張紅玉 劉 劍 王繼陳

云南云河藥業(yè)股份有限公司,云南 個(gè)舊 661000

HPLC法測(cè)定香果健消片中橙皮苷的含量

張紅玉 劉 劍*王繼陳

云南云河藥業(yè)股份有限公司,云南 個(gè)舊 661000

目的：建立香果健消片(蜘蛛香、草果、木香、糯米)中橙皮苷的測(cè)定方法。方法：采用HPLC法，PUXIANG C18色譜柱(4.6 mm×200mm,5μm)；乙腈-1%冰醋酸水溶液(23∶77)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為283nm；柱溫為30℃。結(jié)果：采用的方法對(duì)香果健消片中橙皮苷的測(cè)定適用，橙皮苷在55.0～220.0μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r>0.999，加樣回收率(n=6)為100.7%。結(jié)論:本法準(zhǔn)確可靠，可行性及重復(fù)性好，可用于香果健消片的質(zhì)量控制。

香果健消片；橙皮苷；高效液相色譜

香果健消片是由蜘蛛香、木香、草果、糯米四味藥經(jīng)提取加工制成的復(fù)方制劑，有健胃消食之功效，用于消化不良、氣脹飽悶、食積腹痛、胸滿腹脹。

該制劑中，蜘蛛香理氣止痛、消食止瀉、祛風(fēng)除濕、鎮(zhèn)驚安神為方中君藥；木香行氣止痛、健脾消食，草果燥濕溫中、截瘧除痰共為臣藥；佐以糯米溫補(bǔ)脾胃。蜘蛛香的成分為橙皮苷[1]；木香的成分為木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯，草果的成分為揮發(fā)油，兩者的有效成分在提取加工過程中的損失難以控制，無法保證成品轉(zhuǎn)移率；糯米的成分為碳水化合物，其控制沒有實(shí)質(zhì)意義。因此，為了更好的控制產(chǎn)品的質(zhì)量，保證臨床用藥的安全有效，故用高效液相色譜法對(duì)香果健消片中的橙皮苷進(jìn)行定量測(cè)定研究。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 Agilent 1260型高效液相色譜儀，賽多利斯電子天平(BP211D)。

1.2 試藥 橙皮苷對(duì)照品(批號(hào)為1107021-200613)，來源于中國食品藥品檢定研究院，用前置五氧化二磷干燥器中減壓干燥12h以上；香果健消片(批號(hào)為140501、140502、140601、140602、140701)為云南云河藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；甲醇(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；甲醇(色譜純，J.T.Baker)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 PUXIANG C18色譜柱(4.6mm×200mm,5μm); 乙腈-1%冰醋酸水溶液(23∶77)為流動(dòng)相；流量為0.8ml/min;檢測(cè)波長為283nm；柱溫30℃。理論板數(shù)按橙皮苷計(jì)算應(yīng)計(jì)算不低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取巳減壓干燥12h以上的橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱定， 加甲醇適量制成每1ml含25μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的配制 取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，置50ml的容量瓶中， 加甲醇適量，超聲處理40min，放冷，用甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 專屬性試驗(yàn) 取按香果健消片生產(chǎn)工藝制成缺蜘蛛香的陰性樣品0.5g，按“2.3”項(xiàng)下方法制備的陰性對(duì)照液，按“2.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果在與橙皮苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的保留時(shí)間處，供試品溶液色譜圖中有吸收峰，而陰性對(duì)照色譜圖中未顯吸收峰，色譜圖詳見圖1。

2.5 線性關(guān)系考察 取含量測(cè)定項(xiàng)下的對(duì)照品溶液2、4、5、6、8μl按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，橙皮苷的量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表1。

表1 線性測(cè)定結(jié)果

試驗(yàn)號(hào)橙皮苷進(jìn)樣量X(μg)峰面積Y15501031211002120313752685416503247522004280線性方程Y=19741X-4285相關(guān)系數(shù)r：09996

結(jié)果表明，在選定的測(cè)定量范圍內(nèi)，橙皮苷的檢測(cè)量與峰面積具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r>0.999，可見橙皮苷在55.0～220.0μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度考察 取上述對(duì)照溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定，橙皮苷含量分別為0.417mg/片、0.418mg/片、0.417mg/片、0.420mg/片、0.421mg/片、0.419mg/片，RSD為0.39%。結(jié)果表明，儀器具有良好的精密度。

2.7 重復(fù)性考察 取同一批號(hào)的樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。橙皮苷的含量分別為0.419mg/片、0.418mg/片、0.420mg/片、0.421mg/片、0.419mg/片、0.418mg/片，RSD為0.28%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 耐用性考察 為了考察測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，需對(duì)其進(jìn)行了穩(wěn)定性、不同檢測(cè)波長、不同柱溫、不同色譜柱的考察，以增加該檢測(cè)項(xiàng)目的適用性。

2.8.1 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液5μl，分別于0、4、8、24h各進(jìn)樣一次，其峰面積積分別為171.519、170.028、171.917、170.277，其RSD為0.47%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8.2 不同檢測(cè)波長的比較 取同一供試品溶液5μl，分別在波長283nm、280nm下測(cè)定其含量，考察不同波長對(duì)橙皮苷測(cè)定的影響，橙皮苷的含量分別為0.422mg/片、0.421mg/片，RSD值為0.24%，表明波長有較小變動(dòng)時(shí)，對(duì)橙皮苷的檢測(cè)基本沒有影響，結(jié)果穩(wěn)定。

2.8.3 不同柱溫比較 取同一供試品溶液5μl，分別在柱溫30℃、35℃、40℃下測(cè)定其含量，考察不同柱溫對(duì)橙皮苷測(cè)定的影響，其峰面積為0.425 mg/片、0.421 mg/片、0.421 mg/片，RSD值為0.55%，表明柱溫有較小變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果基本不受影響，結(jié)果穩(wěn)定。

2.8.4 不同色譜柱的比較 取同一供試品溶液5μl，使用Thermo ODS C18色譜柱(Part Number：30105-254630 250×4.6mm，5μm)、PUXIANG C18色譜柱(P/N ：PUXIANG18，S/N：09253800 250×4.6mm，5μm)、Agilent C18色譜柱(PN990967-902 SN:USAHO30965 LN B12166 250×4.6mm，5μm)同步操作考察用不同色譜柱測(cè)定橙皮苷含量時(shí)的適用程度，橙皮苷的含量分別為：0.417 mg/片、0.417 mg/片、0.425 mg/片，結(jié)果RSD值為1.11%，表明在使用以上三種不同色譜柱時(shí)，對(duì)橙皮苷的檢測(cè)基本無影響。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 稱取巳知含量的同一批香果健消片(批號(hào)為140602，含量為1482.5μg/g)0.25g，置50ml容量瓶中，分別精密加入對(duì)照品溶液(濃度為27.5μg/ml)25ml,加入甲醇至約40ml，按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液的配制方法制備加樣供試液。按“2.1”項(xiàng)一色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算對(duì)照品回收率，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.10 樣品測(cè)定 取5個(gè)批號(hào)的樣品，按“2.2”項(xiàng)下供試品制備方法，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表3。

表3 樣品測(cè)定結(jié)果 (mg/片，n=5)

3 討論

3.1 指標(biāo)成份的選擇 香果健消片方中蜘蛛香為君藥，其根莖具有豐富的藥用價(jià)值，傳統(tǒng)中醫(yī)藥認(rèn)為其具有理氣止痛、消炎止瀉、祛風(fēng)除濕、鎮(zhèn)靜安神等功效，可用于治療脘腹脹痛、消化不良、腹瀉、痢疾、風(fēng)濕痹痛、蛇毒、失眠、肥胖等癥。《中國藥典》2010版一部記載通過測(cè)定纈草三酯和乙酰纈草三酯的含量控制蜘蛛香的質(zhì)量，但因纈草三酯和乙酰纈草三酯的不穩(wěn)定性，《中國藥典》2010版增補(bǔ)版取消了相關(guān)含量測(cè)定，筆者查閱大量相關(guān)資料，發(fā)現(xiàn)蜘蛛香的主要化學(xué)成分有揮發(fā)油、環(huán)烯醚萜類和黃酮類等，橙皮苷是蜘蛛香的主要有效成分之一，且其含量高、穩(wěn)定性好，故將橙皮苷作為香果健消片的指標(biāo)成分來控制產(chǎn)品質(zhì)量。

3.2 波長的選擇 取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含25μg的溶液，在200～400nm波長處進(jìn)行紫外掃描，橙皮苷在283nm處有最大吸收，故選擇283nm作為橙皮苷的測(cè)定波長。

3.3 流動(dòng)相的選擇 本實(shí)驗(yàn)中曾分別采用乙腈-水(用磷酸調(diào)pH：3.00)(23∶77)[3]、甲醇-醋酸-水(35∶4∶61)[2]、乙腈-水(含1%冰醋酸)(23∶77)[1]為流動(dòng)相洗脫，結(jié)果以乙腈-水(含1%冰醋酸)(23∶77)洗脫時(shí)峰型良好，分離度好。

[1]胡軼群,張如松.藥用植物蜘蛛香化學(xué)成分及藥理作用研究[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2009,3(24):194-197.

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典:2010年版一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010：345-346.

[3]石晉麗,劉勇,肖培根.HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地蜘蛛香中橙皮苷的含量[J].中草藥,2005,36(3):449-450.

A method for determination of hesperidin in Xiangguo Jianxiao Tablets by HPLC

ZHANG Hong-yu,LIU Jian,WANG Ji-chen

Yunnan Yunhe Pharmaceutical Co.,Ltd,Gejiu 661000,China

Objective： To establish an HLPC method for determination of hesperidin in Xiangguo Jianxiao Tablets(ValerianajatamansiJones,Amomuntsao-koCrevost et Lemaire,AucklandialappaDecne,Semen oryzae Glutinosae).Methods： The determination was performed on a PUXIANG C18colunn(4.6mm×200mm,5μm)with the mobile phase consisted of acetonitrile-1% acetic acid solution(23∶77).Wavelength detection distributed at 283nm and the column temperature was 30℃.Results： The method is available for determination of hesperidin in Xiangguo Jianxiao Tablets.The linear ranges of hesperidin was 55.0-220.0μg(r>0.99) .Conclusion： The method is accurate,reliable and reproducible and can be used for quality control of Xiangguo Jianxiao Tablets.

Xiangguo Jianxiao Tablets;hesperidin;HPLC

張紅玉，女,漢族，工程師，理學(xué)學(xué)士，從事質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

劉劍，男，主管藥師，從事中成藥開發(fā)與研究工作。

R284.1

A

1007-8517(2015)09-0007-03

2015.03.05)