馬 麗，曾貴榮，2，張妙紅，鄧 青，張 丹，羅術(shù)佳，潘善慶，姜德建，王小青

（1.湖南省藥物安全評價研究中心，長沙 410331；2.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物所，北京 100193）

鵪鶉高尿酸血癥動物模型脂代謝研究

馬 麗1，曾貴榮1，2，張妙紅1，鄧 青1，張 丹1，羅術(shù)佳1，潘善慶1，姜德建1，王小青1

（1.湖南省藥物安全評價研究中心，長沙 410331；2.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物所，北京 100193）

目的研究鵪鶉高尿酸血癥動物模型及脂代謝。方法采用高脂飼養(yǎng)鵪鶉30d后，灌胃給予腺嘌呤（50mg/只），連續(xù)7d，建立鵪鶉高尿酸血癥模型，觀察22d后，取血檢測血尿酸、黃嘌呤氧化酶、肌酐（CRE）、尿素氮（BUN）、甘油三脂（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、總膽固醇（CHO）、黃嘌呤氧化酶（XOD）、肝脂酶（HL）、脂蛋白脂酶（LPL）、腺苷脫氫酶（ADA）脂質(zhì)代謝指標(biāo)，取關(guān)節(jié)和腎臟進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。結(jié)果模型對照組動物血尿酸均明顯升高（P＜0.01），CRE、BUN、TG、LDL、XOD均有明顯升高（P＜0.05或P＜0.01），血清CHO、LPL、ADA、HDL含量明顯降低（P＜0.05）。造模后動物足趾關(guān)節(jié)明顯腫大，周圍軟組織腫脹。X光顯示足趾骨密度減低，部分關(guān)節(jié)面破壞呈溶骨性破壞。病理學(xué)檢查可見關(guān)節(jié)滑膜增生，有大量炎癥細(xì)胞浸潤，部分被纖維結(jié)締組織替代，腎臟組織腎小管及間質(zhì)可見尿酸鹽結(jié)晶，部分小管輕度擴(kuò)張，腎間質(zhì)纖維增生，并伴有大量炎癥細(xì)胞浸潤。結(jié)論該模型具有關(guān)節(jié)腫大、腎臟尿酸鹽沉積等腎臟損傷，且伴有脂代謝紊亂，其病理機制與XOD、ADA相關(guān)脂代謝酶活性有關(guān)。

鵪鶉；高尿酸血癥；脂代謝

痛風(fēng)（gout）是長期嘌呤代謝障礙、血尿酸增高引起組織損傷的一組異質(zhì)性疾病。臨床特點是：高尿酸血癥（hyperuricemia）、痛風(fēng)性急性關(guān)節(jié)炎反復(fù)發(fā)作、痛風(fēng)石沉積、特征性慢性關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)畸形，常累及腎臟引起慢性間質(zhì)性腎炎和腎尿酸結(jié)石形成［1］。本研究通過建立一種穩(wěn)定持久的高尿酸血癥的動物模型，同時研究該模型脂代謝相關(guān)指標(biāo)的變化。

1 材料和方法

1.1 動物

普通級迪法克鵪鶉，雄性，30日齡，購于北京市德嶺鵪鶉養(yǎng)殖場，在湖南省藥物安全評價研究中心普通級環(huán)境飼養(yǎng)【SYXK（湘）2010-0008】，動物檢疫合格證：1100063965。

1.2 試藥及試劑

腺嘌呤（批號：71016588；Sigma公司產(chǎn)品）；尿酸檢測試劑盒（批號：108274，日本和光純藥工業(yè)株式會社產(chǎn)品）；CRE測定試劑盒（批號：901892，日本和光純藥工業(yè)株式會社產(chǎn)品）；BUN測定試劑盒（批號：909104，日本和光純藥工業(yè)株式會社產(chǎn)品）；TG測定試劑盒（批號：010568，日本和光純藥工業(yè)株式會社產(chǎn)品）；黃嘌呤氧化酶（批號：120305，美國RD公司產(chǎn)品）；脂蛋白脂酶（批號：111225，美國RD公司產(chǎn)品）；肝脂酶（批號：120224，美國RD公司產(chǎn)品）；腺苷脫氫酶（批號：120315，美國RD公司產(chǎn)品）。

1.3 儀器及器材

MR-96A酶標(biāo)儀（深圳邁瑞公司生產(chǎn)）；柯達(dá)72型X光機（柯達(dá)公司）；自動生化分析儀（日本日立公司生產(chǎn)）；RM2235型石蠟切片機、TP1020型全自動脫水機、HI1220型烤片機、HI1210型攤片機、EG1150H+C型組織包埋機、DFC 420C型病理成像系統(tǒng)（德國Leica公司生產(chǎn)）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±ss），評價時考慮統(tǒng)計學(xué)差異和生物學(xué)意義。

1.5 方法［2-4］

1.5.1 造模與分組

普通級迪法克鵪鶉30只，雄性，30日齡，體重164.2～210.4g，以上動物按血尿酸兼顧體重隨機分成2組，分別為空白對照組、模型對照組，每組15只，空白組給予標(biāo)準(zhǔn)鵪鶉飼料（玉米60％、麩皮15％、魚粉3％、豆粨15％）喂養(yǎng)，模型對照組給予高鈣鵪鶉飼料（玉米54％、麩皮2％、魚粉7％、豆粨30％）喂養(yǎng)，攝食約33g/只/日，自由飲水，連續(xù)喂養(yǎng)30d，然后模型對照組灌胃腺嘌呤混懸液（50mg/只），灌服體積1mL/只，每天1次，連續(xù)7d，連續(xù)觀察22d。分別于造模后第11、22天翅下靜脈采血測定尿酸值，末次采血后取材。

1.5.2 檢測指標(biāo)：

①血尿酸③采用影像學(xué)X光照射進(jìn)行攝片觀察骨趾軟組織變化。③第11天，第22天取血測定血尿酸。末次給藥采血測定肌酐（CRE）、尿素氮（BUN）、甘油三脂（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、總膽固醇（CHO）黃嘌呤氧化酶（XOD）、鳥脂蛋白脂酶（LPL）、鳥肝脂酶（HL）、腺苷脫氫酶（ADA）。

2 結(jié)果

2.1 鵪鶉高尿酸血癥模型血清尿酸、腎功能及相關(guān)脂代謝酶的影響

如表1～3所示，與正常對照組比較，模型對照組動物第11、22天血尿酸顯著升高（P＜0.01），模型對照組動物腎功能指標(biāo)CRE、BUN、TG、LDL、XOD均有顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），血清CHO、LPL、ADA、HDL含量顯著降低（P＜0.05）。

表1 鵪鶉高尿酸血癥模型血尿酸的含量Tab.1 Quail high uric acid hematic disease model of blood uric acid levels

表2 鵪鶉高尿酸血癥模型腎功能、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、膽固醇含量Tab.2 Quail high uric acid hematic disease model of kidney，triglyceride，low density lipoprotein cholesterol（HDL）content

表3 鵪鶉高尿酸血癥模型相關(guān)血脂代謝酶活性的影響Tab.3 The quail high uric acid hematic disease model related lipid metabolic enzyme activity

2.2 組織病理學(xué)

2.2.1 關(guān)節(jié)X攝片及組織病理學(xué)檢查

如彩插5圖1所示，造模型后，模型對照組動物足趾關(guān)節(jié)明顯腫大，X光攝片顯示模型對照組足趾骨頭部骨密度減低，邊緣可見小碎骨片，關(guān)節(jié)面破壞，第四趾末結(jié)趾骨呈溶骨性破壞，周圍軟組織腫脹。病理觀察可見模型對照組動物關(guān)節(jié)滑膜增生，有大量炎癥細(xì)胞浸潤，部分被纖維結(jié)締組織替代，軟骨細(xì)胞排列不規(guī)則，簇集、層次紊亂。

2.2.2 腎臟組織病理學(xué)檢查

如彩插5圖2所示，模型對照組腎臟組織腎小管及間質(zhì)可見尿酸鹽結(jié)晶，部分小管輕度擴(kuò)張，腎間質(zhì)纖維增生，并伴有大量炎癥細(xì)胞浸潤。

3 討論

目前痛風(fēng)的發(fā)病率日益增高，已成為當(dāng)今世界尤其是中老年的常見病。鵪鶉作為禽類與人的嘌呤核苷酸代謝途徑相似，建立高尿酸血癥模型具有明顯的優(yōu)勢。本研究采用灌胃給予腺嘌呤配合高脂飼料建立鵪鶉高尿酸血癥模型，采用X光和組織病理及血尿酸動態(tài)監(jiān)測模型，研究發(fā)現(xiàn)造模后動物關(guān)節(jié)明顯腫大，組織病理學(xué)檢查可見關(guān)節(jié)纖維結(jié)締組織增生及炎癥細(xì)胞浸潤，腎臟有不同程度的炎癥細(xì)胞浸潤，提示該種方法建立典型的通風(fēng)模型是成功的。腺嘌呤是一種含氮雜環(huán)嘌呤類化合物，給予大量腺嘌呤后，能干擾正常的嘌呤代謝致血尿酸升高，其代謝途徑與人類相近，造模型方法類似于人類過量高蛋白飲食導(dǎo)致嘌呤核苷酸代謝紊亂誘發(fā)的高尿酸血癥相符合［5］，XOD在嘌呤代謝中催化次黃嘌呤使之轉(zhuǎn)化為黃嘌呤，并催化黃嘌呤使之轉(zhuǎn)化為尿酸，調(diào)控尿酸生產(chǎn)的最終環(huán)節(jié)，是尿酸代謝過程中的關(guān)鍵酶，控制嘌呤核苷酸分解代謝的關(guān)鍵酶有腺苷脫氨酶（ADA）和XOD，ADA占優(yōu)勢地位［6］，ADA參與尿酸生成，可催化次黃嘌呤核苷酸和脫氧次黃嘌呤核苷的生成，再經(jīng)過嘌呤核苷磷酸化酶的作用生成次黃嘌呤，最終經(jīng)XOD作用生成尿酸［7］。模型組動物ADA活性呈現(xiàn)較低水平，肝脂酶（HL）在肝細(xì)胞中合成，肝脂酶與脂蛋白脂酶（LPL）是清除血漿脂蛋白中所含TG的限速酶，主要催化血漿乳糜微粒和極低密度脂蛋白中的甘油三酯和磷脂水解，HL缺乏可使血漿膽固醇和TG升高，能使乳糜微粒和VLDL、低密度脂蛋白中的甘油三脂分解減少，進(jìn)入肝細(xì)胞內(nèi)的乳糜微粒和LDL中的甘油三脂和脂肪酸含量增加，肝細(xì)胞內(nèi)甘油三脂合成增加，導(dǎo)致甘油三脂在肝細(xì)胞內(nèi)堆積［8-10］。綜上所述，本研究建立鵪鶉高尿酸癥模型有關(guān)節(jié)腫大、腎臟尿酸鹽沉積等腎臟損傷，且伴有脂代謝紊亂，與臨床發(fā)病癥狀類似，對研究抗痛風(fēng)藥物提供了穩(wěn)定的動物模型。

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Lipid metabolism study quail high uric acid hematic disease animal model

MA Li1，ZENG Gui-rong1，2，ZHANG Miao-hong1，DENG Qing1，ZHANG Dan1，PAN Shan-qing1，JIANG De-jian1，WANG Xiao-qing1
（1.Hunan Center for Drug Safety Evaluation，Changsha 410331，China；2.Institute of Medicinal Plant Beijing Union Medical College，Beijing 100193，China）

ObjectiveTo study quail high uric acid hematic disease animal model and lipid metabolism.MethodsQuail were used high fat feed after thirty days，gastric gavage adenine（50mg/only）seven days in a row.Quail high uric acid hematic disease animal model was set up.Observed in twenty-two days，blood was tested blood uric acid，xanthine oxidase，creatinine（CRE），urea nitrogen（BUN），triglycerides（TG），low density lipoprotein cholesterol（LDL-c），hight densitry lipoproteon（HDL），xanthine oxidase（XOD），hepatic lipase（HL），lipoprotein lipase（LPL），adenosine dehydrogenase（ADA）lipid metabolism index，joints and kidneys for histopathological examination.ResultsModel control group animals blood uric acid were significantly increased（P＜0.01），CRE，BUN，TG，LDL and XOD were significantly increased（P＜0.05or P＜0.01），serum CHO、LPL、ADA、HDL content significantly decreased（P＜0.05）.Animal toes jointed obvious swollen after building，surrounding soft tissue swelling.X-ray showed toes bone density decrease，part of the joint surface damage is dissolved bony destruction.Pathological examination showed joint synovial hyperplasia，therewas a lot of inflammatory cells infiltration，part is replaced by fibrous connective tissue，Kidney tissue renal tubule and interstitial visibled urate crystals，part of the tubular mild expansion，renal interstitial fibers hyperplasia，accompanied by a large number of inflammatory cells infiltration.ConclusionThe model has swollen joints，kidney urate deposition kidney injury associated with lipid metabolism disorders，pathological mechanisms and XOD increased ADA.

Quail；Hyperuricemia；Lipid metabolism

R-332

A

1671-7856（2015）11-0017-04

10.3969.j.issn.1671-7856.2015.11.005

科技部新藥創(chuàng)制重大科技專項（2011ZX09401-301-1）.

馬麗（1983-），女，碩士，主要從事新藥安全性評價研究。E-mail：muwukuhe@126.com。

王小青，女，碩士，助理研究員，主要從事新藥安全性評價研究。

﹞2015-10-21