李 娟，李曉東，封士蘭，胡芳弟

1甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000；

2中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所；3蘭州大學(xué)藥學(xué)院

參橘止咳滴丸止咳祛痰作用的藥效學(xué)研究*

李 娟1，李曉東2，封士蘭3，胡芳弟3

1甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000；

2中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所；3蘭州大學(xué)藥學(xué)院

目的：研究參橘止咳滴丸的止咳祛痰作用。方法：采用小鼠氨水引咳、豚鼠枸櫞酸引咳和電刺激豚鼠喉上神經(jīng)引咳、小鼠氣管段酚紅排出法和大鼠氣管毛細(xì)玻管排痰法等實(shí)驗(yàn)方法評價(jià)參橘止咳滴丸的止咳祛痰作用。結(jié)果：與正常對照組比較，參橘止咳滴丸各劑量組在延長實(shí)驗(yàn)動物的咳嗽潛伏期，減少其咳嗽次數(shù)，縮短豚鼠電刺激呼吸恢復(fù)時(shí)間，增加酚紅排出量和排痰量等方面，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與陽性對照（急支糖漿）組比較，參橘止咳滴丸中、大劑量組在延長實(shí)驗(yàn)動物的潛伏期，減少其咳嗽次數(shù)，縮短豚鼠電刺激呼吸恢復(fù)時(shí)間，增加酚紅排出量和排痰量等方面，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論：參橘止咳滴丸具有明顯的止咳祛痰作用，且其中、大劑量組療效優(yōu)于急支糖漿組。

參橘止咳滴丸；止咳作用；祛痰作用

參橘止咳滴丸是以甘肅省名中醫(yī)徐鴻達(dá)主任醫(yī)師的臨床經(jīng)驗(yàn)方為基礎(chǔ)，應(yīng)用現(xiàn)代制劑技術(shù)提取研制的中藥制劑，具有處方和生產(chǎn)工藝簡單、劑型溶出速度快、生物利用度高的特點(diǎn)。該方以玄參和陳皮為主藥，具有清熱解毒，止咳利咽之功效，臨床應(yīng)用多年，治療外感咳嗽和慢性支氣管炎急性發(fā)作引起的咳嗽療效確切［1］。為了進(jìn)一步確定其臨床療效，本研究就參橘止咳滴丸的止咳祛痰作用進(jìn)行了藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物 參橘止咳滴丸由甘肅隴神戎發(fā)制藥有限公司生產(chǎn)，批號：20060109；急支糖漿由太極集團(tuán)涪陵制藥廠生產(chǎn)，批號：88050978。

1.2 動物 昆明種小鼠(20±2)g，Wistar大鼠(200±20)g，由蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物實(shí)驗(yàn)合格證：SYXK(甘)2005-0007；豚鼠，體質(zhì)量(300±10)g，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所提供，動物實(shí)驗(yàn)合格證：SCXK（甘）2004-0005。

1.3 試劑 苯酚紅 (CP)(北京化學(xué)試劑公司生產(chǎn)，批號：020718)；二甲苯(AR)(天津市化學(xué)試劑二廠生產(chǎn)，批號：20060521)；大腸桿菌菌體蛋白；干酵母(安琪酵母股份有限公司生產(chǎn)，批號：20060405)；枸櫞酸(AR)(中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn)，批號：20060214)；濃氨水(AR)(白銀化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號：061215)；雙蒸水(蘭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科提供)；其他試劑均為分析純。

1.4 儀器 分析天平(Sartorius 1/萬)，UV-9100紫外可見分光光度計(jì)(北京瑞利分析儀器廠提供)；RM6420多道生理信號采集處理系統(tǒng)(成都儀器廠提供)；YC-Y800型亞都醫(yī)用霧化治療器(北京亞都科技股份有限公司提供)；YSD-4G生理藥理實(shí)驗(yàn)多用儀(淮北正華生物儀器有限公司提供)。

1.5 方法

1.5.1 止咳實(shí)驗(yàn)［2-3］

1.5.1.1 小鼠氨水引咳實(shí)驗(yàn) 取小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只。參橘止咳滴丸大、中、小劑量組給藥量分別為1.36 g/kg、0.68g/kg、0.34 g/kg；陽性對照組給予急支糖漿18.0 mL/kg；正常對照組給予等容積的雙蒸水。各組均灌胃給藥，1次/d，連續(xù)7天，末次給藥后1小時(shí)，將各組小鼠依次置入500 mL鐘罩中，用霧化器噴入25%氨水10 s，停留5 s，取出后立即記錄小鼠的咳嗽潛伏期(從霧化器噴入氨水開始至發(fā)出咳嗽所需要的秒數(shù))和3分鐘內(nèi)小鼠的咳嗽次數(shù)(以小鼠腹肌收縮/縮胸同時(shí)張大嘴，并有咳嗽表現(xiàn)為觀察指標(biāo))，并計(jì)算潛伏期延長率(%)和鎮(zhèn)咳百分率(%)。

潛伏期延長率=(給藥組的咳嗽潛伏期-正常組的咳嗽潛伏期)/正常組的咳嗽潛伏期

鎮(zhèn)咳百分率=(正常組的咳嗽次數(shù)-給藥組的咳嗽次數(shù))/正常組的咳嗽次數(shù)

1.5.1.2 豚鼠枸櫞酸引咳實(shí)驗(yàn) 取豚鼠54只，分別置入連有霧化器的鐘罩中，噴入17.5%枸櫞酸，噴霧1分鐘后，紀(jì)錄5分鐘內(nèi)豚鼠咳嗽次數(shù)，少于10次者棄用。篩選出40只合格豚鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組8只。參橘止咳滴丸大、中、小劑量組給藥量分別為0.83、0.42、0.21 g/kg；陽性對照組給予急支糖漿11.0 mL/kg；正常對照組給予等容積的雙蒸水。各組均灌胃給藥，1次/d，連續(xù)7天，末次給藥后1小時(shí)，將各組豚鼠依次置入1 000 mL鐘罩中，用霧化器噴入17.5%的枸櫞酸溶液5分鐘，記錄豚鼠咳嗽潛伏期(從噴霧開始到第一次咳嗽的時(shí)間為潛伏期)及在5分鐘內(nèi)咳嗽的次數(shù)(以聽到的豚鼠咳嗽聲計(jì)數(shù))，并計(jì)算潛伏期延長率(%)和鎮(zhèn)咳百分率(%)，公式同上。

1.5.1.3 電刺激引咳實(shí)驗(yàn) 取豚鼠40只，雌雄各半，分組與給藥劑量同“1.5.1.2”，灌胃給藥。將豚鼠用25%烏拉坦麻醉，待麻醉后，切開頸部皮膚，分離氣管，插入Y型氣管套管。一個支管與RM6420多道生理信號采集處理系統(tǒng)相連接的壓力換能器連接，記錄其呼吸運(yùn)動，另一個支管連接橡皮管，借助于螺旋夾調(diào)節(jié)，使生物信號采集與處理系統(tǒng)記錄的呼吸運(yùn)動維持在適當(dāng)?shù)乃?。用一白金的單極電極固定于氣管的背面；另一電極插入胸下皮下組織中，采用刺激強(qiáng)度3.5 V，脈沖寬度50 ms，頻率10次/s，刺激時(shí)間10 s，2次刺激間隔時(shí)間為5分鐘，5、10、30、45分鐘重復(fù)給予電刺激，觀察刺激后豚鼠恢復(fù)正常呼吸所需時(shí)間的變化。

1.5.2 祛痰實(shí)驗(yàn)［2-3］

1.5.2.1 小鼠酚紅法 取小白鼠50只，雌雄各半，分組與給藥劑量同“1.5.1.1”，灌胃給藥。末次給藥30分鐘后按每鼠25 mL/kg腹腔注射0.5%酚紅溶液，30分鐘后將小鼠頸椎脫臼處死，剝?nèi)夤苤車M織，剪下甲狀軟骨下端至氣管分支下端的一段氣管，放入3 mL盛有5%NaHCO3溶液的試管中，振蕩2分鐘，2 000 r/min離心5分鐘，取上清液，以5%碳酸氫鈉溶液作為空白對照，用721型紫外可見分光光度計(jì)在波長546 nm處測OD值，根據(jù)酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算酚紅含量(μg/mL)。

1.5.2.2 大鼠毛細(xì)管集痰法 取Wistar大鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只。參橘止咳滴丸大、中、小劑量組給藥量分別為0.94、0.47、0.24 g/kg；陽性對照組給予急支糖漿12.5 mL/kg；正常對照組給予等容積的雙蒸水。各組均灌胃給藥，1次/d，連續(xù)7天。實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12小時(shí)，用20%烏拉坦1.0 g/kg腹腔注射麻醉大鼠，仰臥固定，剪開頸中部皮膚，分離出氣管，在甲狀軟骨下緣正中處兩軟骨環(huán)之間用針頭扎一小孔，插入已稱重的直徑0.8 mm，長度10 cm的毛細(xì)玻璃管一根，使其剛好接觸氣管底部表面，當(dāng)毛細(xì)管被分泌物充滿后，立即再換一根同直徑的毛細(xì)管，以毛細(xì)管內(nèi)液柱長度值為評價(jià)祛痰量的指標(biāo)，先記錄給藥前2小時(shí)的痰液分泌量；再按各自劑量灌胃給藥后，記錄2小時(shí)后的痰液分泌量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以(±s)表示。組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 止咳實(shí)驗(yàn)

2.1.1 參橘止咳滴丸對小鼠的止咳作用 參橘止咳滴丸各劑量組與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，與陽性對照組比較，參橘止咳滴丸中、大劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.1.2 參橘止咳滴丸對豚鼠的止咳作用 參橘止咳滴丸各劑量組與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與陽性對照組比較，參橘止咳滴丸中、大劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

2.1.3 參橘止咳滴丸對豚鼠電刺激呼吸恢復(fù)正常所需時(shí)間的影響 參橘止咳滴丸各劑量組與正常對照組比較，小劑量組在給藥后5、10分鐘時(shí)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，在30、45分鐘時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；中劑量組在給藥5、10分鐘時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，在30、45分鐘時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；大劑量組則從5分鐘開始，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。參橘止咳滴丸大劑量組與陽性對照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表3。

表1 參橘止咳滴丸對小鼠的止咳作用

表1 參橘止咳滴丸對小鼠的止咳作用

注：與正常對照組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；與陽性對照（急支糖漿）組比較，△表示P＜0.05，△△表示P＜0.01（下同）。

組別 只數(shù) 生藥量 潛伏期/s 咳嗽/次 潛伏期延長率/% 鎮(zhèn)咳/%正常對照組 10 - 30.6±12.1 57.7±24.6 - -急支糖漿組 10 18.00 m L/kg 55.8±15.9*23.4±14.9*82.4 59.5小劑量組 10 0.34 g/kg 66.6±15.4*17.0±4.5**117.6 70.5中劑量組 10 0.68 g/kg 85.3±24.2**△△15.4±5.8**△△178.8 73.3大劑量組 10 1.36 g/kg 104.2±17.7**△△11.2±7.7**△△240.5 80.6

表2 參橘止咳滴丸對豚鼠的止咳作用

表2 參橘止咳滴丸對豚鼠的止咳作用

組別 只數(shù) 生藥量 潛伏期/s 咳嗽/次 潛伏期延長率/% 鎮(zhèn)咳/%正常對照組 10 - 34.6±10.5 26.9±6.2 - -急支糖漿組 10 11.00 m L/kg 69.6±27.3*23.1±4.9 102.0 14.1小劑量組 10 0.21 g/kg 72.8±25.3*21.9±5.5*110.4 18.6中劑量組 10 0.42 g/kg 112.8±23.3**△△15.1±3.7**△△254.9 43.9大劑量組 10 0.83 g/kg 137.8±25.3**△△13.1±3.9**△△298.3 51.3

表3 參橘止咳滴丸對豚鼠電刺激呼吸恢復(fù)正常所需時(shí)間

表3 參橘止咳滴丸對豚鼠電刺激呼吸恢復(fù)正常所需時(shí)間

組別 只數(shù) 生藥量 5 m i n 10 m i n 30 m i n 45 m i n正常對照組 10 - 157.5±16.1 144.3±20.5 142.6±11.4 144.1±11.9急支糖漿組 10 11.00 m L/kg 140.9±19.5 129.3±18.3 112.4±22.7*100.6±25.3**小劑量組 10 0.21 g/kg 132.4±19.1 118.3±23.6 94.1±10.9**82.0±11.2**中劑量組 10 0.42 g/kg 138.3±7.3*123.6±7.3*106.9±15.5**90.5±8.9**大劑量組 10 0.83 g/kg 70.6±37.4*△△71.3±31.6*△△38.6±31.9**△△32.2±27.7**△△

2.2 祛痰實(shí)驗(yàn)［4-7］

2.2.1 參橘止咳滴丸對小鼠酚紅法酚紅排出量的影響 參橘止咳滴丸各劑量組與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與陽性對照組比較，參橘止咳滴丸中、大劑量組小鼠酚紅排出量顯著增加(P＜0.05)。見表4。

表4 參橘止咳滴丸對小鼠酚紅法酚紅排出量的影響

表4 參橘止咳滴丸對小鼠酚紅法酚紅排出量的影響

組別 只數(shù) 劑量 O D值正常對照組 10 - 0.875±0.069急支糖漿組 10 18.00 m L/kg 1.466±0.044**小劑量組 10 0.34 g/kg 1.527±0.027**中劑量組 10 0.68 g/kg 1.749±0.049**△△大劑量組 10 1.36 g/kg 1.840±0.033**△△

2.2.2 參橘止咳滴丸對大鼠毛細(xì)管排痰法排痰量的影響 參橘止咳滴丸各劑量組與正常對照組比較，給藥前2小時(shí)痰液的排出量基本相同，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；給藥后2小時(shí)大鼠痰液的排出量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。給藥后2小時(shí)，參橘止咳滴丸小、中劑量組與陽性對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，大劑量組與陽性對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表5。

表5 參橘止咳滴丸對大鼠毛細(xì)管排痰法排痰量的影響

表5 參橘止咳滴丸對大鼠毛細(xì)管排痰法排痰量的影響

參考文獻(xiàn)［1］ 劉小花，沈孝麗，梁謹(jǐn)，等.多指標(biāo)綜合評分法優(yōu)化參橘止咳滴丸提取工藝［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(14):33-35.［2］ 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:1359-1365.［3］ 陳奇.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:625-631.［4］ 葉廣億，李書淵，陳艷芬，等.枇杷葉不同提取物的止咳化痰平喘作用比較研究［J］.中藥藥理與臨床，2013，29(2):100-102.［5］ 凌珊，易炳學(xué)，龔千鋒，等.生品和蜜炙款冬花不同提取物的鎮(zhèn)咳祛痰作用［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19(11): 187-190.［6］ 牛艷芬，孫玲，林華，等.鞘蕊喘咳舒膠囊止咳祛痰平喘作用研究［J］.中藥藥理與臨床，2010，26(3):48-49.［7］ 羅文敏，尹軍強(qiáng)，鄭先玉，等.桂龍咳喘寧片止咳化痰平喘藥效學(xué)的研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2011，22(10):2464-2465.［8］ 張劉強(qiáng)，李醫(yī)明.近10年玄參屬植物化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展［J］.中草藥，2011，42(11):2360-2368.［9］ 謝小艷，夏春森.中藥玄參的化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2010，6(5):121-125.［10］文高艷，周賢梅.陳皮有效成分在呼吸系統(tǒng)中的作用研究［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，20(3):385-386.

組別 只數(shù) 劑量 給藥前2小時(shí)痰液量/cm 給藥后小時(shí)痰液量/cm正常對照組 10 - 2.10±1.43 2.19±1.06急支糖漿組 10 12.50 m L/kg 2.15±1.51 9.56±1.32**小劑量組 10 0.24 g/kg 2.33±1.04 9.10±1.20**中劑量組 10 0.47 g/kg 1.88±0.71 10.70±1.20**大劑量組 10 0.94 g/kg 1.90±0.92 19.55±3.39**△△

3 討論

參橘止咳滴丸以玄參和陳皮為主藥，具有清熱解毒，止咳利咽之功效。研究表明［8-10］：玄參的主要有效成分為環(huán)烯醚萜類和苯丙素苷類化合物，陳皮的主要有效成分為黃酮類、揮發(fā)油、對羥福林、檸檬烯和N-甲基酪胺等化合物，具有廣泛的藥理活性，如具有神經(jīng)保護(hù)、抗糖尿病、抗腦缺血、抗炎、抗氧化等作用。

咳嗽是喉-氣管-支氣管系統(tǒng)對機(jī)械或化學(xué)刺激引起的一種正常生理反應(yīng)，在實(shí)驗(yàn)動物身上，可通過機(jī)械、化學(xué)或電刺激氣管黏膜迷走神經(jīng)而產(chǎn)生。痰是人體呼吸道的分泌物，由氣管和支氣管的腺體和杯狀細(xì)胞所分泌，最后會通過咳嗽被排出體外。本實(shí)驗(yàn)采用氨水、枸櫞酸噴霧和電極刺激引咳及大小鼠祛痰實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停詣游锟人詽摲?，咳嗽次?shù)，電刺激呼吸恢復(fù)時(shí)間、酚紅排出量和毛細(xì)管集痰量為指標(biāo)，觀察參橘止咳滴丸對實(shí)驗(yàn)動物模型的藥效學(xué)影響，發(fā)現(xiàn)參橘止咳滴丸表現(xiàn)出較好的止咳和祛痰作用，療效優(yōu)于急支糖漿，且在一定劑量范圍內(nèi)具有量效關(guān)系。

參橘止咳滴丸臨床應(yīng)用多年，對外感咳嗽和慢性支氣管炎急性發(fā)作引起的咳嗽具有確切療效，為止咳祛痰復(fù)方中藥制劑，本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步明確其止咳祛痰作用機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)和參考。

Pharmacodynamic Study on Antitussive and Expectorant Effects of ShenJu ZhiKe Drippling Pills

LI Juan1,LI Xiaodong2,FENG Shilan3,HU Fangdi3
1 Gansu Provincial Hospital,Lanzhou 730000,China;
2 Institute of Chinese Materia Medica of China Academy of Chinese Medical Sciences;
3 School of Pharmcy of Lanzhou University

Objective:To study antitussive and expectorant effects of ShenJu ZhiKe dripping pills.Methods: Antitussive and expectorant effects of ShenJu ZhiKe dripping pills were evaluated by the experiments of mice with cough induced by ammonia,guinea pig with cough induced by citric acid,guinea pig with cough induced by electricity stimulated superior laryngeal nerve,tracheal phenol red excretion test of the mice,capillary glass-tube expectoration method of the rats and other methods.Results:The difference indicated statistical meaning in the comparison of prolonging cough incubation period of experimental animals,reducing cough times,shortening breathing recovery time of guinea pig induced by electrical stimulation,increasing phenol red excretion amount and expectoration amount when different doses groups of ShenJu ZhiKe dripping pills were compared with normal control group (P＜0.05).The difference demonstrated statistical meaning in the comparison of prolong incubation period of experimental animals,shortening breathing recovery time of guinea pig induced by electrical stimulation,increasing phenol red excretion amount and expectoration amount when moderate and high doses groups of ShenJu ZhiKe dripping pills were compared with positive control group (JiZhi syrup)(P＜0.05).Conclusion:ShenJu ZhiKe dripping pills showobviousantitussiveandexpectoranteffects,andhighdosegroupissuperiortoJiZhisyrupgroupinclinicaleffects.

ShenJu ZhiKe dripping pills;antitussive effects;expectorant effects

R285.5

A

1004-6852(2015)10-0015-04

2015-02-10

蘭州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號05-1-48)。

李娟(1981—)，女，主治醫(yī)師。研究方向：慢性病的中醫(yī)藥康復(fù)治療。