保存。

1.4測定指標(biāo)與方法

1.4.1采食量 預(yù)試期每隔2 d逐次稱每頭牛的TMR投料量和剩料量，并取樣測定TMR料樣和剩料樣的DM含量，正試期每隔10 d逐個稱1次每頭牛的TMR投料量和剩料量，并取樣測定TMR料樣和剩料樣的DM含量，根據(jù)TMR投料量、剩料量及其DM含量計算每頭牛的DM采食量，每次根據(jù)上次測定的采食量調(diào)整下一階段的TMR投料量。

1.4.2產(chǎn)奶量及奶成分 產(chǎn)奶量用利拉伐魚骨式擠奶機(jī)測定，電子顯示奶量。預(yù)試期、正試期每隔5 d記錄1次奶量，每次連記2 d，以其平均值作為該階段日均產(chǎn)奶量。

乳成分采用乳成分自動分析儀(CombiFoss FT+)測定乳蛋白、乳脂率、乳糖及乳中體細(xì)胞數(shù)等指標(biāo)，采用加權(quán)平均法計算正試期乳成分含量。

1.4.3料樣及氮代謝指標(biāo) 參照張麗英[8]主編的《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)》中的方法測定飼糧中干物質(zhì)(dry matter，DM)、粗蛋白(crude protein，CP)、中性洗滌纖維(neutral detergent fiber，NDF)、酸性洗滌纖維(acid detergent fiber，ADF)、鈣(calcium，Ca)、磷(phosphorus，P)的含量及糞樣中CP含量，其中CP測定采用凱氏定氮法[8]、NDF和ADF采用Van Soest 洗滌纖維法[8]、Ca采用高錳酸鉀滴定法[8]、P采用釩鉬酸氨比色法[8]。

尿中總氮采用凱氏定氮法分析；尿素氮采用脲酶法、尿肌酐采用苦味酸比色法(試劑盒均購自南京建成生物有限公司)。參照 Valadares等[9]的方法，以尿液中尿肌酐含量計算奶牛的日排尿量。日排尿量計算公式：

Y=BW×29÷X

式中，Y為奶牛日排尿量(L)；BW為奶牛體重(kg)；X為奶牛尿液中尿肌酐含量(mg)。氮代謝計算公式：

糞氮=日排糞量×糞中CP含量×0.16 乳氮=產(chǎn)奶量×乳蛋白率×0.16
可消化氮=飼糧食入氮-糞氮
氮排放量=糞氮+尿氮
氮表觀消化率(%)=(飼糧食入氮-糞氮)/飼糧食入氮×100

1.4.4血液生化指標(biāo) 用ELISA試劑盒和科研試劑盒檢測血清中血糖、總蛋白、白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶等含量，所用試劑盒均購自南京建成生物有限公司。

1.5數(shù)據(jù)處理與分析

用Excel 2010軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的基本處理。采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，Turkey多重比較進(jìn)行組間差異顯著性檢驗，以P<0.05表示差異顯著，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1復(fù)合酵母培養(yǎng)物添加水平對奶牛主要養(yǎng)分采食量的影響

由表2可知，復(fù)合酵母培養(yǎng)物能提高135～205 d奶牛的干物質(zhì)采食量，試驗2組干物質(zhì)采食量顯著高于對照組(P<0.05)，各試驗組間差異不顯著(P>0.05)，試驗1組、3組與對照組差異不顯著(P>0.05)；粗蛋白、中性洗滌纖維的采食量有提高的趨勢(P>0.05)，對酸性洗滌纖維、鈣、磷的采食量影響較小(P>0.05)。

表2 不同水平復(fù)合酵母培養(yǎng)物對主要養(yǎng)分采食量的影響Table 2 Effects of different levels of compound yeast cultures on main nutrient intake

注：同行不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，下同。

Note:In the same row, values with different small letters mean significant differences (P<0.05), the same below.

2.2復(fù)合酵母培養(yǎng)物添加水平對奶牛日均產(chǎn)奶量和乳成分的影響

由表3可知，試驗1組、2組、3組日均產(chǎn)奶量均顯著高于對照組(P<0.05)，各試驗組間差異不顯著(P>0.05)，各試驗組日均產(chǎn)奶量分別比對照組提高8.48%，10.05%，8.97%。在乳脂率方面，試驗2組顯著高于對照組(P<0.05)，各試驗組間差異不顯著(P>0.05)，試驗1組、3組與對照組差異不顯著(P>0.05)；試驗2組乳蛋白率顯著高于對照組(P<0.05)，各試驗組間差異不顯著(P>0.05)，試驗1組、3組與對照組差異不顯著(P>0.05)；試驗2組乳體細(xì)胞數(shù)顯著低于對照組(P<0.05)，各試驗組間差異不顯著(P>0.05)，試驗1組、3組與對照組差異不顯著(P>0.05)；飼糧中添加復(fù)合酵母培養(yǎng)物對乳糖無影響(P>0.05)。

表3 不同水平復(fù)合酵母培養(yǎng)物對日均產(chǎn)奶量和乳成分的影響Table 3 Effects of different levels of compound yeast cultures on daily milk yield and milk composition

2.3復(fù)合酵母培養(yǎng)物添加水平對奶牛氮素表觀消化率和氮排放的影響

飼糧中添加復(fù)合酵母培養(yǎng)物對各組氮排放的影響見表4。試驗1組、2組、3組糞氮排放量顯著低于對照組(P<0.05)，各試驗組間差異不顯著(P>0.05)；試驗1組、2組、3組尿氮排放量顯著低于對照組(P<0.05)，各試驗組間差異不顯著(P>0.05)；各試驗組乳氮排放量均顯著高于對照組(P<0.05)，各試驗組間無顯著差異(P>0.05)；試驗2組乳尿素氮含量顯著低于對照組(P<0.05)，各試驗組間差異不顯著(P>0.05)，試驗1組、3組與對照組間也無顯著差異(P>0.05)；試驗1組、2組、3組可消化氮水平顯著高于對照組(P<0.05)，各試驗組間差異不顯著(P>0.05)；各試驗組氮的表觀消化率顯著高于對照組(P<0.05)，各試驗組間差異不顯著(P>0.05)；各試驗組總氮排放量分別比對照組降低8.47%，12.01%，9.36%，各試驗組均顯著高于對照組(P<0.05)，其中試驗2組顯著低于試驗1組(P<0.05)，試驗3組與試驗2組間差異不顯著(P>0.05)，試驗1組與試驗3組間差異不顯著(P>0.05)。

表4 不同水平復(fù)合酵母培養(yǎng)物對氮素表觀消化率和氮排放的影響Table 4 Effects of different levels of compound yeast cultures on apparent digestibility and excretion of nitrogen

2.4復(fù)合酵母培養(yǎng)物添加水平對奶牛血液生化指標(biāo)的影響

由表5可以看到，試驗2組血清中血糖含量顯著高于對照組(P<0.05)，各試驗組間差異不顯著(P>0.05)，試驗1組、3組與對照組無顯著差異(P>0.05)；試驗2組血清中總蛋白含量顯著高于對照組(P<0.05)，各試驗組間差異不顯著(P>0.05)，試驗1組、3組與對照組無顯著差異(P>0.05)；試驗2組血清中球蛋白含量顯著高于對照組(P<0.05)，各試驗組間差異不顯著(P>0.05)，試驗1組、3組與對照組無顯著差異(P>0.05)；試驗2組血清中尿素氮含量顯著低于對照組(P<0.05)，各試驗組間差異不顯著(P>0.05)，試驗1組、3組與對照組無顯著差異(P>0.05)；試驗2組血清中胰島素含量顯著高于對照組(P<0.05)，各試驗組間差異不顯著(P>0.05)，試驗1組、3組與對照組無顯著差異(P>0.05)；飼糧中加入復(fù)合酵母培養(yǎng)物對血清中白蛋白含量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、肌酐酸、生長激素含量無顯著影響(P>0.05)。

表5 不同水平復(fù)合酵母培養(yǎng)物對血液生化指標(biāo)的影響Table 5 Effects of different levels of compound yeast cultures on blood biochemical parameters

3 討論

3.1復(fù)合酵母培養(yǎng)物添加水平對奶牛主要養(yǎng)分采食量的影響

提高飼糧主要養(yǎng)分采食量對維持中后期奶牛的生產(chǎn)性能具有重要的意義，復(fù)合酵母培養(yǎng)物在制作過程中含有一定的釀酒酵母，該酵母在發(fā)酵的過程中能產(chǎn)生奶牛所喜歡的芳香氣味。在本試驗中，補飼復(fù)合酵母培養(yǎng)物后奶牛的干物質(zhì)和主要養(yǎng)分采食量都得到一定提高，當(dāng)復(fù)合酵母培養(yǎng)物添加量為精料濃度的1%時養(yǎng)分采食量最高，與Kim等[10]和劉強等[11]得出的結(jié)論一致。分析原因為與補飼復(fù)合酵母培養(yǎng)物后瘤胃內(nèi)纖維分解菌活性提高[1]有關(guān)，纖維物質(zhì)分解速度加快，奶牛的胃腸道排空速度較對照組更快，奶牛飽腹感減弱，導(dǎo)致DMI增加；另一方面，復(fù)合酵母培養(yǎng)物也能促進(jìn)有益菌群在瘤胃內(nèi)的生長繁殖，加快飼糧中養(yǎng)分的消化利用，并且還會合成B族維生素、氨基酸以及促生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)[12]，從而增加動物體對養(yǎng)分的消化吸收，也能夠使試驗組DMI增加。

3.2復(fù)合酵母培養(yǎng)物添加水平對奶牛日均產(chǎn)奶量和乳成分的影響

生產(chǎn)性能是決定奶牛養(yǎng)殖效益的主要因素，因此，采取一定的營養(yǎng)調(diào)控措施，延緩中期奶牛產(chǎn)奶量下降幅度，提高產(chǎn)奶性能仍是當(dāng)前奶牛生產(chǎn)研究的熱點。劉國娟等[13]用兩種復(fù)合酵母菌制成的復(fù)合酵母培養(yǎng)物飼喂奶牛發(fā)現(xiàn)產(chǎn)奶量得到極顯著提高，與本試驗結(jié)果一致。分析原因可能為復(fù)合酵母培養(yǎng)物自身含有的有機(jī)酸、酶類、生物活性小肽、氨基酸、未知生長因子等大量的營養(yǎng)物質(zhì)有利于奶牛對各種養(yǎng)分的消化、吸收利用[14]，養(yǎng)分采食量和利用率的提高會給泌乳活動提供充足的營養(yǎng)物質(zhì)；同時，與對照組相比復(fù)合酵母培養(yǎng)物中含有的大量有益菌群能夠抑制有害微生物的生長繁殖，促進(jìn)有益菌群的形成，通過對瘤胃微生物自身的調(diào)控，提高了進(jìn)入小腸中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度；有研究表明[15]，在泌乳牛飼糧中添加小肽可以極顯著提高奶牛的日均產(chǎn)奶量，因此，復(fù)合酵母培養(yǎng)物中的生物活性小肽和氨基酸等成分對產(chǎn)奶量的提高也起到一定的作用；瘤胃微生物蛋白(rumen microbial protein，MCP)合成量的提高能為泌乳活動提供更多的可消化氮源，瘤胃內(nèi)短鏈脂肪酸濃度的增加以及各種乳成分合成前體物質(zhì)的增加；復(fù)合酵母培養(yǎng)物中的β-葡聚糖和甘露聚糖能增強機(jī)體的免疫功能，降低乳房炎疾病的發(fā)病率，提高乳房健康程度，利于充分發(fā)揮奶牛的泌乳性能，也利于泌乳量的提高。

乳脂率、乳蛋白率及乳中體細(xì)胞數(shù)對原料奶品質(zhì)的好壞起到關(guān)鍵作用，是衡量奶品質(zhì)的重要指標(biāo)，也影響著原料奶的收購價格。Lesmeister等[16]研究發(fā)現(xiàn)酵母培養(yǎng)物可以很好地改善牛乳的乳成分；吳小燕等[17]用微生物發(fā)酵飼料飼喂奶牛發(fā)現(xiàn)，乳成分得到顯著改善，乳蛋白、乳脂肪、乳糖含量分別比對照組高出3.11%，6.71%，2.92%；王曉宏等[18]用復(fù)合酵母培養(yǎng)物飼喂奶牛得出乳體細(xì)胞數(shù)顯著降低，對乳脂、乳氮、乳糖均無顯著影響；張連忠[19]用120 g/(d·頭)的酵母培養(yǎng)物飼喂泌乳中期奶牛42 d后發(fā)現(xiàn)產(chǎn)奶量提高12.8%，乳蛋白率、乳糖率、乳非脂固形物率、乳密度分別極顯著提高8.2%，6.8%，7.9%，11.7%。復(fù)合酵母培養(yǎng)物對乳品質(zhì)的影響結(jié)果間差異較大，在本試驗中，飼糧中加入復(fù)合酵母培養(yǎng)物后，乳脂和乳蛋白得到顯著提高、對乳糖率的影響較小。王典等[20]在研究中發(fā)現(xiàn)，不同的酵母菌種對乳成分和產(chǎn)奶量有不同程度的影響；Williams等[21]指出酵母培養(yǎng)物對產(chǎn)奶量和乳成分的改善程度，隨著飼糧的精粗比增加而增加，特別是易發(fā)酵碳水化合物含量的提高改善效果更明顯；Hoyos等[22]發(fā)現(xiàn)，添加酵母培養(yǎng)物對高產(chǎn)奶牛的作用效果比低產(chǎn)奶牛更加明顯。因此，飼喂效果的差異性可能是由于飼糧組成、泌乳期、復(fù)合菌種的組成不同、飼喂時間的長短及外界環(huán)境因素的不同造成的。采食量的提高能為乳成分的合成提供更多的營養(yǎng)物質(zhì)，有利于乳成分改善；瘤胃內(nèi)氨氮的平衡和瘤胃微生物利用氨氮能力的提高能合成更多的MCP，有利于乳蛋白的提高；瘤胃內(nèi)乳酸利用菌活性的增強可以更好地維持瘤胃pH，纖維分解菌活動的增強能分解產(chǎn)生大量揮發(fā)性脂肪酸(volatile fatty acids，VFA)，而乙酸是合成乳脂的前體物質(zhì)，大量乙酸的產(chǎn)生會促進(jìn)乳脂的合成，丙酸可分解產(chǎn)生葡萄糖，用于乳糖的合成，丙酸的大量產(chǎn)生有益于乳糖的穩(wěn)定。

乳中體細(xì)胞數(shù)可以反映乳房的健康程度和乳房炎的發(fā)病率，在本試驗中，飼喂復(fù)合酵母培養(yǎng)物后乳體細(xì)胞數(shù)顯著下降，表明復(fù)合酵母培養(yǎng)物可以提高奶牛乳房健康程度。復(fù)合酵母培養(yǎng)物中含有的酵母β-葡聚糖是一種免疫促進(jìn)劑，能提高牛體的非特異性免疫、改善消化道的菌群結(jié)構(gòu)，可以作為真菌毒素的吸附劑與玉米赤霉烯酮和黃曲霉毒素結(jié)合[23]，甘露糖的主要成分是細(xì)胞壁多糖，其免疫功能較強，能吸附部分外源性毒素和病原菌[24]。兩種免疫活性多糖相互作用，能激活牛體免疫系統(tǒng)、提高牛體的免疫能力[25]，因此，飼喂復(fù)合酵母培養(yǎng)物后有利于減少乳房炎的發(fā)病率，進(jìn)而減少乳中體細(xì)胞數(shù)。

3.3復(fù)合酵母培養(yǎng)物添加水平對奶牛氮排放的影響

在本試驗中，飼糧中加入復(fù)合酵母培養(yǎng)物后，糞氮和尿氮的排泄量顯著降低，乳氮排放增加，氮總排泄減少，氮的利用率提高，減少了氮素對環(huán)境的污染。瘤胃內(nèi)氨氮的濃度和微生物蛋白(MCP)的產(chǎn)量共同反映了瘤胃微生物降解產(chǎn)生氨氮的速度和微生物利用氨氮的能力，當(dāng)氨氮濃度較低時，會減少MCP的產(chǎn)生，影響奶牛的生產(chǎn)性能；當(dāng)奶牛瘤胃微生物降解氮源釋放氨態(tài)氮的速率超過微生物利用氨態(tài)氮合成自身蛋白質(zhì)的速率時會增加瘤胃氮循環(huán)中氮素的損失，也會減少MCP產(chǎn)量，過多的氨氮最終被排放到環(huán)境中，不僅導(dǎo)致氮素利用率降低，還會帶來環(huán)境污染問題，因此氨態(tài)氮的生成和利用相對平衡是提高氮素利用率，降低氮排放的重要措施。一方面，復(fù)合酵母培養(yǎng)物促進(jìn)瘤胃微生物的生長繁殖，提高瘤胃微生物對氨態(tài)氮利用速度和能力，使更多的氨態(tài)氮轉(zhuǎn)化為MCP，減少瘤胃內(nèi)氨氮的損失；纖維利用菌活力的增強能分解纖維提供更多的能量，讓瘤胃內(nèi)能氮更加平衡，也有利于瘤胃微生物利用氨態(tài)氮合成更多的MCP；復(fù)合酵母培養(yǎng)物中豐富的營養(yǎng)活性物質(zhì)能增加瘤胃內(nèi)的有益菌群的活動，更好地維持穩(wěn)定的瘤胃pH和厭氧環(huán)境，利于提高飼糧中粗蛋白的表觀消化率，減少氮損失；MCP合成的提高，有利于產(chǎn)奶性能的提高和乳脂率的增加，進(jìn)而使更多的飼料蛋白被轉(zhuǎn)化利用到動物產(chǎn)品中，也有利于減少氮的排泄量；由于該復(fù)合酵母培養(yǎng)物產(chǎn)品是由多種酵母菌發(fā)酵制成，其中假絲酵母等的蛋白質(zhì)含量較高，而釀酒酵母等發(fā)酵能夠產(chǎn)生芬芳的醇香，釀酒酵母等能夠利用硫酸銨為氮源，而假絲酵母等能以尿素和硝酸鹽為氮源，同單一菌種發(fā)酵的復(fù)合酵母培養(yǎng)物產(chǎn)品相比，該復(fù)合酵母利用的底物更為廣泛，產(chǎn)生代謝產(chǎn)物更為豐富，從而能更好地平衡氨態(tài)氮的生成和利用速度，降低氮排放量。因此MCP產(chǎn)量的提高、瘤胃微生物生長繁殖的加快等，都有利于提高飼糧中粗蛋白的消化率、吸收率和利用率，減少氮排放量，從而減少氮素對環(huán)境帶來的污染。

3.4復(fù)合酵母培養(yǎng)物添加水平對奶牛血液生化指標(biāo)的影響

血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐酸(CRE)共同反映了機(jī)體對蛋白質(zhì)的吸收、合成、分解情況[26]。血清ALB作為營養(yǎng)物質(zhì)的載體還具有維持血漿滲透壓的作用，奶牛的ALB正常范圍在29.0～36.6 g/L[27]，若其濃度長期較低則意味著蛋白質(zhì)缺乏；血清球蛋白(GLOB)是一種免疫活性蛋白，能反映動物機(jī)體免疫機(jī)能；機(jī)體攝入的過量而未被利用的蛋白則最終代謝為BUN由腎臟排出體外；CRE反映了肝臟中氮素循環(huán)情況，還反映著機(jī)體蛋白分解的情況。在本試驗中，添加復(fù)合酵母培養(yǎng)物后各試驗組ALB無顯著差異，且都在正常范圍內(nèi)，GLOB明顯升高，BUN濃度降低，CRE濃度無顯著差異，但較對照組有所降低，說明試驗牛蛋白營養(yǎng)水平良好，消化利用情況較好，瘤胃內(nèi)氨氮損失降低，奶牛動用自身的機(jī)體蛋白減少，氮沉積有所增加，有利于體況的恢復(fù)。這可能與復(fù)合酵母培養(yǎng)物能提高瘤胃微生物，利用氨氮合成微生物蛋白的速度和能力有關(guān)，飼料中含氮物質(zhì)在瘤胃內(nèi)降解、氨的釋放速度與瘤胃微生物利用氨氮合成菌體蛋白的速度相對一致，瘤胃內(nèi)氨氮相對穩(wěn)定，從而減少了氨氮的損失，蛋白飼料利用率相對提高。奶牛血糖(GLU)的正常濃度水平為(3.10±0.47) mmol/L[28]，其主要來源是體內(nèi)生糖物質(zhì)的轉(zhuǎn)化，瘤胃微生物分解碳水化合物產(chǎn)生的丙酸是奶牛GLU的最大來源，其濃度主要受胰島素(INS)調(diào)節(jié)。本試驗中試驗組血糖水平明顯升高，但都在正常范圍內(nèi)，血清INS水平明顯升高。GLU水平的升高表明奶牛日糧中能量供應(yīng)較為充足，而INS的升高說明機(jī)體能量代謝加快，GLU是乳糖的唯一前提物質(zhì)，因此GLU和INS濃度的升高有利于提高奶牛的產(chǎn)奶量。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)是廣泛存在于動物細(xì)胞中的重要氨基轉(zhuǎn)移酶，其濃度過高或過低都可以反映肝臟和心臟有損傷[29]。在本試驗中ALT濃度無明顯變化，表明復(fù)合酵母培養(yǎng)物不會損傷肝臟和心臟，且ALT有升高的趨勢，表明復(fù)合酵母培養(yǎng)物能促進(jìn)氨基酸代謝和蛋白質(zhì)、脂肪及糖的轉(zhuǎn)化。

4 結(jié)論

綜合考慮奶牛產(chǎn)奶量、乳成分、氮排放及血液生化指標(biāo)，在本試驗條件下，復(fù)合酵母培養(yǎng)物的最佳添加量為精料濃度的1%。

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Milk production，nitrogen excretion and blood biochemical parameter responses to dietary addition of compound yeast cultures in dairy cows

WANG Ling1, LV Yong-Yan1, CHENG Zhi-Wei2, DU Gao-Tang3, LI Jin-Lin4, FU Shi-Jun4, SUN Guo-Qiang1*

1.CollegeofAnimalScienceandTechnology,QingdaoAgriculturalUniversity,Qingdao266109,China; 2.AnimalHusbandryandVeterinaryBureauofBinzhouCityinShandongBinzhou,Binzhou256620,China; 3.AnimalHusbandryandVeterinaryBureauofShandongBinzhou,Binzhou256618,China; 4.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicineofShandongBinzhou,Binzhou256618,China

This experiment was conducted to determine the effects of compound yeast cultures on the milk production, nitrogen excretion and blood biochemical parameters of dairy cows.A total of 24 Holstein lactating cows with similar parity, weight, milk yield and lactation stage (135±15 day in milk) were equally assigned to four groups, including one control group and 3 treatment groups, with dietary supplementation of compound yeast cultures at concentrations of 0, 0.8%, 1.0% and 1.2%, respectively.Milk yield, milk composition, nitrogen excretion and blood biochemical parameters of each cow were recorded.The results showed:1) The cows in the respective treatment groups had 8.48%, 10.05%, 8.97% higher daily milk yield than cows in the control group (P<0.05).2) Compound yeast cultures significantly increased milk fat and protein concentration (P<0.05), and reduced somatic cell counts (P<0.05), with treatment group 2 again the greatest response.3) The supply of compound yeast cultures in dairy cow feed concentrate reduced nitrogen excretion by 8.47%, 12.01%, 9.36% compared to the control group (P<0.05).4) Dietary supplementation with compound yeast cultures significantly increased the levels of glucose (GLU), total protein (TP), globulin (GLOB), and insulin (INS) (P<0.05) in the serum, and reduced blood urea nitrogen (BUN) (P<0.05).Based on the data for milk yield, milk composition, nitrogen excretion and blood biochemical parameters, the optimal concentration of compound yeast cultures administered as a supplement for dairy cow diets is 1.0%.

compound yeast cultures; milk production and quality; nitrogen excretion; blood biochemical parameters

10.11686/cyxb2015124

http://cyxb.lzu.edu.cn

2015-03-10；改回日期：2015-06-29

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系牛產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(SDAIT-12-011-08)資助。

王玲(1990-)，女，山東淄博人，在讀碩士。E-mail:xiaguang_66@163.com

*通信作者Corresponding author.E-mail:qdnydxsgq@126.com

王玲, 呂永艷, 程志偉, 杜高唐, 李金林, 付石軍, 孫國強.復(fù)合酵母培養(yǎng)物對奶牛產(chǎn)奶性能、氮排放及血液生化指標(biāo)的影響.草業(yè)學(xué)報, 2015, 24(12):121-130.

WANG Ling, LV Yong-Yan, CHENG Zhi-Wei, DU Gao-Tang, LI Jin-Lin, FU Shi-Jun, SUN Guo-Qiang.Milk production，nitrogen excretion and blood biochemical parameter responses to dietary addition of compound yeast cultures in dairy cows.Acta Prataculturae Sinica, 2015, 24(12):121-130.