朱艷哲，馬 泰，張從軍，孫國平

血清胸苷激酶1在腫瘤患者中的表達(dá)及臨床意義

朱艷哲，馬 泰，張從軍，孫國平

目的探討血清胸苷激酶1（TK1）檢測(cè)作為腫瘤細(xì)胞增殖標(biāo)志物對(duì)腫瘤早期預(yù)測(cè)的意義，探討血清TK1的含量與腫瘤病種、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、臨床分期及臨床治療效果評(píng)估的關(guān)系。方法應(yīng)用酶免疫點(diǎn)印跡化學(xué)發(fā)光法測(cè)定144例腫瘤患者（腫瘤患者組）和67例健康對(duì)照者（對(duì)照組）血清TK1的水平，分析血清TK1與腫瘤患者各生物學(xué)行為參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果腫瘤患者組和對(duì)照組在血清TK1水平及陽性表達(dá)率間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），且TK1濃度與年齡呈正相關(guān)性（P＜0.01）。腫瘤患者TK1的表達(dá)在不同病種之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），有復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的患者血清TK1陽性表達(dá)率與無復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的患者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），大腸癌及肺癌的Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期，各組血清TK1陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。大腸癌患者治療后不同臨床療效（完全緩解，部分緩解，疾病進(jìn)展）的患者血清TK1水平的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論TK1可用于對(duì)惡性腫瘤的早期篩查。血清TK1檢測(cè)可作為臨床上對(duì)腫瘤增殖程度及復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)的手段之一。

血清胸苷激酶1；腫瘤標(biāo)志物；酶免疫點(diǎn)印跡化學(xué)發(fā)光法；治療

胸苷激酶1（thymidine kinase 1，TK1）是細(xì)胞增殖S期的關(guān)鍵酶。在非增殖細(xì)胞和健康人血清中，TK1濃度極低或檢測(cè)不到，但當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)細(xì)胞異常增殖（如腫瘤細(xì)胞增殖）時(shí)，會(huì)呈現(xiàn)2～100倍的升高。研究［1］顯示，TK1作為細(xì)胞增殖標(biāo)志，可用于人群腫瘤疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)以及惡性腫瘤化療療效的評(píng)估。該實(shí)驗(yàn)在以往研究的基礎(chǔ)上測(cè)定不同腫瘤患者血清TK1水平，初步研究血清TK1的含量與腫瘤病種、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、臨床分期及臨床療效等生物學(xué)行為參數(shù)之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 腫瘤患者組納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)選取2013 年9月～2014年3月于安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科就診的腫瘤患者144例并采集血清，其中男78例，女66例；年齡16～85歲，中位年齡58歲。所有患者通過病理學(xué)確診，入院時(shí)心電圖、胸片、血常規(guī)和血生化指標(biāo)均在大致正常范圍，排除感染表現(xiàn)，卡氏評(píng)分（karnofsky performance score，KPS）＞70分，血紅蛋白（hemoglobin，Hb）＞90 g／L。144例腫瘤患者分別為：鼻咽癌2例、喉癌2例、甲狀腺癌1例、肺癌24例、乳腺癌18例、食管癌8例、胃癌15例、原發(fā)性肝癌2例、胰腺癌1例、大腸癌33例、膀胱癌5例，前列腺癌16例，惡性淋巴瘤17例。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（UICC）提出的TNM分期將33例大腸癌患者分為四期，其中Ⅰ期7例、Ⅱ期8例、Ⅲ期8例和Ⅳ期10例；24例肺癌分為Ⅰ期5例、Ⅱ期7例、Ⅲ期6例和Ⅳ期6例。

1.2 對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)選取健康成人67例并采集血清，男28例，女39例；年齡21～81歲，中位年齡36歲。為安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院常規(guī)體檢正常者，作為對(duì)照組。排除標(biāo)準(zhǔn)：家族腫瘤病史；既往及現(xiàn)在患有惡性腫瘤病史；先天性或獲得性免疫缺陷性疾?。怀溲孕牧λソ?、心絞痛、心肌梗死、不能控制的高血壓或心律失常等嚴(yán)重的心臟疾患；活動(dòng)性肝炎、肝硬化等嚴(yán)重的肝臟疾患；任意一種腎小球腎炎、腎病綜合征、尿毒癥等嚴(yán)重的腎臟疾患；糖尿病、庫欣綜合征等內(nèi)分泌疾患；病毒、細(xì)菌感染等感染性疾?。粣盒载氀?；服用刺激細(xì)胞增長等影響細(xì)胞代謝的藥物；處于生理期或者妊娠期的女性。兩組在性別、年齡、Hb含量、KPS評(píng)分等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。

1.3 方法腫瘤患者血清采集在化療下一療程治療前1 d，采集患者清晨空腹肘靜脈血2 ml。其余待測(cè)人群于清晨空腹抽取肘靜脈血2 ml。血標(biāo)本置于未加任何試劑的真空采血管中。所有檢測(cè)者抽血后所得標(biāo)本，室溫放置30 min后，3 500 r／min離心5 min，取上清液即為血清，保存于－20℃冰箱備用。使用前置4℃解凍后即用，不得反復(fù)凍融，溶血標(biāo)本和脂血標(biāo)本不宜使用。血清中TK1濃度的測(cè)定采用酶免疫點(diǎn)印跡化學(xué)發(fā)光法（ECLA），TK1試劑盒及CIS-1型化學(xué)發(fā)光成像分析儀均購自深圳華瑞同康公司，以TK1＞2 pmol／L為陽性結(jié)果。將曝光后的圖像用CIS-1型化學(xué)發(fā)光數(shù)字成像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，得到3份標(biāo)準(zhǔn)品及各份樣品對(duì)應(yīng)的灰度值。用TK1標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)數(shù)據(jù)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的TKl含量為橫坐標(biāo)（標(biāo)準(zhǔn)品1、2、3的TKl值分別為20、6.6、2.2 pmol／L），測(cè)定儀對(duì)3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的測(cè)量數(shù)據(jù)（灰度值）為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線并得到回歸曲線，其r值應(yīng)大于0.995，標(biāo)準(zhǔn)曲線成立。實(shí)驗(yàn)遵循1983年赫爾辛基宣言，實(shí)驗(yàn)中所有的樣本在患者得到知情同意后收集。

表1 腫瘤患者組及對(duì)照組的基本特征

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)算血清TK1的平均值。不同組別之間的計(jì)數(shù)資料（TK1陽性表達(dá)率的比較）采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料（TK1水平的比較）采用兩個(gè)獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)或配對(duì)t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 一般資料腫瘤患者組和對(duì)照組間的性別、年齡、家族史、Hb含量及KPS評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。腫瘤患者組血清TK1濃度（1.65±1.41）pmol／L和陽性表達(dá)率（27.78%）與對(duì)照組血清TK1濃度（0.59±0.49）pmol／L和陽性表達(dá)率（2.98%）比較，兩組間血清TK1水平及陽性表達(dá)率之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝4.16、2.95，P＜0.01）。

2.2 血清TK1與年齡及性別的關(guān)系將檢測(cè)者的年齡與TK1結(jié)果作相關(guān)性分析，結(jié)果顯示血清TK1濃度與年齡呈正相關(guān)性（r＝0.39，P＜0.01）。血清TK1表達(dá)與年齡分布的關(guān)系圖顯示，40歲以上人群血清TK1陽性表達(dá)率增多。見圖1。

106例男性檢測(cè)者中，24例男性血清TK1表達(dá)陽性，其陽性表達(dá)率為22.64%；105例女性檢測(cè)者中，16例女性血清TK1表達(dá)陽性，其陽性表達(dá)率為15.24%，兩組陽性表達(dá)率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝1.88，P＝0.12）。

2.3 血清TK1表達(dá)與不同腫瘤病種間的關(guān)系TK1在肺癌、乳腺癌、胃癌、大腸癌和惡性淋巴瘤患者中的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，各組陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝14.28，P＝0.01），前列腺癌與對(duì)照組陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 血清TK1表達(dá)與不同腫瘤病種間的關(guān)系［n（%），±s］

表2 血清TK1表達(dá)與不同腫瘤病種間的關(guān)系［n（%），±s］

項(xiàng)目nTK1陽性表達(dá)TK1濃度（pmol／L）肺癌2416（66.67）3.42±0.24乳腺癌1810（55.56）1.84±1.69胃癌1510（66.67）1.70±1.41大腸癌3323（69.70）2.77±0.59前列腺癌161（6.25）0.91±0.61惡性淋巴瘤1717（100.00）4.51±0.44對(duì)照672（2.99）0.59±0.49

2.4 血清TKl與腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的關(guān)系144例腫瘤患者中，有復(fù)發(fā)或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的共83例，血清TK1濃度（2.09±1.56）pmol／L，其中37例患者血清TK1表達(dá)陽性，陽性表達(dá)率為44.58%；無復(fù)發(fā)或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的共61例，血清TK1濃度（0.90±0.59）pmol／L，其中3例患者血清TK1表達(dá)陽性，陽性表達(dá)率為4.92%，兩組陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝18.81，P＜0.01）。

2.5 血清TKl臨床分期的關(guān)系按TNM國際分期將大腸癌和肺癌進(jìn)行分期，并分析不同分期間的血清TK1的陽性表達(dá)和濃度，結(jié)果顯示，大腸癌的Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期，各組間的TK1的陽性表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝9.43，P＜0.01）。見表3。肺癌的Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期，各組間的TK1的陽性表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝11.33，P＜0.01）。見表4。

表3 血清TK1表達(dá)與大腸癌患者臨床分期的關(guān)系［n（%），±s］

表3 血清TK1表達(dá)與大腸癌患者臨床分期的關(guān)系［n（%），±s］

臨床分期nTK1陽性表達(dá)TK1濃度（pmol／L）Ⅰ期72（28.57）0.98±1.10Ⅱ期83（37.50）1.32±1.61Ⅲ期86（75.00）2.85±1.75Ⅳ期107（70.00）3.96±1.09

表4 血清TK1表達(dá)與肺癌患者臨床分期的關(guān)系［n（%），±s］

表4 血清TK1表達(dá)與肺癌患者臨床分期的關(guān)系［n（%），±s］

臨床分期nTK1陽性表達(dá)TK1濃度（pmol／L）Ⅰ期51（20.00）1.02±1.54Ⅱ期73（42.86）1.48±1.15Ⅲ期66（100.00）3.11±1.02Ⅳ期66（100.00）4.76±0.95

2.6 血清TK1與臨床療效的關(guān)系觀察33例大腸癌患者經(jīng)為期4周的放化療前后3種腫瘤標(biāo)志物TK1、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、糖類抗原19-9（carbohydrate atigen 19-9，CA19-9）濃度變化，經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)結(jié)果顯示，治療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表5。進(jìn)一步按照完全緩解、部分緩解、疾病進(jìn)展3個(gè)實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以評(píng)估腫瘤大腸癌患者臨床療效，其中，完全緩解10例，部分緩解15例，疾病進(jìn)展8例，3組血清TK1濃度分別為（0.62±0.51）、（0.92±1.11）、（3.22± 1.27）pmol／L。經(jīng)方差分析結(jié)果顯示，3組間血清TK1的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝10.52、9.87、9.56，P＜0.01）。

表5 33例大腸癌患者治療前后腫瘤標(biāo)志物濃度變化（±s）

表5 33例大腸癌患者治療前后腫瘤標(biāo)志物濃度變化（±s）

項(xiàng)目治療前治療后t值P值TK1（pmol／L）3.41±0.921.52±0.796.540.03 CEA（μg／L）46.56±13.7724.98±15.535.110.01 CA19-9（U／ml）78.22±16.2335.59±10.424.020.00

3 討論

TK1作為異常增殖動(dòng)力學(xué)標(biāo)記物，具有較高的靈敏度和特異性。He et al［1］對(duì)752例癌癥患者的血清TK1水平進(jìn)行分析，證實(shí)血清TK1＞2 pmol／L表明細(xì)胞增殖度增加，且在8～10年內(nèi)進(jìn)程為惡性腫瘤風(fēng)險(xiǎn)是健康者的2倍。Xu et al［2］分析了11 278例健康人的血清TK1水平，其中54例血清TK1陽性，33例為良性腫瘤或組織增生，在隨后2年跟蹤中，有4例進(jìn)程為惡性病變。研究［3］指出乳腺癌在50歲后開始具有一定風(fēng)險(xiǎn)性。本研究顯示腫瘤患者與對(duì)照組的血清TKl水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且與年齡呈正相關(guān)性，因此，血清TK1是預(yù)測(cè)癌前病變、進(jìn)行早期惡性腫瘤風(fēng)險(xiǎn)篩查及早期診斷的一項(xiàng)重要參考指標(biāo)［4］。

本研究顯示不同腫瘤病種的血清TK1陽性表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與消化道腫瘤與肺癌細(xì)胞增殖較強(qiáng)，惡性淋巴瘤對(duì)化療不敏感有關(guān)，與研究［5］相似。Li et al［6］檢測(cè)250例非小細(xì)胞肺癌患者血清中TK1水平隨腫瘤分期而增高，轉(zhuǎn)移組顯著高于未轉(zhuǎn)移組，推測(cè)TK1作為腫瘤細(xì)胞的增殖標(biāo)志物，可以反映出患者的腫瘤增殖水平。本研究顯示，有復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的腫瘤患者血清TK1陽性表達(dá)率明顯高于無復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移者，說明血清TK1表達(dá)水平與腫瘤的惡性程度有關(guān)，與Wu et al［7］報(bào)道一致。

本研究同時(shí)觀察了33例大腸癌患者放化療前后血清腫瘤標(biāo)志物的變化情況顯示，治療前后血清TK1、CEA、CA19-9均有不同程度的下降。血清標(biāo)志物CEA、CA19-9用于鑒別患者是否進(jìn)入轉(zhuǎn)移階段或處于腫瘤早期，對(duì)于指導(dǎo)抗癌治療尤為重要［8－9］。一項(xiàng)1 692例乳腺癌患者的臨床研究［10］顯示，TK1的活性與患者生存時(shí)間以及內(nèi)分泌治療的預(yù)后呈相關(guān)性，TK1水平低，生存率高；TK1水平高，生存率低。研究［11］證實(shí)，血清TK1是評(píng)估腫瘤患者療效的有力工具。

盡管本次實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的血清標(biāo)本來源于不同的腫瘤患者，治療方法不同并存在著個(gè)體差異，但治療前后的TK1水平結(jié)果表明，治療后患者TK1水平明顯低于治療前，治療后病情進(jìn)展的患者血清TK1水平顯著高于病情緩解患者，說明化療后病情緩解，體內(nèi)無腫瘤細(xì)胞或殘留的腫瘤細(xì)胞已被殺傷或抑制，而化療后病情未緩解表明抑殺癌細(xì)胞的速度緩于癌細(xì)胞增殖速度，TK1不下降甚至明顯升高，與文獻(xiàn)［12］報(bào)道一致。血清TK1的濃度與臨床分期和臨床療效呈相關(guān)性，可用于對(duì)常規(guī)臨床治療的腫瘤患者的療效進(jìn)行監(jiān)視。

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The expression and clinical significance of serum thymidine kinase 1 in cancer patients

Zhu Yanzhe，Ma Tai，Zhang Congjun，et al
（Dept of Oncology，The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230022）

ObjectiveTo evaluate the use of serum thymidine kinase 1（TK1）as a proliferating tumor marker for early tumor detection.To investigate possible correlations between TK1 levels and categories，recrudescent or metastasizes，clinical staging levels and curative effect.MethodsUsing enhanced chemo-luminescence assay to detect the serum TK1 levels of 144 cancer patients and 67 healthy controls.Analyzing the relationship between the biological behavior of cancer parameters and the TK1 levels.ResultsThe concentration of TK1 in cancer patients was significantly higher compared to the control group（P＜0.01）.There exists significant difference in both TK1 concentrations and expression between cancer patients and the control group（P＜0.01）.The positive rate of TK1 expression was found to increase as age increased（P＜0.01）.There exists significant difference in TK1 expression between different categories（P＜0.05）.There was also significant difference in TK1 expression between patients with recrudescent or metastasizes and patients without recrudescent or metastasizes（P＜0.01）.The significant difference in TK1 expression was found between different clinical staging（Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ）of colorectal and lung cancers（P＜0.01）.There exists significant difference in TK1 concentration between untreated and post-treated cancer patients.The significant difference of concentrations of TK1 was found in routine clinical setting therapy effects（CR／PR／PD）in post-treated cancer patients（P＜0.01）.ConclusionTK1 can predict the risk for development of neoplasia related diseases in its early stages.Concentration levels of TK1 can monitor tumor growth as well as predict the likelihood of recurrence in cancer patients.

thymidine kinase 1；tumor marker；enhanced chemiluminescence dot blot assay；therapy

R 730.4

A

1000－1492（2015）07－1012－04

2015－04－14接收

國家自然科學(xué)基金（編號(hào)：81272739）

安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，合肥 230022

朱艷哲，女，醫(yī)師，碩士研究生；孫國平，男，主任醫(yī)師，教授，博士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：sungp＠ahmu.edu.cn