吳進(jìn)福，周曉慧，范慧敏，，林芳，寶璐爾，張林，姜麗華*，劉中民，*

（1.鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院麻醉科，鄭州 450052；2.上海市心力衰竭研究中心，上海 200120；3.同濟(jì)東方轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中心，上海 200120；4.同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院心外科，上海 200120)

研究報(bào)告

RhoA/ROCK信號(hào)通路在左心疾病致大鼠肺動(dòng)脈高壓模型中的作用

吳進(jìn)福1，周曉慧2，3，范慧敏2，3，4，林芳2，3，寶璐爾4，張林2，3，姜麗華1*，劉中民2，3，4*

（1.鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院麻醉科，鄭州 450052；2.上海市心力衰竭研究中心，上海 200120；3.同濟(jì)東方轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中心，上海 200120；4.同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院心外科，上海 200120)

目的探討RhoA/ROCK信號(hào)通路在左心疾病相關(guān)的大鼠肺動(dòng)脈高壓模型中的表達(dá)水平和作用。方法3～4周齡雄性SD大鼠20只，體重90～100 g，隨機(jī)分為對(duì)照組（C組:n=10)、肺高壓組（H組:n=10)。H組采用升主動(dòng)脈固定縮窄術(shù)建造左心疾病相關(guān)肺動(dòng)脈高壓大鼠模型，C組大鼠行假手術(shù)處理（鈦夾固定于血管旁縱隔組織而非升主動(dòng)脈，其他所有手術(shù)操作同H組)，在建模后60 d，對(duì)各組大鼠進(jìn)行血流動(dòng)力學(xué)（右心室收縮壓、肺動(dòng)脈壓力)檢測(cè)，處死大鼠并用PBS行在體心肺灌洗致雙肺變白，左肺組織固定于4%多聚甲醛行病理切片以觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)變化、右肺組織凍存以備生物分子學(xué)檢測(cè)（Rho激酶mRNA、RhoA mRNA、ET-A受體mRNA)。結(jié)果與C組相比，H組肺動(dòng)脈壓力、右心室收縮壓明顯增高（P＜0.01)，肺小動(dòng)脈壁明顯增厚，肺小動(dòng)脈管腔狹窄甚至閉塞，管壁肥厚指數(shù)明顯增大（P＜0.01)；與C組相比，H組肺組織的Rho激酶mRNA表達(dá)水平明顯增加，RhoA mRNA、ET-A受體mRNA表達(dá)水平亦明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01)。結(jié)論采用升主動(dòng)脈固定縮窄術(shù)成功建造了左心疾病相關(guān)肺動(dòng)脈高壓大鼠模型；與C組相比，H組肺小血管壁明顯增厚，肺組織的Rho激酶mRNA、RhoA mRNA、ET-A受體mRNA表達(dá)明顯增高，該信號(hào)通路可能參與了左心疾病相關(guān)肺動(dòng)脈高壓的形成過程。

肺動(dòng)脈高壓；升主動(dòng)脈縮窄；Rho激酶；RhoA；大鼠

肺動(dòng)脈高壓（pulmonary hypertension，PH)是由多種病因?qū)е碌囊环N極度嚴(yán)重的疾病，以肺血管阻力進(jìn)行性加重為其臨床特征，是死亡率較高的一種慢性消耗性疾病[1］，其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。已有研究表明，RhoA/ROCK信號(hào)通路的異常激活與肺血管內(nèi)皮功能受損、肺血管收縮性增強(qiáng)以及肺血管壁結(jié)構(gòu)重組等病理生理過程密切相關(guān)，在肺動(dòng)脈高壓發(fā)病機(jī)制中扮演重要角色[2］。RhoA/ROCK信號(hào)通路異常激活在肺動(dòng)脈高壓發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用在多種肺動(dòng)脈高壓的動(dòng)物模型中已經(jīng)得到證明，如:丹佛海拔高度下誘導(dǎo)的fawn-hooded大鼠PH模型[3］、慢性低氧環(huán)境誘導(dǎo)的大鼠PH模型[4，5］、野百合堿誘導(dǎo)的大鼠PH模型[6］、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體阻滯劑誘導(dǎo)的大鼠PH模型[7］等。然而，左心功能異常（收縮功能障礙、舒張功能障礙、心臟瓣膜病)是引發(fā)肺動(dòng)脈高壓的重要病因之一[8］，RhoA/ ROCK信號(hào)通路的異常激活在左心疾病相關(guān)性PH中的作用卻鮮有研究。另外，RhoA/ROCK信號(hào)通路與血管活性物質(zhì)內(nèi)皮素（ET-1)之間存在相互調(diào)節(jié)關(guān)系，抑制ROCK對(duì)心臟所起到的保護(hù)作用與間接下調(diào)ET-1的表達(dá)有關(guān)[9］，而其在左心疾病相關(guān)性PH中是否有相似作用，尚不得而知。本研究擬通過升主動(dòng)脈縮窄致大鼠肺動(dòng)脈高壓的模型，來探討RhoA/ROCK信號(hào)通路在左心疾病致大鼠肺高壓中的表達(dá)水平和作用。

1 材料與方法

1.1 材料

雄性SPF級(jí)SD大鼠20只，3～4周齡，體重90～100 g，由上海市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供【SCXK（滬) 2013-0016】，實(shí)驗(yàn)在同濟(jì)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心進(jìn)行【SYXK（滬)2009-0022】。隨機(jī)分為2組:對(duì)照組（C組:n=10)、左心疾病相關(guān)肺高壓組（H組:n= 10)。

1.2 模型制備

本研究采用冠狀動(dòng)脈開口以上的升主動(dòng)脈縮窄手術(shù)來建造左心疾病相關(guān)大鼠肺動(dòng)脈高壓模型。腹腔注射1%戊巴比妥鈉（CAS No:57-33-0，美國(guó)Sigma)對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行麻醉（用量:5 mL/100 g)，用20G靜脈留置針軟管（批號(hào):1200843，中國(guó)競(jìng)瑪)對(duì)麻醉后大鼠行經(jīng)口氣管插管術(shù)，接小動(dòng)物呼吸機(jī)（產(chǎn)品型號(hào):ALC-V8S，上海奧爾科特生物科技有限公司，參數(shù)設(shè)置:潮氣量4～5 mL，頻率70～80次/分)，在胸部正中與前肢平行處行2～3 cm切口，鈍性分離皮下肌肉組織充分暴露胸骨及氣管，正中劈開胸骨1～2 cm，沿氣管左側(cè)向下逐漸鈍性分離各組織，可去掉部分有礙術(shù)野的胸腺組織，充分暴露主動(dòng)脈弓，迅速環(huán)繞升主動(dòng)脈植入一個(gè)事先依據(jù)大鼠體重設(shè)定好內(nèi)徑（0.8 mm)的鈦夾（產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào): YZB/國(guó)1931-2011，建德市康華醫(yī)療器械有限公司)以縮窄升主動(dòng)脈的口徑，在確認(rèn)沒有明顯出血后于吸氣末閉合胸腔，無菌外科逐層縫合切口，手術(shù)結(jié)束后各模型鼠單籠SPF級(jí)別飼養(yǎng)。對(duì)照組大鼠行假手術(shù)處理，即開胸分離升主動(dòng)脈后，鈦夾固定于周圍縱隔組織而非升主動(dòng)脈，其他操作同模型組。各組大鼠于手術(shù)操作60 d后行血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)及處死取材以備各指標(biāo)的檢測(cè)[10］。

1.3 血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)

在造模后第60天，對(duì)各組大鼠行血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè):腹腔注射1%戊巴比妥鈉對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉（用量:5 mL/100 g)，連接心電圖電極，行心電監(jiān)護(hù)，用75%的乙醇對(duì)大鼠頸部進(jìn)行消毒，小心分離大鼠右頸外靜脈，從右頸外靜脈插入肝素化的聚乙烯測(cè)壓管，測(cè)壓管另一端連接換能器（保證換能器與心臟位置同高)，由多導(dǎo)生理記錄裝置（Power Lab 8/30；AD Instruments，Sydney，Australia)進(jìn)行檢測(cè)記錄，根據(jù)顯示器波形變化判定測(cè)壓管位置，先測(cè)定大鼠右心室收縮壓，波形穩(wěn)定后調(diào)整測(cè)壓管位置，直至測(cè)壓管進(jìn)入肺動(dòng)脈，待波形穩(wěn)定，保存檢測(cè)結(jié)果，分析波形，計(jì)算各組壓力值（本步測(cè)壓、分析波形、計(jì)算數(shù)據(jù)由上海市肺科醫(yī)院肺循環(huán)實(shí)驗(yàn)室提供技術(shù))。

1.4 病理學(xué)檢查

各組大鼠用15 mL PBS液進(jìn)行心肺灌洗，去除心肺組織內(nèi)的血液，整體取下大鼠心肺組織，然后，新鮮左肺浸入4%多聚甲醛固定液中固定，固定時(shí)間至少72 h，之后制成蠟塊并切片，用于HE染色行病理學(xué)檢查，使用Image-Pro Plus 6.0對(duì)肺小動(dòng)脈的直徑及管壁進(jìn)行測(cè)量，從而計(jì)算小動(dòng)脈中層增厚的程度。

1.5 m RNA檢測(cè)

（右肺組織行Rho激酶mRNA、RhoA mRNA、ET-A受體mRNA表達(dá)的檢測(cè))右肺組織置于無菌凍存管，液氮速凍之后于 -80℃凍存用于QPCR檢測(cè)。引物由上海英濰基貿(mào)易有限公司合成，Rho激酶mRNA引物品號(hào) A12925:上游序列為5’-CTGCGGGTACGAAGGTATCG-3’，下游序列為5’-AGCATCCAATCCATCCAGCA-3’；RhoA mRNA引物品號(hào)A12925:上游序列為5’-ACCAGTTCCCAGAGGTGTATG-3’，下游序列為5’-TTGGGACAGAAGTGCTTGACTTC-3’；ET-A受體mRNA引物品號(hào)A12925:上游序列為5’-CCGAGGAGCTCTAAGGGGAA-3’，下游序列為5’-CCAAAAGGACGCCAGAAAGC-3’；GAPDH引物品號(hào) A12926:上游序列 5’-GCCATCAACGACCCCTTCATTG-3’，下游序列 5’-TGCCAGTGAGCTTCCCGTTC-3’；根據(jù) TRNzol-A+總RNA提取試劑盒（目錄號(hào):66020，美國(guó)Ambion?)說明書的步驟進(jìn)行大鼠肺組織總RNA提取；根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（貨號(hào):AK2702，日本TaKaRa)說明書的步驟進(jìn)行RNA反轉(zhuǎn)錄；根據(jù)Power SYBR? Green PCR Master Mix（貨號(hào):1407463，英國(guó)Applied Biosystems?)說明書步驟進(jìn)行QPCR操作；測(cè)定樣本mRNA的表達(dá)量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究所得數(shù)據(jù)用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 右心室收縮壓、肺動(dòng)脈壓檢測(cè)結(jié)果

經(jīng)右頸外靜脈插入肝素化的聚乙烯測(cè)壓管至右心室、肺動(dòng)脈，測(cè)壓管另一端連接換能器，由多導(dǎo)生理記錄裝置進(jìn)行檢測(cè)記錄，結(jié)果顯示，H組與C組相比，平均肺動(dòng)脈壓、右心室收縮壓均顯著升高，P＜0.01（表1所示)。結(jié)果證明，利用升主動(dòng)脈固定縮窄術(shù)成功建造大鼠肺動(dòng)脈高壓模型。

表1 兩組血流動(dòng)力學(xué)的比較（±s，mmHg，n=10) Tab.1 Hemodynamics of the two groups

表1 兩組血流動(dòng)力學(xué)的比較（±s，mmHg，n=10) Tab.1 Hemodynamics of the two groups

注:與C組相比，**P＜0.01。Note.**P＜0.01，Compared with the group C.

右心室收縮壓Right ventricular systolic pressure C組Group C 17.2073±1.7406 27.1510±3.0432 H組Group H 33.0659±4.4519**58.8399±7.3327**組別Groups平均肺動(dòng)脈壓Mean pulmonary artery pressure

2.2 肺組織病理學(xué)改變

經(jīng)多聚甲醛固定后的大鼠肺組織進(jìn)行石蠟包埋、切片、HE染色，染色后的切片使用軟件Image-Pro Plus 6.0對(duì)肺小動(dòng)脈的直徑及管壁進(jìn)行測(cè)量，從而計(jì)算并比較小動(dòng)脈中層增厚的程度（肺小動(dòng)脈管壁與血管直徑的比值)，結(jié)果顯示，與C組（0.1655 ±0.03633)相比，H組（0.3864±0.06659)小動(dòng)脈中層明顯增厚，P＜0.01（圖1所示)。圖1A、B分別顯示HE染色的C組和H組肺組織，圖1C為C組和H組肺小動(dòng)脈中層厚度與肺小動(dòng)脈直徑比值的統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果。

2.3 肺組織Rho激酶mRNA、RhoA m RNA、ET-A受體mRNA表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果

RT-PCR測(cè)Rho激酶mRNA、RhoAmRNA、ET-A受體mRNA水平的表達(dá):以GAPDH為內(nèi)參對(duì)照，結(jié)果以Rho激酶mRNA、RhoA mRNA、ET-A受體mRNA與GAPDH mRNA的2-△△CT表示其相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果顯示，H組與C組相比，Rho激酶mRNA、RhoA mRNA、ET-A受體mRNA的相對(duì)表達(dá)量均明顯增高，P＜0.01（表2所示)。

圖1 肺組織病理改變Fig.1 Morphometric analysis of the pulmonary arteries

表2 兩組Rho激酶mRNA、RhoA mRNA、ET-A受體mRNA相對(duì)表達(dá)量的比較（±s，n=10)Tab.2 mRNA levels of Rho kinase，RhoA and ET-AR in lungs of the two groups

表2 兩組Rho激酶mRNA、RhoA mRNA、ET-A受體mRNA相對(duì)表達(dá)量的比較（±s，n=10)Tab.2 mRNA levels of Rho kinase，RhoA and ET-AR in lungs of the two groups

注:與C組相比，**P＜0.01。Note.**P＜0.01，compared with the group C.

ET-A受體mRNA相對(duì)表達(dá)量ET-AR mRNA levels C組Group C 1.0140±0.1377 0.9667±0.1412 1.0040±0.08159組別Groups Rho激酶mRNA相對(duì)表達(dá)量mRNA levels of Rho kinase RhoA mRNA相對(duì)表達(dá)量RhoA mRNA levels H組Group H 17.9391±1.2489**38.4689±3.0000**2.3926±0.2775**

3 討論

依據(jù)病理表現(xiàn)、血流動(dòng)力學(xué)特征以及臨床診治策略肺動(dòng)脈高壓分五大類:①動(dòng)脈性肺動(dòng)脈高壓；②左心疾病所致肺動(dòng)脈高壓；③缺氧和/或肺部疾病引起的肺動(dòng)脈高壓；④慢性血栓栓塞性肺動(dòng)脈高壓；⑤多種機(jī)制和/或不明機(jī)制引起的肺動(dòng)脈高壓[11］。其中，作為第二大類肺高壓的左心疾病所致的肺高壓在臨床上比單純的動(dòng)脈型肺動(dòng)脈高壓還要多見，并且這種病患群體的發(fā)病率和死亡率日益增加[12］。目前，常規(guī)治療肺動(dòng)脈高壓的藥物在左心疾病相關(guān)性PH治療中的作用差強(qiáng)人意，因此，進(jìn)一步探究本病的發(fā)病機(jī)制、探索新的治療靶點(diǎn)十分必要。前期大量研究已表明，RhoA/ROCK信號(hào)通路異常激活在多種肺動(dòng)脈高壓大鼠模型中均起到至關(guān)重要的作用[3-7］，該信號(hào)通路在左心疾病所致肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生過程中是否發(fā)揮相似作用，仍需進(jìn)一步的研究。

采用金屬鈦夾將大鼠升主動(dòng)脈進(jìn)行固定縮窄，以增加左心室后負(fù)荷，進(jìn)而導(dǎo)致左心室壓力增高、心室壁代償肥大，久之會(huì)進(jìn)一步發(fā)展為肺動(dòng)脈高壓，符合左心疾病相關(guān)肺動(dòng)脈高壓病人的病理發(fā)展過程，許多研究已證明了此建模方法的可行性[9，13-15］。本研究中我們采用金屬鈦夾縮窄大鼠升主動(dòng)脈建立大鼠PH模型，并于建模后60 d比較C組與H組之間右心室收縮壓及肺動(dòng)脈壓的差異，結(jié)果顯示，該方法可成功建造大鼠肺動(dòng)脈高壓模型，血流動(dòng)力學(xué)結(jié)果和病理學(xué)結(jié)果顯示采用升主動(dòng)脈縮窄術(shù)建造的大鼠肺動(dòng)脈高壓模型，與人類左心疾病所致肺動(dòng)脈高壓的病理生理狀態(tài)相似，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。

ROCK（即Rho激酶)屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶類家族，是小GTP結(jié)合蛋白R(shí)hoA一個(gè)重要的下游信號(hào)蛋白[16］。G蛋白偶聯(lián)受體被激動(dòng)因子（如ET-1、5-HT等)可通過 ET受體活化 RhoA進(jìn)而激活ROCK，活化的ROCK可使平滑肌細(xì)胞內(nèi)肌球蛋白輕鏈磷酸化酶（MLCP)的一個(gè)亞基—MYPT-1發(fā)生磷酸化，進(jìn)而使MLCP失活、胞內(nèi)磷酸化肌球蛋白輕鏈（p-MLC)水平增高，介導(dǎo)非Ca2+濃度依賴性的平滑肌細(xì)胞收縮；另一方面，活化的ROCK可激活細(xì)胞膜Ca2+通道增加Ca2+內(nèi)流，胞內(nèi)Ca2+濃度增加從而激活肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK)，活化的ML-CK促使MLC磷酸化，胞內(nèi)p-MLC水平增高，介導(dǎo)Ca2+濃度依賴性的平滑肌細(xì)胞收縮；同時(shí)，ROCK可促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的分化、增生與移行，并參與調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞移行和血管內(nèi)皮屏障功能[17-19］。RhoA/ ROCK信號(hào)通路通過多條途徑影響血管平滑肌的收縮，從而在PH的發(fā)生發(fā)展過程中起到關(guān)鍵作用。但有關(guān)該信號(hào)通路在左心疾病相關(guān)肺高壓中的研究較少，本研究中，我們發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，肺動(dòng)脈高壓組Rho激酶mRNA、RhoA mRNA、ET-A受體mRNA的表達(dá)水平顯著升高，提示RhoA/ROCK信號(hào)通路的異常激活在此類肺高壓模型中亦起到了至關(guān)重要的作用，且此信號(hào)通路的活化可能與ET-1分子表達(dá)量增高有關(guān)。另外，病理組織切片結(jié)果顯示，肺動(dòng)脈高壓時(shí)存在肺小動(dòng)脈血管重構(gòu)的改變，此現(xiàn)象可能與RhoA/ROCK信號(hào)通路的異常激活有關(guān)，該結(jié)果為進(jìn)一步在左心疾病所致肺高壓中研究RhoA/ ROCK信號(hào)通路在肺微血管病變中的作用機(jī)制提供了部分實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

因此，本研究的結(jié)果表明，通過縮窄升主動(dòng)脈可成功建立大鼠肺動(dòng)脈高壓模型；在大鼠左心疾病所致的肺高壓的發(fā)生模型中，Rho激酶mRNA、RhoA mRNA、ET-A受體mRNA的表達(dá)水平明顯升高，提示RhoA/ROCK信號(hào)通路異常激活（可能與ET-1因子表達(dá)量增高有關(guān))，進(jìn)而可能參與肺小動(dòng)脈的血管重構(gòu)，有關(guān)RhoA/ROCK信號(hào)通路如何介導(dǎo)左心疾病相關(guān)肺高壓的發(fā)展過程，以及如何阻斷該信號(hào)通路進(jìn)而改善左心疾病相關(guān)肺高壓的作用仍需進(jìn)一步的研究。

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The role of RhoA/ROCK pathwaj in the ratmodels of left heart disease-associated pulmonarj hjpertension

WU Jin-fu1，ZHOU Xiao-hui2，3，F(xiàn)AN Hui-min2，3，4，LIN Fang2，3，BAO Lu-er4，ZHANG Lin2，3，JIANG Li-hua1*，LIU Zhong-min2，3，4*
（1.Department of Anesthesiology，the Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China；2.Shanghai Heart Failure Research Center；3.Research Center for Translational Medicine；4.Department of Cardiac Surgery，Shanghai East Hospital，Tongji University School of Medicine，Shanghai200120)

ObjectiveTo investigate the role of RhoA/Rho-kinase pathway in ratmodels of left heart disease-associated pulmonary hypertension（PH-LHD).MethodsTwentymale SD rats（3-4 week-old，90-100 g)were randomly divided into two groups（10 rats in each group):the group C（control group)with sham operation，and group H（pulmonary arterial hypertension).The ratmodel of leftheartdisease-associated pulmonary hypertension was established by supracoronary aortic banding in the group H，and the sham surgerywas applied for the rats in the group C（The titanium clip wasfixed at themediastinal tissue adjacent to the artery rather than the ascending aorta).On day 60 after the operation，the cardiac functions，including rightventricular systolic pressure and pulmonary artery pressurewere evaluated.After that，all rats were sacrificed and treated with cardiopulmonary lavage in vivo until the lung became white.Then the left lung tissues were fixed in 4%paraformaldehyde for pathological observation while the right lung tissues were frozen formRNA detection.ResultsCompared with the group C，both ventricular systolic pressure and pulmonary artery pressure in the group H were increased significantly（P＜0.01).Pathological data demonstrated that the pulmonary artery walls in H group were much thicker than that in the group C.Moreover，vascular wall hypertrophy index in the group H was increased greatly compared with that in the group C（P＜0.01).QPCR data showed thatmRNA levels of Rho kinase，RhoA and ET-A R in the group H were up-regulated compared with the group C（P＜0.01).ConclusionsRatmodelof leftheartdisease-associated pulmonary arterial hypertension can be successfully established by supracoronary aortic banding.Rho-kinase-mediated pathwaymay contribute to the pathogenesis and progress of leftheart disease-associated pulmonary arterial hypertension.

Pulmonary arterial hypertension；Supracoronary aortic banding；Rho kinase；RhoA；Rat

Q95-33

A

1005-4847（2015)06-0612-05

10.3969/j.issn.1005-4847.2015.06.013

2015-07-07

科技部國(guó)際合作項(xiàng)目（2012DFG31440)；上海市科委（13411951402)；上海市領(lǐng)軍人才（2012053)；上海市浦東新區(qū)國(guó)際合作項(xiàng)目（Pkj2013-z03)。

吳進(jìn)福（1988-)，男，碩士研究生，專業(yè):麻醉學(xué)。

姜麗華（1963-)，女，教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要研究方向:圍術(shù)期器官保護(hù)。Email:geda66@126.com；劉中民，1965-，男，教授，博士生導(dǎo)師，主要研究方向:心力衰竭。Email:zhongmin_liu@sina.com，