贠 潔 程顯怡 段海婧,2 馬 駿,2*

1.甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2 國家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科研三級實驗室中藥藥理實驗室，甘肅 蘭州 730000

紅芪及紅芪多糖對氣虛血瘀模型小鼠血液流變性的影響

贠 潔1程顯怡1段海婧1,2馬 駿1,2*

1.甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2 國家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科研三級實驗室中藥藥理實驗室，甘肅 蘭州 730000

目的：觀察紅芪水煎液及紅芪多糖對氣虛血瘀模型小鼠血液流變性的影響。方法：通過低溫強(qiáng)迫游泳并腰背部皮下注射3%角叉菜膠溶液，制造小鼠氣虛血瘀模型。測定小鼠的游泳時間、尾部血栓形成長度、凝血時間，觀察紅芪水煎液及紅芪多糖益氣活血功效相關(guān)的部分藥理作用。結(jié)果：紅芪水煎液及紅芪多糖能明顯延長小鼠的游泳時間(P<0.05)；能縮短小鼠尾部血栓長度及其百分率(P<0.05)；能明顯延長凝血時間(P<0.01)。結(jié)論：紅芪水煎液及紅芪多糖能改善氣虛血瘀模型小鼠血液流變性。

紅芪水煎液；紅芪多糖；氣虛血瘀模型；游泳時間；血栓長度；凝血時間

氣與血是構(gòu)成人體的基本物質(zhì)，氣血相互依存，相互為用。氣具有推動、溫煦、化生、統(tǒng)攝血的作用，氣不足則血不暢，出現(xiàn)氣虛血瘀癥狀。氣虛血瘀證是臨床常見病證，尤其在老年心腦血管疾病中表現(xiàn)尤為突出。

紅芪(Radix Hedysari)為豆科巖黃芪屬植物多序巖黃芪的干燥根[1]。紅芪性溫，味甘，具有補(bǔ)氣固表、利尿排毒、排膿、斂瘡生肌等功效，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，紅芪含有多糖類、黃酮類、紫檀素類、香豆素類、生物堿類等活性物質(zhì)[2-5]，具有增強(qiáng)免疫、強(qiáng)心、利尿、降壓、保肝及抗炎等作用[6]。

本文以強(qiáng)迫低溫游泳引起勞倦寒凝和角叉菜膠致小鼠尾靜脈血栓形成，制造小鼠氣虛血瘀模型[8-9]，觀察紅芪多糖及紅芪水煎液對模型小鼠血液流變性的影響。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 昆明種小鼠，清潔級，雌雄各半，體重18～22g，由蘭州大學(xué)實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK(甘)20090004，合格證號：0001598。

1.2 藥物與試劑 紅芪采自甘肅宕昌縣，經(jīng)本院中藥鑒定教研室鑒定為豆科巖黃芪屬植物多序巖黃芪(HedysarumpolybotrysHand.Mazz.)的干燥根；紅芪多糖溶液制備：方法同文獻(xiàn)[7，10]；采用苯酚-硫酸比色法測定紅芪藥材中多糖含量為20.3%；益氣養(yǎng)血口服液(批號：20120718，吉林龍?zhí)┲扑幑煞萦邢薰?用生理鹽水配成濃度為150%的藥液備用；角叉菜膠(CAS號：9000-07-1，上海勁馬生物科技有限公司)用生理鹽水配成3%的濃度備用。

1.3 實驗儀器 BSIIOS型Sartorius電子天平(北京塞多利斯天平有限公司)；DL-5M低速離心機(jī)(湖南星科科學(xué)儀器有限公司)。

2 實驗方法

2.1 分組、給藥和模型制造 取小鼠70只，雌雄各半，隨機(jī)分成7組，每組10只。空白組和模型組灌胃生理鹽水；陽性藥組灌胃益氣養(yǎng)血口服液20ml/kg(相當(dāng)于臨床人日用量的30倍)；紅芪水煎液高、低劑量組分別灌胃紅芪水煎液15g/kg和5g/kg(分別相當(dāng)于臨床人日用量的30倍和10倍)；紅芪多糖高、低劑量組分別灌胃紅芪多糖3.04g/kg和1.02g/kg(分別相當(dāng)于臨床人日用量的30倍和10倍)，均按照0.2ml/10g給藥，每天1次，連續(xù)5d。除空白組外，其余各組小鼠每天給藥1h后，分別置入水溫(14±0.5)℃，直徑120cm，水深約25cm的圓形容器中，強(qiáng)迫低溫游泳至疲勞狀態(tài)(以小鼠僅頭部露出水面且身體基本與水面垂直為標(biāo)準(zhǔn))[8-9]。第5天游泳后，除空白組外其余各組小鼠腰背部皮下注射3%角叉菜膠溶液0.1ml/10g，誘發(fā)小鼠尾部血栓形成。

2.2 小鼠游泳時間測定 每天給藥1h后，除空白組外，其余小鼠測定強(qiáng)迫游泳至疲勞狀態(tài)的時間。

2.3 小鼠尾部血栓長度測定 注射角叉菜膠8 h后，測定小鼠尾部血栓形成長度，并計算血栓長度百分率(血栓長度占全尾長度百分比)。

2.4 小鼠凝血時間測定(玻片法) 測定小鼠尾部血栓長度后，用眼科彎鑷迅速摘取小鼠一側(cè)眼球，于載玻片的兩端各滴一滴血，血滴直徑約5mm，立即用秒表計時。每隔30s用清潔大頭針自血滴邊緣向里輕輕挑動一次，觀察有無血絲挑起。并記錄從血滴接觸玻片開始至挑起血絲為止的時間，即凝血時間。

3 實驗結(jié)果

3.1 紅芪水煎液及紅芪多糖對游泳時間的影響 由表1可知，給藥第4天和第5天，益氣養(yǎng)血口服液、紅芪水煎液、紅芪多糖能明顯延長氣虛血瘀模型小鼠游泳時間。第4天，與模型組比較，益氣養(yǎng)血口服液組、紅芪水煎液高劑量組、紅芪多糖高、低劑量組游泳時間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；第5天，與模型組比較，各給藥組游泳時間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 紅芪水煎液及多糖對氣虛血瘀模型小鼠游泳時間的影響±s)

注：與模型組比較,*P<0.05，**P<0.01。

3.2 對氣虛血瘀模型小鼠尾部血栓形成的影響 由表2可知，益氣養(yǎng)血口服液組、紅芪水煎液高、低兩個劑量組及紅芪多糖高、低劑量組小鼠尾部血栓長度和百分率明顯縮短，與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 紅芪水煎液及多糖對角叉菜膠誘發(fā)小鼠尾部血栓形成長度的影響±s)

注：與模型組比較,**P<0.01，*P<0.05；與低劑量組比較：▲P<0.05,▲▲P<0.01。

3.3 對氣虛血瘀模型小鼠凝血時間的影響 由表3可知，紅芪水煎液高、低兩個劑量組、紅芪多糖高、低劑量組及益氣養(yǎng)血口服液組凝血時間明顯延長，與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 紅芪水煎液及多糖對氣虛血瘀模型小鼠凝血時間的影響±s)

注：與模型組比較,*P<0.05，**P<0.01；與低劑量組比較,▲▲P<0.01。

4 討論

血栓形成(thrombosis)是活體循環(huán)系統(tǒng)中血液發(fā)生凝固或血液中某些有形成分析出、凝集形成固體質(zhì)塊的過程[13]，所形成的固體質(zhì)塊稱為血栓(thrombus)。角叉菜膠是從海藻中提取的含硫酸多糖物質(zhì)[11]，具有較強(qiáng)致炎能力，其誘發(fā)尾動脈局部血栓與血管內(nèi)炎癥密切相關(guān)，炎癥時釋放的大量炎癥介質(zhì)，如白介素-1、腫瘤壞死因子等可破壞正常內(nèi)皮細(xì)胞維持凝血與纖溶之間的平衡作用，從而促發(fā)血栓形成。注射3～14 h后，多數(shù)動物尾尖部出現(xiàn)暗紅色血栓形成區(qū)，并逐漸向尾根部擴(kuò)大；48～72 h后局部從發(fā)紺變?yōu)楹谏S后尾部干細(xì)斷落。由于血栓發(fā)生在尾部，界限明顯，可從體表觀察血栓形成出現(xiàn)的時間與發(fā)展過程，測量其波及的范圍或長度。所以本實驗采用腰背部皮下注射3%角叉菜膠溶液制造小鼠氣虛血瘀模型。

生物流變學(xué)創(chuàng)始人ALCopley認(rèn)為“血液流變學(xué)是在宏觀、微觀、亞微觀水平上研究血液的細(xì)胞成分和血漿的變形和流動特征，以及與血液直接接觸的血管結(jié)構(gòu)的流變特性”。血液流變性的異常，會出現(xiàn)全身或局部循環(huán)和微循環(huán)障礙?？捎赡承┘膊∫穑部蓪?dǎo)致某些疾病的進(jìn)一步惡化，如心腦血管疾病、糖尿病、肺癌、肝腎疾病等，研究具有改善血液流變性作用的藥物，對于上述疾病的防治具有重要意義[14-15]。

凝血時間是指血液離開血管在體外發(fā)生凝固的時間，主要是測定內(nèi)源性凝血途徑中，各種凝血因子是否缺乏，功能是否正?；蛘呤欠裼锌鼓镔|(zhì)增多[16]。將小鼠置于水溫保持為(14±0.5)℃的容器內(nèi)游泳至疲勞狀態(tài)，撈出后不予保溫措施及擦拭水跡，關(guān)閉門窗任其暴露于空氣中自然晾干，由于寒凝作用使小鼠產(chǎn)生血瘀，再加上每天游泳至疲勞狀態(tài)，使小鼠每天活動減少，進(jìn)食量減小，形成氣虛狀態(tài)，故小鼠每天游泳時間逐漸減少。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為氣與血是人體最基本的寶貴物質(zhì)，氣血不和，百病乃變化而生。研究發(fā)現(xiàn)氣血病變與血液流變性異常和微循環(huán)障礙密切相關(guān)，氣血不順可造成血液濃、黏、凝、聚現(xiàn)象，血液淤積和流速減慢是血栓發(fā)生并持續(xù)存在的原因[16-17]。本研究發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，紅芪水煎液和多糖可以改善小鼠的血瘀狀況使其尾部血栓形成時間延長，血栓長度縮短，凝血時間延長。隨著紅芪水煎液和多糖紅芪濃度的增加血栓長度縮短，說明紅芪多糖的濃度與小鼠形成血栓呈量效關(guān)系。綜上所述，紅芪多糖及水煎液均能能通過延長氣虛血瘀模型小鼠游泳時間、延長凝血時間、抗血栓形成的作用，改善氣虛血瘀模型小鼠血液流變性，并且具有明顯量效關(guān)系，具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

[1]楊林，譚玉玲． 中藥紅芪研究現(xiàn)狀[J]．藥物研究， 2009，21(5)：120-121.

[2]潘競先，劉薇，衛(wèi)東．紅芪化學(xué)成分的研究[J]．北京醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1984，16(3)：248-250．

[3]鄧六勤，吳寶儀，陳潔，等．杜婕瑩中藥紅芪化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J]．醫(yī)療前沿，2013，9：36-39．

[4]段志興，孫麗君，鄭海金．紅芪根中的微量元素和氨基酸[J]．蘭州大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，1990，26(2)：9-82．

[5]賈志強(qiáng)，董其祥，周小英．紅芪根、莖、葉中總皂苷含量比較[J]．西北藥學(xué)雜志，2001，16(4)：157．

[6]權(quán)菊香．紅芪的藥理研究進(jìn)展[J]．時珍國醫(yī)國藥研究，1997，8(2)：178-180．

[7]何利城，黃正良．紅芪多糖對某些生化指標(biāo)的影響[J]．甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1990，7(2)：52．

[8]牛雯穎，尤艷芳，紀(jì)博碩，等．少腹逐瘀湯對氣虛血瘀模型大鼠紅細(xì)胞膜組分的影響[J]．中華中醫(yī)藥雜志，2014，38(7)：2301-2304．

[9]牛雯穎，武爽，張禹，等．氣虛血瘀模型大鼠紅細(xì)胞膜生物學(xué)研究[J]．中醫(yī)藥信息，2013，37(4)：120-122．

[10]胡三覺，田巧蓮，顧建文，等．一種新的體內(nèi)血栓形成動物模型[J]．中華血液學(xué)雜志，1993，14(10)：541．

[11]劉瑜，董小黎．血栓動物模型的建立[J]．首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報．2002，9(23)：3．

[12]馬丹．紅芪多糖的提取分離純化及組成分析[D]．蘭州:蘭州大學(xué)，2008．

[13]魯艷莉，寧喜斌．血栓形成機(jī)理及溶血栓藥物的研究進(jìn)展[J]．食品研究與開發(fā)，2006，27(1)：169-172．

[14]廖福龍．淺議中藥藥理學(xué)中的血液流變學(xué)[J]．世界科學(xué)技術(shù)，2000，2(3)：27-30．

[15]廖慧玲，尹思源，楊思進(jìn)，等．從血液流變學(xué)看多因素復(fù)合制作氣虛血瘀腦缺血動物模型[J]．陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007，22(28)：26．

[16]尹軍祥，田金洲，宋崇順，等．氣虛血瘀證動物模型制作方法與評價[J]．中華中醫(yī)藥雜志(原中國醫(yī)藥學(xué)報)，2006，30(21)：7．

[17]曹偉春．中藥改善血液流變性的研究進(jìn)展[J]．中草藥，1997，28(5)：311-313．

TheinfluenceofHongQiandHongQipolysaccharidefordeficiencyandbloodstasismodelmice

YAN Jie1CHEN Xian-yi1DUAN Hai-jing1,2MA Jun1,2*

1.Gansu universituy of chinese medicine Gansu Lanzhou 7300002.The state administration of Chinese medicine scientific research third level laboratoryof Chinese medicine pharmacology laboratory Gansu Lanzhou 730000

Objective Observed the influence ofHedysarumpolybotryswater decoction and HPS on QDBS mice Hemorheology.Method Low forced swim and lower back subcutaneously 3% carrageenan solution manufacturing mouse blood stasis model.By measuring the mice swimming time,the length of the tail thrombosis,the clotting time to observe HPS Yiqihuoxue efficacy related parts pharmacological effects.Results HongQi andHongQipolysaccharidecanextendtheswimmingtimeofmice(P<0.01); Canshortenthetaillengthofthrombusinmiceanditspercentage (P<0.05),Canobviouslyprolongclottingtime (P<0.01). Conclusion

Hedysarum polybotrys water decoction;Hedysarum polybotrys polysaccharide;Blood Stasis Model;Swim Time;the Length of Thrombosis;Clotting Time

甘肅中醫(yī)學(xué)院研究生創(chuàng)新基金CX2012-08。

贠潔，碩士，主要從事中藏藥藥理與毒理學(xué)研究。

馬駿，教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事中藏藥藥理與毒理學(xué)研究。E-mail：zhongjm615@sina.com

R285.5

A

1007-8517(2015)09-0016-03

2015.02.11)