王琳　王雪　宋云飛

摘 要：目的 建立檢測(cè)肉類食品安全的快速檢測(cè)方法。方法 使用快速檢測(cè)試紙檢測(cè)肉類摻假，以及肉類中殘留的鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺與沙丁胺醇。結(jié)果 使用豬肉檢測(cè)快速檢測(cè)試紙，檢測(cè)羊肉中摻加的豬肉，摻加豬肉的比例為0.75%～25%，可以檢出。使用膠體金檢測(cè)儀結(jié)合快速檢測(cè)試紙，檢測(cè)肉類中添加的鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺與沙丁胺醇，鹽酸克倫特羅的平均添加回收率在110%左右，萊克多巴胺的平均添加回收率為90%～120%，沙丁胺醇的平均添加回收率在110%左右。結(jié)論 快速檢測(cè)試紙適合對(duì)肉類食品安全進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速篩查。

關(guān)鍵詞：快速檢測(cè)試紙 肉類摻假 鹽酸克倫特羅 萊克多巴胺 沙丁胺醇

中圖分類號(hào)：TS201.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2015）11（c）-0209-04

肉類是人們重要的食物來(lái)源，肉類食品安全是食品安全中的重點(diǎn)之一。目前，有些商販在高價(jià)肉類中摻入低價(jià)肉類，以降低成本，這樣很容易引發(fā)食品安全問(wèn)題，甚至可能引發(fā)宗教問(wèn)題與民族矛盾。另一方面，肉類中殘留的β-興奮劑類藥物（包括克倫特羅，萊克多巴胺、沙丁胺醇等）則會(huì)危害人類健康。因此，建立一種快速準(zhǔn)確的檢測(cè)肉類食品安全的檢測(cè)方法，用于檢測(cè)肉類摻假，以及肉類中殘留的β-興奮劑類藥物，具有重要意義。

檢測(cè)肉類摻假的方法，有色譜法[1]、電泳法[2]、聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增法（PCR）[3]、酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）[4]等。檢測(cè)β-興奮劑類藥物的方法有高效液相色譜法[5，6]、酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）[7，8]、膠體金免疫層析法[9]等。其中，色譜法與電泳法的操作較繁瑣，對(duì)操作人員的要求較高，PCR與ELISA的方法反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)。該研究使用膠體金檢測(cè)儀結(jié)合快速檢測(cè)試紙的方法，不僅檢測(cè)時(shí)間短，而且能夠進(jìn)行定量檢測(cè)，適合對(duì)肉類食品安全進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)或篩查。

1 材料與設(shè)備

1.1 試劑與材料

豬肉檢測(cè)快速檢測(cè)試紙，鹽酸克倫特羅快速檢測(cè)試紙，萊克多巴胺快速檢測(cè)試紙，沙丁胺醇快速檢測(cè)試紙，均來(lái)自北京普析通用儀器有限責(zé)任公司，其他化學(xué)試劑購(gòu)于西隴化工股份有限公司。

1.2 設(shè)備

膠體金檢測(cè)儀（型號(hào)：TR3）來(lái)自北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

2 方法

2.1 肉類摻假檢測(cè)

前處理步驟：（1）將待測(cè)樣品均質(zhì)，稱?。?.5±0.01）g均質(zhì)后的樣品；（2）加入3 mL的去離子水（水溫為（50±5）℃），劇烈振蕩30 s；（3）靜置待其自然沉淀，處理后的樣品恢復(fù)至室溫后，取上清液進(jìn)行檢測(cè)。

檢測(cè)步驟：（1）將試紙條水平放置，在試紙條加樣處加入100 μL待檢測(cè)溶液；（2）靜置10 min后觀察檢測(cè)結(jié)果；（3）結(jié)果判斷：C線顯示紅色色帶，T線不顯示紅色色帶，判為陰性。C線顯示紅色色帶，T線顯示紅色色帶，無(wú)論深淺，判為陽(yáng)性。C線不顯示紅色色帶，無(wú)論T線是否顯示紅色色帶，該試紙均判為無(wú)效。

在羊肉中摻加不同比例的豬肉，按照上述步驟進(jìn)行前處理與檢測(cè)，記錄檢測(cè)結(jié)果。

2.2 豬肉中殘留的鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇檢測(cè)

前處理步驟：（1）取4 g勻漿去脂肪肉樣（肉泥/去脂肪）于50 mL離心管中，加0.5 mL稀釋液，蓋緊管蓋；（2）將裝有樣品的離心管放入80 ℃水中水浴5 min，冷卻至室溫，盡量取出管中液體移至于干凈離心管中；（3）4000 r/min離心1 min，取去掉脂肪層的上清液進(jìn)行檢測(cè)。

檢測(cè)步驟：（1）使用待測(cè)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品，配制一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，取出檢測(cè)卡，開(kāi)封后平放于桌面，將標(biāo)準(zhǔn)品溶液加100 μL于樣品孔中。加樣后5 min，使用膠體金檢測(cè)儀讀數(shù)。將標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度與T/C（T線深淺和C線深淺的比值），對(duì)應(yīng)輸入至膠體金檢測(cè)儀建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；（2）取出檢測(cè)卡，開(kāi)封后平放于桌面，將離心管中的上清液加100 μL于樣品孔中。加樣后5 min，使用膠體金檢測(cè)儀讀數(shù)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出濃度值。

在豬肉中添加一定濃度的鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇，按照上述步驟進(jìn)行前處理與檢測(cè)，每個(gè)樣品重復(fù)檢測(cè)5次，計(jì)算添加回收率與平均值。添加回收率的計(jì)算方法：添加回收率 = （樣品檢測(cè)濃度空白樣品檢測(cè)濃度）/ 添加濃度×100%。

3 結(jié)果

3.1 肉類摻假

羊肉中摻加豬肉的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1，由圖1可見(jiàn)，在羊肉中摻加0.75%～25%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）的豬肉，可以觀察到T線。摻加豬肉的比例越高，T線顏色越深。說(shuō)明該快速檢測(cè)試紙條可以用于檢測(cè)羊肉中摻加豬肉，而且較靈敏。

3.2 豬肉中殘留的鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇

圖2為鹽酸克倫特羅的標(biāo)準(zhǔn)曲線，在圖2中，標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度分別為：0，0.61，1.25，2.5，5.0 ng/mL。

圖3為萊克多巴胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線，在圖3中，標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度分別為：0，1.0，1.5，2.5，5.0 ng/mL。

圖4為沙丁胺醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線，在圖4中，標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度分別為：0，0.2，0.6，1.8，3.0 ng/mL。

豬肉中鹽酸克倫特羅，萊克多巴胺，沙丁胺醇的添加回收率見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，鹽酸克倫特羅的平均添加回收率在110%左右，萊克多巴胺的平均添加回收率為90%～120%，沙丁胺醇的平均添加回收率在110%左右。

3.3 膠體金檢測(cè)儀與目測(cè)結(jié)果比較

圖5為豬肉中添加沙丁胺醇的檢測(cè)結(jié)果，可見(jiàn)，豬肉中添加沙丁胺醇的濃度為3 μg/kg，目測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。由表1可見(jiàn)，豬肉中添加沙丁胺醇的濃度為0.2 μg/kg，膠體金檢測(cè)儀結(jié)果為陽(yáng)性。所以，膠體金檢測(cè)儀與目測(cè)相比，檢測(cè)靈敏度更高。

4 討論

該研究使用快速檢測(cè)試紙檢測(cè)羊肉中摻加的豬肉，摻加豬肉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)低至0.75%時(shí)，可以被檢出。該方法靈敏度較高，而且檢測(cè)時(shí)間較短，只需要20 min就能夠完成樣品處理與檢測(cè)的全過(guò)程，適合用于現(xiàn)場(chǎng)快速篩查。并且，該研究使用膠體金檢測(cè)儀與快速檢測(cè)試紙相結(jié)合的方法，檢測(cè)豬肉中添加的鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇，與傳統(tǒng)的膠體金免疫層析法相比，靈敏度更高，適合用于現(xiàn)場(chǎng)快速篩查。

該研究為研究肉類摻假的基因檢測(cè)試紙與基因芯片奠定了基礎(chǔ)?；驒z測(cè)試紙的檢測(cè)原理為，首先提取待檢樣本的核酸，經(jīng)過(guò)核酸擴(kuò)增反應(yīng)，核酸雜交技術(shù)，以及膠體金免疫層析檢測(cè)技術(shù)，可以快速地實(shí)現(xiàn)對(duì)肉類基因的定性檢測(cè)。因?yàn)楹怂岬臒岱€(wěn)定性和酸堿穩(wěn)定性與蛋白質(zhì)相比更優(yōu)，所以，以動(dòng)物種屬間遺傳信息的差異作為物種鑒別的檢測(cè)靶點(diǎn)，具有特異性高，方法便捷，不受組織類別限制等諸多優(yōu)勢(shì)，已經(jīng)成為食品中肉類成分鑒別的重要方法。

基因芯片的技術(shù)原理為：核酸分子原位雜交技術(shù)，將特別設(shè)計(jì)的核酸片段作為分子探針，固定在芯片基底上，樣品經(jīng)過(guò)處理，核酸聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR擴(kuò)增），或體外轉(zhuǎn)錄后，與芯片上固定的分子探針?lè)磻?yīng)，樣品中基因序列與探針互補(bǔ)的核酸分子就會(huì)與探針雜交，形成雙鏈結(jié)構(gòu)，通過(guò)一系列檢測(cè)手段，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)樣品基因的大規(guī)模檢測(cè)[10]。基因芯片在醫(yī)療診斷[11]、病原微生物檢測(cè)[12]、農(nóng)業(yè)研究[13]、食品安全檢測(cè)[14]、轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物檢測(cè)[15]等領(lǐng)域都具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

該研究的下一步計(jì)劃，是研究用于檢測(cè)肉類摻假的基因芯片。首先，針對(duì)待測(cè)目標(biāo)的特異性核酸片段設(shè)計(jì)引物探針，用于PCR擴(kuò)增；其次，在基因芯片的PCR區(qū)實(shí)現(xiàn)PCR擴(kuò)增；并且，在基因芯片的檢測(cè)區(qū)固定捕獲探針，用于檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物?；蛐酒哂懈咄?，集成化的特點(diǎn)，可以同時(shí)鑒別多種肉類的來(lái)源，在肉類鑒別與肉類摻假檢測(cè)方面可以發(fā)揮重要作用。

5 結(jié)語(yǔ)

該研究使用快速檢測(cè)試紙檢測(cè)肉類摻假，操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)時(shí)間短，適合對(duì)涉及肉類摻假的食品進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)或篩查。并且為研究肉類摻假的基因檢測(cè)試紙與基因芯片奠定了基礎(chǔ)。該研究使用膠體金檢測(cè)儀結(jié)合快速檢測(cè)試紙的方法，不僅檢測(cè)時(shí)間短，而且能夠進(jìn)行定量檢測(cè)，提高了結(jié)果的靈敏度與準(zhǔn)確性，適合對(duì)肉類食品中殘留的克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)或篩查。

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