王圣偉 胥保華 王紅芳（山東農業(yè)大學動物科技學院，泰安271018）

意大利蜜蜂工蜂幼蟲飼糧中亞油酸的適宜添加水平

王圣偉 胥保華 王紅芳?
（山東農業(yè)大學動物科技學院，泰安271018）

摘 要:本試驗旨在研究意大利蜜蜂工蜂幼蟲飼糧中亞油酸的適宜添加水平。選取576只1日齡的工蜂幼蟲，隨機分為6組，每組96只幼蟲，對照飼喂基礎飼糧，試驗組分別飼喂添加0.02%、0.04%、0.06%、0.08%和0.10%亞油酸的飼糧，試驗期7 d。結果表明:1）與對照組相比，飼糧添加0.10%亞油酸顯著降低了化蛹率（P＜0.05）。2）與對照組相比，飼糧添加0.04%亞油酸顯著提高了5日齡蟲體蛋白質濃度（P＜0.05）；飼糧中添加0.10%亞油酸顯著降低了7日齡蛹蛋白質濃度（P＜0.05）。3）與對照組相比，飼糧添加0.02%亞油酸對6日齡蟲體的過氧化物酶增殖物激活受體（PPAR）α活性有顯著的抑制作用（P＜0.05），添加0.08%的亞油酸則顯著提高了6日齡蟲體PPARα和PPARγ活性。4）與對照組相比，飼糧添加0.04%和0.08%亞油酸顯著提高了6日齡蟲體脂肪酸合成酶（FAS）活性（P＜0.05）；添加0.08%亞油酸顯著提高了5日齡蟲體乙酰輔酶A羧化酶（ACC）濃度（P＜0.05），添加0.06%和0.10%亞油酸顯著提高了6日齡蟲體ACC濃度（P＜0.05）。5）飼料中添加本試驗設定范圍的亞油酸對幼蟲FAS和ACC基因相對表達量無顯著影響（P＞0.05）。綜合化蛹率和蟲體蛋白質濃度2個指標的擬合曲線結果，認為意大利蜜蜂工蜂幼蟲飼糧中亞油酸的適宜添加水平為0.024%～0.037%。

關鍵詞:亞油酸；意大利蜜蜂；適宜添加水平；化蛹率；蛋白濃度；脂肪代謝

亞油酸是動物體內最重要的必需脂肪酸之一，研究發(fā)現(xiàn)亞油酸不僅可以為蜜蜂提供能量，而且會直接影響其生長和繁殖［1］。微生物是使昆蟲致病的主要因素，脂肪酸具有抑制細菌和真菌活性的作用，癸酸、月桂酸（十二烷酸）、肉豆蔻酸、亞油酸、亞麻酸等一系列脂肪酸都具有抗微生物作用［2］。另外，有研究認為蜜蜂腸道中高濃度的亞油酸和亞麻酸對蜜蜂抵抗細菌、真菌感染具有重要作用［3－4］。Manning等［5］研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中脂肪酸的含量和昆蟲的壽命有緊密的聯(lián)系，飼糧中脂肪酸含量過高或過低都會降低蜜蜂的壽命，當飼糧中亞油酸含量高于6%或者油酸含量高于2%時，蜜蜂的壽命會顯著縮短，而當飼糧中缺乏脂肪酸時，蜜蜂的壽命也會降低。飼糧中的多不飽和脂肪酸（PUFA）對脂肪酸的生化合成和氧化有獨特的調控作用，PUFA對基因表達的調控至少存在2種機制:1）過氧化物酶增殖物激活受體（PPARs）依賴機制，如誘導編碼乙?；o酶A氧化酶（AOX）的基因表達；2）PPARs非依賴機制［6］。PPARs是調節(jié)目標基因表達的核內受體轉錄因子超家族成員［7］，其存在幾種不同的亞型，分別為PPARα、PPARβ及PPARγ1和PPARγ2，由3種獨立的基因編碼3種不同的PPARs（PPARα、PPARβ、PPARγ）。PPARs是類固醇受體族中的一員，與族中其他受體一樣，具有1個DNA結合域和1個配體結合域。配體結合域是與脂肪酸等配體結合的部分，配體與受體的這種結合可活化受體（即PPARs）；DNA結合域是與基因上的DNA與特異反應元件相結合的部分，通過這種特異性結合調節(jié)基因轉錄［8］。近年來研究發(fā)現(xiàn)脂肪酸可以調控一些編碼代謝關鍵酶的基因表達，對脂肪酸的生化合成和氧化起獨特的調控作用。李琪玲等［9］研究發(fā)現(xiàn)，連續(xù)給予小鼠灌胃共軛亞油酸（CLA）4周，發(fā)現(xiàn)飼喂CLA的小鼠肝臟中脂肪酸合成酶（FAS）含量顯著降低；Zhou等［10］、Pariza等［11］也發(fā)現(xiàn)，CLA能抑制豬皮下脂肪FAS的表達，進而降低皮下脂肪沉積，但CLA對肌內脂肪FAS的表達卻起到了促進作用，增加了肌內脂肪的沉積。另外，脂肪酸不僅對FAS的表達有影響，同時也可以調節(jié)乙酰輔酶A羧化酶（ACC）的轉錄，Iritani等［12］在培養(yǎng)的肝細胞中添加紫蘇籽油（富含PUFA），ACC mRNA的豐度顯著降低。這充分說明了脂肪酸不僅是供能物質和生物膜的重要組成部分，而且可通過調節(jié)脂肪代謝相關基因表達而發(fā)揮重要的生理功能。但關于亞油酸對蜜蜂幼蟲生長發(fā)育與脂肪代謝影響的研究鮮有報道，而且在人工飼養(yǎng)條件下，目前國內外對于亞油酸在蜜蜂飼糧中的適宜添加水平還沒有明確的參考標準。本文擬通過體外幼蟲培養(yǎng)試驗，研究飼糧中亞油酸添加水平對意大利蜜蜂工蜂幼蟲化蛹時體重、化蛹率、蟲體蛋白質濃度、幼蟲FAS活性、ACC濃度及其基因表達的影響，以期確定適合工蜂幼蟲生長發(fā)育的最適亞油酸添加水平，同時為亞油酸對蜜蜂乃至昆蟲脂類代謝作用機制的深入研究提供參考。

1　材料與方法

1.1 試驗飼糧

在基礎飼糧中分別添加0（對照組）、0.02%、0.04%、0.06%、0.08%和0.10%的亞油酸，制成6種試驗飼糧。試驗飼糧的組成見表1。

表1　試驗飼糧組成Table 1 Composition of experimental diets　%

1.2 試驗動物分組與飼養(yǎng)管理

試驗分2批飼養(yǎng)，每一批都選取576只1日齡意大利蜜蜂工蜂幼蟲，隨機分為6組，每組96只。第1批用于蛋白質濃度、酶活性和基因表達量的測定，第2批用來測定幼蟲化蛹時體重和化蛹率。將幼蟲置于48孔細胞培養(yǎng)板中飼養(yǎng)，培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中（35℃、相對濕度90%），試驗期間每天飼喂1次，每孔每次飼喂150 μL。幼蟲生長發(fā)育過程見圖1。

1.3 樣品采集與制備

飼養(yǎng)至5～7日齡時采集樣品，每天從每組中隨機抽取6只蜜蜂幼蟲。稱重后，－80℃保存用于后續(xù)指標檢測。

1.4 測定指標和方法

1.4.1 化蛹時體重的測定

把幼蟲轉移至化蛹板時，用電子天平稱重并記錄數(shù)據(jù)。

1.4.2 化蛹率的測定

從飼養(yǎng)第1天開始，每天觀察記錄幼蟲的死亡情況，將死亡個體移除，直至未死亡幼蟲全部化蛹，記錄化蛹個數(shù)。

化蛹率（%）＝100×化蛹個數(shù)/幼蟲總數(shù)。

圖1　幼蟲生長發(fā)育過程Fig.1 Larval growth and development process

1.4.3 蛋白質濃度的測定

取幼蟲加入適量生理鹽水，制成1%組織勻漿，采用A045?2總蛋白定量測試盒（南京建成生物工程研究所生產）測定蛋白質濃度。

1.4.4 PPARs和脂肪代謝相關酶活性的測定

每測定1種酶活性，取10%組織勻漿10 μL，采用蜜蜂酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測試劑盒（北京雅安達生物技術有限公司生產）測定。

1.4.5 脂肪代謝相關基因表達量的測定

采用Trizol法提取總RNA，并用微量分光光度計檢測所提RNA的濃度和純度。用Prime?ScriptTMRT Reagent Kit（TaKaRa:DRR037A）將RNA反轉錄成cDNA。委托上海生工生物工程公司設計并合成RT?PCR引物。采用SYBR Premix Ex TaqTM試劑盒（TaKaPa:DRR420A）進行目的基因的相對定量檢測，反應體系為20 μL。反應條件為:95℃預變性10 s，循環(huán)數(shù)為1；95℃變性5 s，60℃退火40 s，循環(huán)數(shù)為40，添加熔解曲線，循環(huán)數(shù)為1。

表2　RT?PCR引物序列Table 2 Primer sequences for RT?PCR

1.5 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計均采用SAS 9.1統(tǒng)計軟件的ANO?VA程序進行單因素方差分析，以Duncan氏法進行多重比較，試驗數(shù)據(jù)以平均值±標準差的形式表示，通過回歸分析對劑量－效應關系作二次曲線擬合，根據(jù)二次方程計算最適添加水平。P＜0.05代表差異顯著。

2　結果與分析

2.1 飼糧亞油酸添加水平對意大利蜜蜂工蜂幼蟲化蛹時體重和化蛹率的影響

結果（表3）顯示，飼糧亞油酸添加水平對工蜂幼蟲化蛹時的體重無顯著影響（P＞0.05），但對化蛹率有顯著影響（P＜0.05），其中飼糧亞油酸添加水平為0.10%時，較其他添加水平顯著降低了化蛹率（P＜0.05）。將化蛹率（Y）與飼糧亞油酸添加水平（X）進行曲線擬合，得到曲線方程:Y＝－9 936.7X2＋479.67X＋91.969（R2＝0.895 2），由方程得出，當亞油酸添加水平為0.024%時化蛹率最高。

2.2 飼糧亞油酸添加水平對意大利蜜蜂工蜂幼蟲蟲體蛋白質濃度的影響

飼糧亞油酸添加水平對幼蟲蟲體蛋白質濃度的影響如表4所示。對于5日齡幼蟲，亞油酸添加水平為0.04%時，蟲體蛋白質濃度顯著高于對照組（P＜0.05），其他組與對照組無顯著差異（P＞0.05）；飼糧亞油酸添加水平對7日齡蛹體蛋白質濃度有顯著影響（P＜0.05），隨飼糧亞油酸添加水平的增加，7日齡蛹體蛋白質濃度呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，但是亞油酸添加水平為0.02%～0.08%時，與對照組相比差異不顯著（P＞0.05），僅亞油酸添加水平為0.10%時顯著抑制了蟲體蛋白質的沉積（P＜0.05）。將蟲體蛋白質濃度（Y）與飼糧亞油酸添加水平（X）進行曲線擬合，得到如下曲線方程:Y＝－29.381X2＋2.148X＋0.416 1（R2＝0.884 3），由方程可知，當亞油酸添加水平為0.037%時蟲體蛋白質濃度最高。

表3　飼糧亞油酸添加水平對幼蟲化蛹時體重和化蛹率的影響Table 3 Effects of linoleic acid supplemental level on body weight when pupation and the percentage of pupation of larvae

表4　飼糧亞油酸添加水平對幼蟲蟲體蛋白質濃度的影響Table 4 Effects of linoleic acid supplemental level on body protein concentration of larvae

2.3 飼糧亞油酸添加水平對意大利蜜蜂工蜂幼蟲脂肪代謝的影響

2.3.1 飼糧亞油酸添加水平對幼蟲PPARs活性的影響

由表5可以看出，飼糧亞油酸添加水平對6日齡幼蟲PPARα活性有顯著影響（P＜0.05）。0.02%組PPARα活性較對照組顯著降低（P＜0.05），0.04%和0.08%組PPARα活性較對照組顯著升高（P＜0.05），0.06%和0.10%組與對照組差異不顯著（P＞0.05），但有升高的趨勢。與對照組相比，僅0.08%組PPARγ的活性顯著提高（P＜0.05）。

2.3.2 飼糧亞油酸添加水平對幼蟲脂肪代謝相關酶活性的影響

如表6所示，飼糧亞油酸添加水平對5日齡幼蟲和7日齡蛹的FAS活性無顯著影響（P＞0.05），僅顯著影響了6日齡幼蟲的FAS活性（P＜0.05）。隨飼糧亞油酸添加水平的增加，6日齡幼蟲FAS活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，其中0.04%、0.06%、0.08%組的FAS活性顯著高于對照組（P＜0.05），F(xiàn)AS活性的峰值出現(xiàn)在亞油酸添加水平為0.08%時，當添加水平繼續(xù)增加至0.10%時，F(xiàn)AS活性又降低到與對照組相近的基礎水平。

表5　飼糧亞油酸水平對幼蟲PPARs活性的影響Table 5 Effects of linoleic acid supplemental level on PPARs activities of larvae　U/L

表6　飼糧亞油酸添加水平對幼蟲FAS活性的影響Table 6 Effects of linoleic acid supplemental level on FAS activity of larvae　U/mL

由表7可以看出，飼糧亞油酸添加水平僅對5 和6日齡幼蟲ACC濃度有顯著影響（P＜0.05），對7日齡蛹的ACC濃度無顯著影響（P＞0.05）。與對照組相比，0.06%和0.08%的亞油酸能顯著提高5日齡幼蟲的ACC濃度（P＜0.05），但是僅0.08%的亞油酸提高了6日齡幼蟲的ACC濃度（P＜0.05）。

表7　飼糧亞油酸添加水平對幼蟲ACC濃度的影響Table 7 Effects of linoleic acid supplemental level on ACC concentration of larvae　ng/mL

2.3.3 飼糧亞油酸添加水平對脂肪代謝相關基因相對表達量的影響

由圖2可以看出，飼糧亞油酸添加水平對5、7日齡幼蟲FAS基因相對表達量的影響不顯著（P＞0.05）。

圖2　飼糧亞油酸添加水平對意蜂幼蟲FAS基因相對表達量的影響Fig.2 Effects of linoleic acid supplemental level on FAS gene relative expression level of larvae

飼糧亞油酸添加水平對5日齡幼蟲ACC基因相對表達量的影響不顯著（P＞0.05）（圖3），對7日齡幼蟲來說，與對照組相比，0.02%組ACC基因相對表達量有上升的趨勢，0.04%和0.10%組有下降的趨勢，且0.02%組ACC基因相對表達量顯著高于0.04%和0.10%組。

3　討 論

3.1 飼糧亞油酸添加水平對意大利蜜蜂工蜂幼蟲化蛹時體重和化蛹率的影響

本試驗結果表明，飼糧添加不同水平的亞油酸對意蜂幼蟲化蛹時體重無顯著影響。目前關于亞油酸對昆蟲生長性能影響的研究極少，但在畜禽上研究較多。以畜禽為例，李榮剛等［13］研究表明飼糧添加亞油酸對斷奶至2月齡肉兔平均日增重無顯著影響。Uwayjan等［14］通過飼喂不同日齡蛋雞富含亞油酸的飼糧，同樣發(fā)現(xiàn)其對生長性能無顯著影響。本試驗在意大利蜜蜂工蜂幼蟲上的研究結果與上述報道相似，發(fā)現(xiàn)飼糧添加亞油酸并未顯著改變工蜂幼蟲化蛹時的體重。然而，王菊花等［15］研究表明，當飼糧中CLA的添加量為1.0%和2.0%時，可以顯著提高斷奶仔豬的日增重和飼料利用率。在家禽方面，劉光芒等［16］研究發(fā)現(xiàn)，添加低水平的CLA可以提高肉鴨生產性能，但添加水平過高則會降低平均日增重。由此可見，亞油酸對畜禽乃至蜜蜂體增重的影響仍存在爭議，這可能與添加的亞油酸的劑量、種類，研究的物種，物種所處的生理階段以及飼養(yǎng)管理等因素有關。

圖3　飼糧亞油酸添加水平對幼蟲ACC基因相對表達量的影響Fig.3 Effects of linoleic acid supplemental level on ACC gene relative expression level of larvae

對化蛹率的統(tǒng)計結果顯示，當亞油酸添加水平為0.10%時，幼蟲化蛹率顯著下降，其他組無顯著差異。分析可能是因為PUFA結構中的不飽和雙鍵會發(fā)生過氧化反應，產生自由基，細胞自由基過多會使細胞功能減弱，導致幼蟲無法進入蛹期。由此可見，工蜂幼蟲飼糧中亞油酸的水平應該處于一個合理范圍內，并非多多益善。

3.2 飼糧亞油酸添加水平對意大利蜜蜂工蜂幼蟲蟲體蛋白質濃度的影響

本試驗結果顯示，飼糧亞油酸添加水平亞油酸對5、6日齡幼蟲蟲體蛋白質濃度無顯著影響，而對7日齡幼蟲蟲體蛋白質濃度有影響顯著，亞油酸添加水平適中時，蟲體蛋白質濃度最高，添加水平過高則會降低蟲體蛋白質濃度。付世建等［17］通過飼喂南方鲇不同蛋白質脂肪比的飼料，發(fā)現(xiàn)提高飼料中脂肪含量將有助于提高蛋白質的利用效率，具有節(jié)約蛋白質的效果。以上研究的結果與本試驗在工蜂幼蟲上的結果相吻合，即低水平亞油酸可以提高機體蛋白質濃度，這可能是因為脂肪和蛋白質之間可以相互轉化，而亞油酸水平偏高時會對幼蟲的生理機能產生負面影響，這可能在一定程度上影響了蛋白質的代謝，所以高水平亞油酸反而降低了蟲體蛋白質濃度。

3.3 飼糧亞油酸添加水平對意大利蜜蜂工蜂幼蟲脂肪代謝的影響

3.3.1 飼糧亞油酸添加水平對幼蟲PPARs活性的影響

盡管3種PPARs亞型的氨基酸序列相似，但研究表明PPARα和PPARγ分別在脂質代謝和儲存中具有不同的功能［18］。PPARα主要在肝臟中表達，在饑餓狀態(tài)下活化，通過調節(jié)涉及脂肪酸動員、活化和降解過程中的多種基因來提供能量，并起到降低血脂的作用［19－22］。PPARγ主要存在于脂肪組織，在生理狀態(tài)下，PPARγ主要在進食后激活，促進脂肪在脂肪組織聚集［23－24］。

本試驗結果顯示，蟲體的PPARs活性受飼糧亞油酸添加水平的影響，當亞油酸添加水平升高到0.08%時，蟲體PPARα和PPARγ活性均顯著高于對照組，整體上呈現(xiàn)上升的趨勢。有研究證明，脂肪酸及其衍生物可以作為配體有效激活PPARs［25－26］。趙占宇［27］通過在大黃魚基礎飼糧中添加0、1%、2%和4%的CLA，發(fā)現(xiàn)CLA（0.4 g/kg BW）能夠顯著提高大黃魚肝臟中PRARα和PPARγ基因的表達量。另外，馬宏峰［28］也發(fā)現(xiàn)亞油酸可以促進高脂小鼠PPARγ mRNA的表達。本試驗在意大利蜜蜂工蜂幼蟲上的研究結果與前人在其他動物上的研究結果基本一致，說明適宜添加水平的亞油酸對工蜂幼蟲PPARs同樣具有激活作用。

3.3.2 飼糧亞油酸添加水平對幼蟲脂肪代謝相關酶活性的影響

脂肪酸的飽和程度不同，對脂肪代謝相關酶的影響也不一樣，影響強弱順序從大到小依次是PUFA、單不飽和脂肪酸和飽和脂肪酸。本試驗研究了飼糧亞油酸添加水平對意大利蜜蜂幼蟲蟲體FAS活性和ACC濃度的影響，結果顯示亞油酸在低水平范圍顯著提高了FAS活性和ACC濃度，亞油酸添加水平過高時則會降低FAS的活性。FAS是催化乙酰輔酶A和丙二酸單酰輔酶A合成脂肪酸的酶類，ACC是催化脂肪合成的限速酶，其濃度的高低直接影響脂肪沉積量，它們均在脂肪代謝方面發(fā)揮重要作用［29］。

Mersmann等［30］在成年豬飼糧中添加脂肪酸，降低了脂肪酸合成的速度以及FAS和ACC的活性。Toussant等［31］分別用無脂肪、含紅花油（主要為PUFA）和含牛脂（主要為飽和脂肪酸）的飼糧喂大鼠，發(fā)現(xiàn)飼喂含紅花油飼糧的大鼠肝臟FAS 和ACC的活性顯著低于飼喂含牛脂飼糧和無脂肪飼糧的大鼠。

以上這些報道都認為PUFA對脂肪代謝相關酶有抑制作用，這與本試驗結果略有差異，猜測可能是由于脂肪酸種類、添加量，測定的組織部位和不同物種生理代謝的差異造成的。

3.3.3 飼糧亞油酸添加水平對幼蟲脂肪代謝相關基因相對表達量的影響

本試驗中，飼糧亞油酸添加水平對FAS和ACC基因的相對表達量均無顯著影響。一些試驗已證明:受PUFA抑制的生脂酶包括FAS、ACC、葡萄糖－6－磷酸脫氫酶（G6PD）、L－丙酮酸激酶和S14蛋白［32］。Blake等［33］通過飼喂大鼠PUFA（魚油）和飽和脂肪酸，發(fā)現(xiàn)飼喂PUFA的大鼠肝臟中FAS mRNA豐度是飼喂飽和脂肪酸的6%，這說明了飼糧PUFA是FAS mRNA表達的強抑制劑。Clarke等［34］研究發(fā)現(xiàn)飼糧中的PUFA可使大鼠肝臟中的FAS mRNA水平降低了75%～90%。韓立強等［35］研究了CLA對小鼠乳腺脂肪合成相關基因表達的影響，發(fā)現(xiàn)1.5%CLA組（1.5%CLA＋0.5%花生油）與對照組（2%花生油）相比，母鼠乳腺組織的FAS和ACC的mRNA表達量顯著降低。但是李榮剛［36］研究認為飼糧亞油酸水平對斷奶至3月齡生長肉兔的肝臟ACC mRNA表達量影響不顯著，這與本試驗結果一致。

4　結 論

綜合化蛹率和蟲體蛋白質濃度2個指標并做擬合曲線得出，在人工飼養(yǎng)條件下，意大利蜜蜂工蜂幼蟲飼糧中亞油酸的適宜添加水平為0.024%～0.037%。

參考文獻:

［1］ NATION J.Insect physiology and biochemistry［M］.Florida:CRC Press，2002.

［2］ ST LEGER R J，JOSHI L，BIDOCHKA M J，et al.Protein synthesis in Metarhizium anisopliae growing on host cuticle［J］.Mycological Research，1995，99 （9）:1034－1040.

［3］ MANNING R.Fatty acids in pollen:a review of their importance for honey bees［J］.Bee World，2001，82 （2）:60－75.

［4］ PANDEY D K，TRIPATHI R N，TRIPATHI R D，et al.Fungi toxicology in pollen grains［J］.Grana，1983，22（1）:31－33.

［5］ MANNING R，RUTKAY A，EATON L，et al.Lipid?enhanced pollen lipid?reduced flour diets and their effect on the longevity of honey bees（Apis mellifera L.）［J］.Australian Journal of Entomology，2007，46 （3）:251－257.

［6］ NAKAMURA M T，CHO H P，CLARKE S D.Regu?lation of hepatic delta26 desaturase expression and its role in the polyunsaturated fatty acid inhibition of fatty acid synthase gene expression in mice［J］.The Journal of Nutrition，2000，130（6）:1561－1565.

［7］ ZHU Y J，KAN L X，QI C，et al.Isolation and charac?terization of peroxisome proliferator?activated receptor （PPAR）interacting protein（PRIP）as a coactivator for PPAR［J］.The Journal of Biological Chemistry，2000，275（18）:13510－13516.

［8］ XU J，TERAN?GARCIA M，PARK J H Y，et al.Poly?unsaturated fatty acids suppress hepatic sterol regula?tion element?binding protein?1 expression by accelera?tion transcript decay［J］.The Journal of Biological Chemistry，2001，276（13）:9800－9807.

［9］ 李琪玲，王武，章立新.CLA對小鼠的減肥作用［J］.食品科學，2011，32（21）:229－232.

［10］ ZHOU X，LI D F，YIN J D，et al.CLA differently reg?ulates adipogenesis in stromal vascular cells from por?cine subcutaneous adipose and skeletal muscle［J］.Journal of Lipid Research，2007，48（8）:1701－1709.

［11］ PARIZA M W，PARK Y，COOK M E.Mechanisms of action of conjugated linoleic acid:evidence and specu?lation［J］.Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine，2000，223（1）:8－13.

［12］ IRITANI N，KOMIYA M，F(xiàn)UKUDA H，et al.Lipo?genic enzyme gene expression is quickly suppressed in rats by a small amount of exogenous polyunsaturated fatty acids［J］.The Journal of Nutrition，1998，128 （6）:967－972.

［13］ 李榮剛，麻名文，王春陽，等.日糧添加亞油酸對斷奶至2月齡肉兔生長性能、免疫指標及脂質代謝的影響［J］.中國獸醫(yī)學報，2011，31（11）:1676－1680.

［14］ UWAYJAN M G，AZAR E J，DAGHIR N J.Sunflow?er seed in laying hen rations［J］.Poultry Science，1983，62（7）:1247－1253.

［15］ 王菊花，薛秀恒，劉光林，等.共軛亞油酸對斷奶仔豬生產性能及免疫的影響［J］.中國飼料，2006（2）:22－27.

［16］ 劉光芒，吳德，何祖鋒.共軛亞油酸對肉鴨生產性能與屠體性狀的影響研究［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2005，32（11）:3－5.

［17］ 付世建，謝小軍，張文兵，等.南方鲇的營養(yǎng)學研究:飼料脂肪對蛋白質的節(jié)約效應［J］.水生生物學報，2001，25（1）:70－75.

［18］ DELERIVE P，DE BOSSCHER K，BESNARD S，et al.Peroxisome proliferator?activated receptor α nega?tively regulated the vascular inflammatory gene re?sponse by negative cross?talk with transcription factors NF?κB and AP?1［J］.The Journal of Biological Chem?istry，1999，274（45）:32048－32054.

［19］ ISSEMANN I，GREEN S.Activation of a number of the steroid receptor superfamily by peroxisome prolif?erators［J］.Nature，1990，347（6294）:645－650.

［20］ SHAO D L，RANGWALA S M，BAILLY S T，et al.Interdomain communication regulating ligand binding by PPAR?γ［J］.Nature，1998，396（6709）:377－380.

［21］ LI H，CYBULSKY M I，GIMBRONE M A J，et al.An atherogenic diet rapidly induces VCAM?l，a cytokine?regulatatable mononuclear leukocyte adhesion mole?cule，in rabbit aortic endothelium［J］.Arteriosclerosis，Thrombosis，and Vascular Biology，1993，13（2）:197－204.

［22］ ABEDI H，ZACHARY I.Signalling mechanisms in the regulation of vascular cell migation［J］.Cardiovascular Research，1995，30（4）:544－556.

［23］ RICOTE M，LI A C，WILLSON T M，et al.The PPAR gamma is a negatively regulator of macrophage activa?tion［J］.Nature，1998，391（6662）:79－82.

［24］ TANAKA T，ITOH H，DOI K，et al.Down regulationof peroxisome proliferator?activated receptor γ expres?sion by inflammatory cytokine and its reversal by thia?zolidinediones［J］.Diabetologia，1999，42（6）:702－710.

［25］ KLIEWER S A，LENHARD J M，WILLSON T M，et al.A prostaglandin J2 metabolite binds peroxisome proliferator?activated receptor γ and promotes adipo?cyte differentiation［J］.Cell，1995，83:813－819.

［26］ KLIEWER S A，SUNDSETH S S，JONES S A，et al.Fatty acids and eicosanoids regulate gene expression through direct interactions with peroxisome prolifera?tor?activated receptors alpha and γ［J］.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，1997，94（9）:4318－4323.

［27］ 趙占宇.共軛亞油酸（CLA）對大黃魚脂肪代謝、免疫、肉品質及PPAR基因表達的影響［D］.博士學位論文.杭州:浙江大學，2008.

［28］ 馬宏峰.亞油酸對高脂小鼠脂質代謝的影響及其機制研究［D］.碩士學位論文.合肥:合肥工業(yè)大學，2007.

［29］ 陳強，賴樺，李長強，等.豬脂肪組織代謝及其調控［J］.云南農業(yè)大學學報，2006，21（5）:635－640.

［30］ MERSMANN H J，SHAACKELFORD S D，HAY? DEN K D.Lipogenesis by invitroliver and adipose tis?sue preparations from neonated swine［J］.American Journal of Physiology，1973，224:1123－1129.

［31］ TOUSSANT M J，WILSON M D，CLARKE S D.Co?ordinate suppression of liver acety1?CoA carboxylase and fatty acid synthetase by polyunsaturated fat［J］.The Journal of Nutrition，1981，111（1）:146－153.

［32］ 咼于明.家禽營養(yǎng)［M］.2版.北京:中國農業(yè)大學出版社，2004.

［33］ BLAKE W L，CLARKE S D.Suppression of rat hepat?ic fatty acid synthase and S14 gene transcription by di?etary polyunsaturated fat［J］.The Journal of Nutrition，1990，120（12）:1727－1729.

［34］ CLARKE S D，HEMBREE J.Inhibition of triiodothy?ronine’s induction of rat liver lipogenic enzymes by dietary fat［J］.The Journal of Nutrition，1990，120 （6）:625－630.

［35］ 韓立強，郭豫杰，魯維飛，等.共軛亞油酸對小鼠乳腺脂肪合成相關基因表達的作用研究［J］.營養(yǎng)學報，2012，34（1）:68－73.

［36］ 李榮剛.日糧亞油酸水平對生長肉兔生長性能、組織脂肪酸構成及脂質代謝的影響［D］.碩士學位論文.泰安:山東農業(yè)大學，2011.

（責任編輯 菅景穎）

Appropriate Linoleic Acid Supplemental Level in Apis mellifera ligustica Worker Larvae Diet

WANG Shengwei XU Baohua WANG Hongfang?
（College of Animal Science and Technology，Shandong Agricultural University，Tai’an 271018，China）

Abstract:This experiment was conducted to study the appropriate linoleic acid supplemental level in Apis mel?lifera ligustica worker larvae diet.Five hundred and seventy six larvae were randomly assigned to 6 groups with 96 larvae in each group.Larvae in control group were fed a basal diet，and those in experimental groups were fed the basal diet supplemented with 0.02%，0.04%，0.06%，0.08%and 0.10%linoleic acid，respectively.The experiment lasted for 7 days.The results showed as follows:1）compared with the control group，the diet supplemented with 0.10%linoleic acid reduced the percentage of pupation（P＜0.05）.2）Compared with the control group，the diet supplemented with 0.04%linoleic acid significantly increased the total protein concen?tration of larvae at 5 days old（P＜0.05），when the worker larvae developed into pupa at 7 days old，the diet supplemented with 0.10%linoleic acid significantly increased the pupae protein concentration（P＜0.05）.3）Compared with the control group，the diet supplemented with 0.02%linoleic acid had significant suppression effects on the activity of peroxisome proliferators?activated receptor（PPAR）α（P＜0.05），but 0.08%linoleic acid had stimulating effects on the activities of PPARα and PPARγ at 6 days old.4）Compared with the control group，the linoleic acid supplemental levels at 0.04%and 0.08%significantly improved the activity of fatty acid synthetase（FAS）of larvae at 6 days old（P＜0.05）.Acetyl CoA carboxylase（ACC）concentration of larvae at 5 days old was significantly improved by 0.08%linoleic acid（P＜0.05）and ACC concentration of larvae at 6 days old was significantly improved by 0.06%and 0.10%linoleic acid（P＜0.05）.5）Different supplemental levels of linoleic acid had no effects on the relative expression levels of FAS and ACC genes（P＞0.05）.According to the curve fitting results of the percentage of pupation and protein concentration of larvae，it is concluded that the appropriate linoleic supplemental level in Apis mellifera ligustica worker larvae diet is 0.024%to 0.037%.［Chinese Journal of Animal Nutrition，2015，27（5）:1440?1449］

Key words:linoleic acid；Apis mellifera ligustica；appropriate supplemental level；percentage of pupation；concentration of protein；fat metabolism

Corresponding author?，lecturer，E?mail:wanghongfang22＠163.com

通信作者:?王紅芳，講師，E?mail:wanghongfang22＠163.com

基金項目:國家蜂產業(yè)技術體系建設專項資金（CARS?45）；山東省農業(yè)良種工程項目“優(yōu)質高產蜜蜂及蠶桑新品種培育”（2014?2016）

作者簡介:王圣偉（1990－），男，河南商丘人，碩士研究生，從事蜜蜂營養(yǎng)研究。E?mail:swwang2012＠163.com

收稿日期:2014－12－19

doi:10.3969/j.issn.1006?267x.2015.05.014

中圖分類號:S816

文獻標識碼:A

文章編號:1006?267X（2015）05?1440?10