劉光斌，毛和平，謝六生，任 遠(yuǎn)

1酒鋼醫(yī)院，甘肅 嘉峪關(guān) 735100；2甘肅中醫(yī)學(xué)院

金鎖二仙口服液的提取純化工藝優(yōu)選

劉光斌1，毛和平1，謝六生1，任 遠(yuǎn)2

1酒鋼醫(yī)院，甘肅 嘉峪關(guān) 735100；2甘肅中醫(yī)學(xué)院

目的：優(yōu)選金鎖二仙口服液的提取純化工藝。方法:采用均勻設(shè)計(jì)法，以PEG400濃度、提取時(shí)間、溶劑用量、提取次數(shù)為主要考察因素，以總黃酮提取量為考察指標(biāo)優(yōu)化提取工藝；采用正交實(shí)驗(yàn)法，以提取液濃縮程度、澄清劑用量、澄清溫度為主要考察因素，以總黃酮損失率為指標(biāo)優(yōu)選澄清工藝。結(jié)果:最佳提取工藝為采用PEG400濃度為2.8%的水溶液提取，每次7倍量，提取60分鐘，提取2次；優(yōu)選純化工藝為提取液濃縮至藥材質(zhì)量的5倍，在60℃溫度下用0.12‰ZTC1+1天然澄清劑澄清。結(jié)論:該提取純化工藝合理、可行,適合工業(yè)生產(chǎn)的需要。

金鎖二仙口服液；總黃酮；提取工藝；純化工藝；均勻設(shè)計(jì)；正交實(shí)驗(yàn)

金鎖二仙口服液是根據(jù)酒鋼醫(yī)院經(jīng)驗(yàn)方［1-3］自行研制的中藥制劑。由金櫻子、鎖陽、淫羊藿、仙茅等藥組成，具有補(bǔ)腎固精之功效。臨床用于治療早泄、陽痿、性欲低下、射精無力、腰膝酸軟或酸痛、疲乏困倦等。為保證該制劑質(zhì)量和臨床療效的穩(wěn)定性，本研究采用均勻設(shè)計(jì)優(yōu)選藥材的提取工藝，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化澄清(純化)工藝，從而綜合選擇金鎖二仙口服液的生產(chǎn)工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 756紫外可見分光光度計(jì)(上海奧譜勒儀器有限公司)；A U W120D型電子分析天平(日本島津，十萬分之一)；超純水儀(杭州天創(chuàng)凈水設(shè)備有限公司)。

1.2 試藥 蘆丁對(duì)照品(批號(hào)：100080-200707，供U V法含量測(cè)定用，含量為92.5%)購自中國藥品生物制品檢定所；水為超純水；其他試劑均為分析純。藥材均購自甘肅省酒泉市培豐中藥材生態(tài)種植加工公司，經(jīng)嘉峪關(guān)藥品檢驗(yàn)所中藥室鑒定符合2010版中國藥典藥材項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取工藝研究

2.1.1 總黃酮的含量測(cè)定

2.1.1.1 測(cè)定波長的選擇 用蘆丁對(duì)照品溶液0.104m g/m L，隨行試劑為空白，在200～700 n m波長范圍掃描。結(jié)果供試品溶液與對(duì)照品溶液均在359 n m波長處有最大吸收，與相關(guān)文獻(xiàn)［4］報(bào)道的360 n m相近，故確定測(cè)定波長為359 n m。

2.1.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取蘆丁對(duì)照品約10.0m g，精密稱定，乙醇溶解定容于100m L容量瓶中，搖勻；精密量取0、1、2、4、6、8、10m L分別置于10m L容量瓶中，乙醇定容，搖勻；以第一個(gè)樣品為空白，于359 n m處測(cè)定各對(duì)照液吸光度。以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)回歸分析，得回歸方程：A=12.953C+0.0058，R2=0.9997(n=6)，線性范圍為10.4～104.0μg/m L。

2.1.1.3 精密度實(shí)驗(yàn) 取最低濃度標(biāo)準(zhǔn)液依法測(cè)定其吸收度(n=5)，RS D為0.81%。

2.1.1.4 供試品的制備 取5.0 g聚酰胺裝柱(長30 c m，內(nèi)徑1.8 c m)，精密稱取供試品0.2 g，干法上柱，用5m L純化水潤濕聚酰胺柱上部，3小時(shí)后再加純化水5m L，使柱底部聚酰胺完全潤濕，過夜；先用純化水洗至洗脫液無色，再用50m L乙醇以1m L/m in速度洗脫，洗脫液收至50m L容量瓶中，乙醇定容，備用。

2.1.1.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 依法對(duì)同一樣品6次獨(dú)立測(cè)定吸收度，RS D為1.68%。

2.1.1.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知含量樣品0.2 g，6份，精密加入蘆丁對(duì)照品適量(已知含量的80%、100%、120%)，按照供試品溶液制備方法制備樣品溶液，測(cè)定，平均回收率為100.32%，RS D=1.34%。

2.1.1.7 樣品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取樣品溶液，分別在 0、1、2、3、4小時(shí)測(cè)定吸收度，4小時(shí)內(nèi)RS D=1.61%。

2.1.1.8 樣品含量測(cè)定 分別取樣品按“2.1.1.4”項(xiàng)制備樣品溶液，測(cè)定吸光度，計(jì)算樣品總黃酮含量。

2.1.2 提取工藝優(yōu)選

2.1.2.1 藥材吸水率測(cè)定 測(cè)定藥材吸水率，以確定提取用水的最低水平值。按處方比例稱取藥材200 g，加水8倍浸泡，每隔30分鐘觀察一次浸透情況，直至藥材浸至透心，濾出未被吸收的水液，稱量濕藥材，按吸水率公式吸水率(%)=［(浸泡后藥材總量-浸泡前藥材總量)/浸泡前藥材總含量］×100%計(jì)算出本處方藥材吸水率為220%。

2.1.2.2 因素及水平選擇 以影響提取結(jié)果的P E G400濃度、提取時(shí)間、溶劑用量、提取次數(shù)等為主要參數(shù)，根據(jù)吸水率結(jié)果及藥材中成分性質(zhì)，設(shè)定因素水平見表1。

表1 因素水平

2.1.2.3 超濾工藝的優(yōu)化 采用均勻設(shè)計(jì)法［5］，用U5(54)表設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。以總黃酮提取量為因變量Y，P E G400濃度(A)、總提取時(shí)間(B)、溶劑總量(C)、提取次數(shù)(D)為自變量，采用 S P SS13.0軟件以bac k word方式進(jìn)行多元線性回歸［6-7］，得回歸方程為Y=12.289+5.532C+1.276A(F=345.2，P＜0.05)，由回歸方程可知，P E G400濃度、溶劑總量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著影響，總提取時(shí)間、提取次數(shù)對(duì)結(jié)果的影響無顯著性。結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果與生產(chǎn)實(shí)際，選擇最優(yōu)超濾工藝為P E G400濃度2.8%，總提取時(shí)間為120分鐘，溶劑總量為14倍，提取次數(shù)為2次，見表2。

表2 超濾工藝的優(yōu)化

2.1.2.4 工藝條件驗(yàn)證 通過重復(fù)試驗(yàn)將得到的最佳工藝條件進(jìn)行驗(yàn)證，采用上述工藝評(píng)價(jià)體系考察工藝的穩(wěn)定性。驗(yàn)證結(jié)果顯示優(yōu)化工藝條件總黃酮提取量高于其他任何一組，而且結(jié)果比較接近，提示所得工藝條件不但可行而且比較穩(wěn)定，見表3。

表3 工藝條件驗(yàn)證表

2.2 澄清(純化)工藝優(yōu)化研究

2.2.1 澄清劑配制方法［8］Z T C1+1天然澄清劑由A、B兩種組分組成。A組份配制：取A組份，加入100倍純水中溶脹24小時(shí)，制成1%溶液；B組份配制：取B組份，加入100倍1%醋酸中溶脹24小時(shí)，即得。使用時(shí)將提取液保持在一定溫度，先向其中加澄清劑B組份，每隔30分鐘攪拌一次，2小時(shí)后加入A組份，30分鐘后攪拌一次，過夜，300目濾布過濾。B組份與A組份的加入比例為2∶1。

2.2.2 因素及水平選擇 為減少澄清劑用量，應(yīng)對(duì)提取液采用減壓濃縮工藝進(jìn)行適度濃縮。以影響澄清結(jié)果的提取液濃縮程度、澄清劑用量、澄清溫度為主要參數(shù)，設(shè)定因素水平見表4。

表4 因素水平

2.2.3 澄清(純化)工藝優(yōu)化實(shí)驗(yàn) 采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)［9］表L934設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，以總黃酮損失率為工藝評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果表明在天然澄清劑總用量為0.12‰時(shí)效果最好，天然澄清劑的用量對(duì)黃酮損失率影響有顯著性；由于濃縮程度和澄清溫度對(duì)黃酮損失率影響無顯著性，為節(jié)約成本和提高效率故選濃縮程度為5∶1，澄清溫度為60℃。見表5—6。

表5 提取工藝優(yōu)選正交實(shí)驗(yàn)

表6 提取工藝方差分析

2.2.4 澄清條件驗(yàn)證 以所得澄清條件處理提取液，驗(yàn)證澄清條件可行性及穩(wěn)定性，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)1、2、3號(hào)黃酮損失率分別為3.3%、3.1%、2.9%，所得澄清條件可行且基本穩(wěn)定。

3 討論

處方中金櫻子、鎖陽、淫羊藿、仙茅、巴戟天、當(dāng)歸、甘草等藥材中的黃酮類、多糖類、苷類等成分，在水中均有一定溶解度，因此可用大量水回流提取，但部分黃酮類成分在水中溶解度較小，在濃縮時(shí)隨水的蒸發(fā)會(huì)以沉淀析出，采用藥用級(jí)聚乙二醇400為2潛溶劑，與水組成混合溶液提取，與用水醇溶液提取相比，既可保證多糖的提取，又可防止水中溶解度較小成分析出。由于黃酮及其苷類為主要有效成分，因此選用總黃酮為工藝評(píng)價(jià)指標(biāo)。

Z T C1+1天然澄清劑［10］作為一種天然高分子，其作用機(jī)制是利用電荷和大分子的架橋作用，去除溶液中的鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)、樹膠等雜質(zhì)，得到穩(wěn)定、澄清的溶液。由于本工藝所用溶劑溶解范圍極廣，為保證口服液有較好的澄明度，除去提取液中雜質(zhì)，最終采用Z T C1+1天然澄清劑對(duì)提取液進(jìn)行澄清處理。

本研究確定金鎖二仙口服液的生產(chǎn)工藝為：取處方量藥材，用P E G400濃度為2.8%的水溶液提取，每次用7倍量溶劑，提取60分鐘，共提取2次，合并提取液；將提取液濃縮至藥材質(zhì)量的5倍得濃縮液，將濃縮料液在60℃溫度下用0.12‰Z T C1+1天然澄清劑(0.08‰的B組分，0.04‰的A組分)澄清。澄清后料液放置24小時(shí)。對(duì)澄清的料液采用減壓濃縮工藝濃縮至D1.05～1.06之間(料液體積的生藥量為2∶1)，測(cè)定料液的比重；加入阿斯巴甜1.5‰、黃原膠0.8‰、苯甲酸鈉3‰配料，灌封，100℃煮沸滅菌45分鐘，貼簽，包裝，即得成品。

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Optim ization of Extraction and Purification Technology for JinSuo ErXian Oral Liquid

LIU Guangbin1,MAO Heping1,XIE Liusheng1,REN Yuan2
1 Jiugang Hospital,Jiayuguan 735100,China;2 Gansu University of Chinese Medicine

Objective:To optimize the extraction and purification technologies for JinSuo ErXian oral liquid. Methods:By uniform design,themain factors like PEG400 concentration,extracting time,solvent dosage and extracting times investigated,the totalamountof extracted flavonoidsas the inspecting index was used to optimize the extraction process;w ith the loss rate of total flavonoids as the index,the orthogonal testwas used to investigate the factors of precipitation process,such as the degree of concentrated extract,the amount of clarifying agent and the clarify temperature.Results:The optimum extraction technology was that the liquid was extracted w ith 2.8%aqueous solution the PEG400 concentration and 7 times the amountof each time for 60minutes and tw ice;the preferred purification processwas that the extracting solution was concentrated to five times the quality of the drugs and the liquid was purified w ith the 0.12‰ZTC1+1 natural clarifying agentat the temperature of60℃.Conclusion:The optimized extraction and purification technology for JinSuo ErXian oral liquid was reasonable,feasible and suitable for requirementsof industrialproduction.

JinSuo ErXian oral liquid;total flavonoids;extraction technology;purification technology; uniform design;orthogonal test

R282.4

A

1004-6852(2015)03-0037-03

2014-02-27

劉光斌(1970—)，男，主任藥師。研究方向：藥物分析、醫(yī)院制劑及臨床藥學(xué)。