巴桑旺堆　羅布　平措占堆　德吉央宗　拉巴卓瑪

摘要：結(jié)合西藏實際，從精液提取、貯存、解凍、品質(zhì)檢查等方面開展了荷斯坦、娟姍牛冷凍精液生產(chǎn)工藝流程研究。結(jié)果表明，利用液態(tài)氮進行細管凍精制作，將稀釋后的精液進行液氮冷凍保存，解凍后精子活力符合種用標(biāo)準(zhǔn)。該研究為利用人工授精技術(shù)進行高原奶牛養(yǎng)殖和當(dāng)?shù)仄贩N改良奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：種公牛；冷凍精液；解凍；工藝流程

中圖分類號：S814.3；S823 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1007-273X（2017）07-0005-01

利用液氮進行精液體外冷凍保存技術(shù)在多種家畜中取得成功。隨著我國畜牧業(yè)的逐漸規(guī)?；l(fā)展，我國在20世紀(jì)80年代開始引進國外冷凍技術(shù)制備工藝，經(jīng)過不斷探索和改良，逐步開發(fā)出細管凍精保存技術(shù)[1]。與顆粒冷凍精液技術(shù)相比較，細管冷凍精液技術(shù)有省時、省力、操作簡便、效果穩(wěn)定以及所用設(shè)施投入少等優(yōu)點，更適合牛群改良，為畜牧業(yè)的快速發(fā)展起到了促進作用[2]。本試驗結(jié)合西藏實際，開展了荷斯坦、娟姍牛冷凍精液生產(chǎn)工藝流程研究，取得了明顯成效。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗儀器設(shè)備：法國卡蘇公司生產(chǎn)的牛冷凍精液全套設(shè)備、消毒設(shè)備。

試驗材料：純種荷斯坦和娟姍牛種公牛，各種玻璃器皿、假陰道、稀釋液、載玻片、蓋玻片等。

1.2 方法

采精技術(shù)室準(zhǔn)備：稀釋液制備、環(huán)境控制、儀器設(shè)備調(diào)試、采精器準(zhǔn)備、采精前準(zhǔn)備均按照國家標(biāo)準(zhǔn)要求進行。

公牛精液采集、精液稀釋、精液冷凍、活力判斷均根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)進行操作（GB 4143-2008）。

1.3 凍精生產(chǎn)工藝流程

凍精生產(chǎn)工藝流程[3，4]如下：第一步：采精前準(zhǔn)備。技術(shù)室準(zhǔn)備：稀釋液制備、環(huán)境控制、儀器設(shè)備調(diào)試、采精器準(zhǔn)備。第二步：采精。沖洗生殖器、性欲控制、獲得優(yōu)質(zhì)精液。第三步：原精液檢查。測定精液量、觀察活力、測定密度。第四步：精液稀釋。根據(jù)計算的結(jié)果準(zhǔn)確加入稀釋液。第五步：封裝。將稀釋后的精液充裝入細管封口，并噴印個體信息。第六步：降溫平衡。將封裝后的細管精液置于4 ℃冷柜中，降溫平衡3～5 h。第七步：冷凍。將將平衡后的細管精液碼屜，放入全自動冷凍儀中，按冷凍程序冷凍，設(shè)定冷凍時間為7 min。第八步：質(zhì)量檢驗。37 ℃水浴解凍后檢查，活力40%以上者保留。定期對全群公牛凍精隨機抽樣，按國家標(biāo)準(zhǔn)進行質(zhì)量檢查。

2 結(jié)果與分析

選取牛號為HS11113570和JE11113001的荷斯坦種公牛和娟姍牛，分別于20月齡時進行了采精訓(xùn)練，荷斯坦牛、娟姍牛分別于24月齡和26月齡時正式采精后進行了凍精生產(chǎn)。兩頭牛鮮精色澤為乳白色或淡黃色，荷斯坦種公牛的平均射精量高于娟珊牛種公牛，荷斯坦種公牛次均量（5.14±2.18） mL，娟珊牛種公牛次均量（4.86±2.75） mL；而其原精活力、精子密度、解凍后活力娟珊牛種公牛高于荷斯坦種公牛。從生產(chǎn)學(xué)表觀角度分析，高海拔地區(qū)對娟珊牛和荷斯坦種公牛生長和發(fā)育無不良影響，其后續(xù)生產(chǎn)性能方面有待進一步研究；其采精和精液稀釋中的失敗率因試驗處于探索階段，暫無法分析。

3 結(jié)論與討論

拉薩和北京海拔相差3 070 m，氣候差異明顯，種公牛飼養(yǎng)管理條件差距較大。影響種公牛精液質(zhì)量的因素很多，營養(yǎng)、年齡、品種、季節(jié)、衛(wèi)生狀況、溫度等[5，6]。

試驗發(fā)現(xiàn)，高海拔地區(qū)對娟珊牛和荷斯坦種公牛生長和發(fā)育無不良影響。引入的第一批種公牛經(jīng)過2年多的飼養(yǎng)，整體上適應(yīng)了高海拔地區(qū)的自然環(huán)境，生長發(fā)育狀況良好，凍精生產(chǎn)能力較強，符合種用標(biāo)準(zhǔn)；第二批引進的種公牛在高海拔地區(qū)飼養(yǎng)近2個月，各項生理指標(biāo)比較正常，生長發(fā)育良好，預(yù)計盡快投入生產(chǎn)。本試驗對藏區(qū)種公牛冷凍精液的生產(chǎn)及其工藝流程進行研究，以期為藏區(qū)生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)牛冷凍精液起到指導(dǎo)作用，利用優(yōu)秀種公牛遺傳物質(zhì)改良藏區(qū)當(dāng)?shù)嘏?，加速藏區(qū)牛的改良和養(yǎng)殖水平。

參考文獻：

[1] 李曉強，陳興平，賈永紅，等.牛精液冷凍技術(shù)應(yīng)用研究進展[J].中國牛業(yè)科學(xué)，2006，32（5）：59-62.

[2] 淵錫藩，張一玲.細管冷凍精液生產(chǎn)工藝流程[J].畜牧獸醫(yī)雜志，2000，19（5）：38-39.

[3] 肖 清.牛冷凍精液生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制[J].云南畜牧獸醫(yī)，2000（2）：34.

[4] 張一玲，淵錫藩，邢小軍.我國牛冷凍精液生產(chǎn)工藝溫度曲線的現(xiàn)狀分析研究[J].黃牛雜志，1994，20（增刊）：34-36.

[5] 戴德榮.牛人工授精技術(shù)操作規(guī)程[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2008（8）：198.

[6] 王麗云，劉 玉，朱子岳，等.淺析影響牛冷凍精液質(zhì)量的幾個重要因素[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2014（2）：108-109.