張中華

甘肅省中醫(yī)院藥學(xué)部，甘肅 蘭州 730050

正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選歸芪無(wú)糖顆粒劑的水提工藝

張中華

甘肅省中醫(yī)院藥學(xué)部，甘肅 蘭州 730050

目的：優(yōu)選出歸芪無(wú)糖顆粒劑處方藥材的最佳水提取工藝。方法：以加水量、回流時(shí)間和提取次數(shù)為因素，按正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果以得膏率和芍藥苷含量為指標(biāo)，確定最佳條件。結(jié)果：最佳提取條件為8倍量的水回流1.5小時(shí)，提取3次。結(jié)論：該工藝設(shè)計(jì)合理，穩(wěn)定可行。

腦卒中；赤芍；工藝研究

結(jié)果益母草壓制飲片的溶出曲線比傳統(tǒng)飲片在較短煎煮時(shí)間方面略高，隨著煎煮時(shí)間的延長(zhǎng)兩者溶出曲線相近，不同時(shí)間點(diǎn)鹽酸益母草堿和干膏收率無(wú)明顯差異。

3 討論

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，中藥壓制飲片與未壓制飲片相比其指標(biāo)性成分和干膏率均有所提高。由于增加了飲片的密度使其在浸泡和煎煮時(shí)更易進(jìn)入水中，避免飲片漂浮，更有利于飲片浸潤(rùn)及成分溶出，達(dá)到湯劑煎煮中“藥力共出”的要求［2-3］。

壓制飲片穩(wěn)定性考察采用留樣觀察法。將已包裝的益母草壓制中藥飲片置溫度(40±2)℃，相對(duì)濕度 (75±5)%的綜合藥品穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)箱中放置6個(gè)月，分別于0、1、2、3、6月取樣，結(jié)果表明，6個(gè)月內(nèi)益母草壓制中藥飲片加速穩(wěn)定性良好

我們知道中藥材的需求日益擴(kuò)大，花類、全草類、葉類及部分質(zhì)輕或不規(guī)則飲片，因密度小、流動(dòng)性差、體積大而增加飲片生產(chǎn)、包裝、貯藏、運(yùn)輸、調(diào)劑等環(huán)節(jié)中的困難［4-5］。壓制飲片是針對(duì)這類飲片，在不改變飲片外觀形狀及內(nèi)在質(zhì)量，不添加任何輔料條件下將中藥飲片壓制成定量單體，制備工藝簡(jiǎn)便，設(shè)備簡(jiǎn)單，易操作也便于臨床飲片的調(diào)配；中藥壓制飲片已獲得國(guó)家實(shí)用新型專利，目前四川部分醫(yī)院已用于臨床，為實(shí)現(xiàn)傳統(tǒng)中藥配方的標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化生產(chǎn)做出了一定的貢獻(xiàn)。

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［5］ 謝海洲.傳統(tǒng)中藥的精制與改革之我見(jiàn)［J］.中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21(2):177.

腦卒中［1］是一組以腦部缺血及出血性損傷癥狀為主要臨床表現(xiàn)的疾病，又稱腦中風(fēng)、腦血管意外，主要分為出血性腦中風(fēng)和缺血性腦中風(fēng)兩大類，以腦梗塞最為常見(jiàn)。腦卒中是世界上最重要的致死性疾病之一，多發(fā)生于中老年人群，且病情纏綿，后遺癥多。歸芪無(wú)糖顆粒是在古方“佛手散”的基礎(chǔ)上，按辨證論治的治療原則，結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)篩選參合而成，療效確切，是腦卒中恢復(fù)期的常用藥。本研究通過(guò)查閱文獻(xiàn)，對(duì)方中的黃芪、赤芍和甘草的提取方法進(jìn)行優(yōu)化，采用水為溶劑，以得膏率和芍藥苷含量為指標(biāo)，按正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1 材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀(檢測(cè)器：Waters 2487；進(jìn)樣器：Waters 1525)；ODS C18(Aglient，5 μm，4.6 mm×250 mm)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠提供)；電子分析天平(上海天平儀器廠提供)；超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司提供)；電熱恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療器械五廠提供)。

1.2 藥材及試劑 黃芪、赤芍和甘草(購(gòu)自甘肅省中醫(yī)院中藥房)；甲醇(色譜純)；磷酸；芍藥苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)。

2 方法及結(jié)果

2.1 芍藥苷的含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件 色譜柱：ODS C18(Aglient，5μm，

4.6 mm×250 mm)；流動(dòng)相：0.1%磷酸水-甲醇(66∶34)；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10 μL；流速：1.0 mL/min。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品5.7 mg，用甲醇定容于5 mL的容量瓶中，作為對(duì)照品溶液(1.14 mg/mL)備用。

2.1.3 供試品溶液的制備 分別取提取的干膏0.3 g，加入適量甲醇，超聲5分鐘，提取2次，0.45 μm微濾膜過(guò)濾，定容于10mL容量瓶中，備用。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液(1.14 mg/mL)定容于5mL容量瓶中，濃度分別為0.45、0.4、0.32、0.205、0.164、0.131 mg/mL對(duì)照液，測(cè)其吸收度。以吸收度和對(duì)照品溶液濃度求得回歸方程為Y=1.5416X+0.0478，r=0.999 2。在0.131～0.45 mg/mL有良好線性關(guān)系。

2.1.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積，其RSD為4.24%，表明儀器精密度良好。

2.1.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密吸取1號(hào)供試品溶液10 μL，每隔1小時(shí)進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積，其RSD=3.6%，表明樣品在6小時(shí)之內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.7 樣品測(cè)定 將制備好的供試品溶液在上述色譜條件下進(jìn)樣，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算芍藥苷的含量。

2.1.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知芍藥苷含量的2號(hào)樣品干膏約0.10 g共9份，于5 mL的容量瓶中，分別加入芍藥苷對(duì)照品。按“2.1.3項(xiàng)”操作，進(jìn)樣測(cè)其吸收度，并計(jì)算平均回收率為99.1%，RSD為1.90%(n=9)。見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率

2.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)［2-7］

2.2.1 因素水平確定 采用正交試驗(yàn)法對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［2-4］，本實(shí)驗(yàn)以加水量(A)、回流時(shí)間(B)、提取次數(shù)(C)為試驗(yàn)因素，每個(gè)因素設(shè)計(jì)3個(gè)水平，應(yīng)用L9(34)正交表安排實(shí)驗(yàn)。見(jiàn)表2。

表2 提取溶劑及時(shí)間的因素水平

2.2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 為綜合考量提取工藝對(duì)兩個(gè)指標(biāo)的影響，本試驗(yàn)對(duì)測(cè)得的得膏率和芍藥苷含量?jī)蓚€(gè)指標(biāo)用權(quán)重法進(jìn)行評(píng)分，將兩個(gè)指標(biāo)中測(cè)得的最大值定為100分，其他數(shù)據(jù)與最大值的比值計(jì)算得分。將得膏率與芍藥苷含量的權(quán)重系數(shù)定為0.6和0.4。見(jiàn)表3—4。

綜合評(píng)分=得膏率×0.6/43.57+芍藥苷含量×0.4/0.76。

表3 提取溶劑及時(shí)間的正交實(shí)驗(yàn)

表4 提取溶劑及時(shí)間綜合評(píng)分的方差分析

通過(guò)表3和表4的綜合分析，3個(gè)因素對(duì)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果均沒(méi)有顯著性影響(P＞0.05)，三因素的影響大小為：A2＞A1＞A3，B2＞B3＞B1，C3＞C2＞C1。確定的最優(yōu)組合為A2B2C3，即8倍量的水回流1.5小時(shí)，提取3次。

3 討論

多指標(biāo)的正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)分析方法有綜合平衡法和綜合評(píng)分法。綜合平衡法就是對(duì)測(cè)得的各個(gè)指標(biāo)，先逐一分別按單指標(biāo)計(jì)算分析，找出其因素水平的最優(yōu)組合，再根據(jù)各項(xiàng)指標(biāo)重要性及其各項(xiàng)指標(biāo)中因素主次、水平優(yōu)劣等進(jìn)行綜合平衡，最后確定整體最優(yōu)組合。綜合評(píng)分法是將每個(gè)實(shí)驗(yàn)所得各指標(biāo)實(shí)測(cè)值轉(zhuǎn)化成一個(gè)總評(píng)分，然后以此評(píng)分作為單指標(biāo)來(lái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。本實(shí)驗(yàn)采用綜合評(píng)分法優(yōu)選出最佳組合。

由主觀分析可知三因素對(duì)本實(shí)驗(yàn)的影響順序?yàn)樘崛〈螖?shù)、回流時(shí)間和加水量，由方差分析看出3個(gè)因素對(duì)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果均沒(méi)有顯著性影響(P＞0.05)，最終確定工藝為A2B2C3，即8倍量的水回流1.5小時(shí)，提取3次。

參考文獻(xiàn)

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收稿日期：2014-09-27

作者簡(jiǎn)介：張中華(1984—)，男，碩士研究生，中藥師。研究方向：中藥鑒定與炮制。

Water Extraction Technology of GuiQi Sugar-free Granules Optimized by Orthogonal Design

ZHANG Zhonghua
Pharmacy Department of Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730050,China

Objective:To optimize the best water extraction technology of the herbs in GuiQi sugar-free granules.Methods:By taking the amount of water,reflux time and extraction times and the factors,the experiments were conducted according to orthogonal design,the optimum conditions were determined through assessing the results with extract yield and peoniflorin contents.Results:The optimal extraction conditions were eight times of the amount of water,refluxing for 1.5 hours,extracting three times.Conclusion:The technology is reasonable,stable and feasible.

cerebral apoplexy;ChiShao;technical study

R284.2

A

1004-6852(2015)10-0056-03

2014-12-14

四川省科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)2011SZ0311)。

楊紅梅(1989—)，女，在讀碩士研究生。研究方向：中藥炮制與制劑。

△通訊作者：宋英(1959—)，男，碩士研究生導(dǎo)師，主任藥師。研究方向：中藥炮制與制劑。