高玉玲，常海燕，瞿國海，姚利金

(1. 玉溪市紅塔區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所， 云南 玉溪 653100； 2. 玉溪市紅塔區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，云南 玉溪 653100；3. 玉溪市紅塔區(qū)春和街道辦事處畜牧獸醫(yī)站，云南 玉溪 653100； 4. 玉溪市紅塔區(qū)草山飼料站，云南 玉溪 653100)

土雜雞免疫一次和二次禽流感H5滅活苗 免疫效果對比試驗(yàn)

高玉玲1，常海燕2，瞿國海3，姚利金4

(1. 玉溪市紅塔區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所， 云南 玉溪 653100； 2. 玉溪市紅塔區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，云南 玉溪 653100；3. 玉溪市紅塔區(qū)春和街道辦事處畜牧獸醫(yī)站，云南 玉溪 653100； 4. 玉溪市紅塔區(qū)草山飼料站，云南 玉溪 653100)

按程序、規(guī)范接種的蛋雞在免疫保護(hù)期內(nèi)其禽流感免疫抗體水平較高且抗體效價(jià)整齊。土雜雞的抗體水平免疫21d后抗體滴度合格率僅為30%。為提高土雜雞禽流感免疫抗體合格率，進(jìn)行了一次免疫和二次免疫效果的對比試驗(yàn)，結(jié)果顯示：土雜雞二次免疫禽流感H5滅活苗后，免疫抗體水平顯著提高，合格率達(dá)90%。試驗(yàn)用的兩個(gè)不同廠家的禽流感H5滅活苗的免疫效果區(qū)別不大。蛋雞三次免疫后免疫抗體合格率達(dá)95%，且抗體效價(jià)高而整齊。

高致病性禽流感；土雜雞；免疫； 免疫抗體

高致病性禽流感是由A型流感病毒引起的以禽類為主的烈性傳染病，已成為當(dāng)今影響?zhàn)B禽業(yè)健康發(fā)展的重要疫病之一。高致病性禽流感疫情的不斷發(fā)生，嚴(yán)重威脅著人類公共衛(wèi)生安全，全球人感染禽流感事件時(shí)有發(fā)生。疫苗免疫作為防控禽流感的重要措施已被廣泛使用，滅活疫苗是當(dāng)今應(yīng)用最廣泛的禽流感疫苗，由國家免費(fèi)提供的禽流感H5滅活苗適用任何日齡的家禽。但疫苗的免疫效果如何？推薦免疫程序是否適合禽流感疫情防控的實(shí)際？則是廣大養(yǎng)殖戶和獸醫(yī)技術(shù)人員普遍關(guān)注的問題，也是目前家禽養(yǎng)殖急需解決的問題。近幾年來，筆者通過血凝抑制試驗(yàn)，對全區(qū)的512個(gè)養(yǎng)雞場(戶)共計(jì)4673份血清樣本進(jìn)行了禽流感H5N1免疫效果的抗體監(jiān)測，結(jié)果顯示：按程序、規(guī)范接種的蛋雞在免疫保護(hù)期內(nèi)其禽流感免疫抗體水平較高且抗體效價(jià)整齊，免疫抗體合格率達(dá)95%以上；而土雜雞的抗體水平就不容樂觀，僅在7～10日齡進(jìn)行一次免疫，其抗體水平較低且衰減很快，免疫21d后抗體滴度普遍偏低，合格率僅為30%，難以抵御強(qiáng)毒攻擊，為疫情的暴發(fā)流行埋下了嚴(yán)重隱患。為確定疫苗免疫效果，特進(jìn)行該對比試驗(yàn)，為制定有效的免疫程序提供科學(xué)依據(jù)，最終有效防控禽流感疫情，保證全區(qū)家禽業(yè)的健康穩(wěn)步發(fā)展。

1 材料和方法

1.1 疫苗

(重組)禽流感病毒滅活疫苗(H5亞型，Re-1株)，由玉溪市動物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一提供。

1.2 診斷液

H5型標(biāo)準(zhǔn)抗原(批號：2007050704)和陽性血清、陰性對照等，由農(nóng)業(yè)部哈爾濱獸醫(yī)研究所提供。

1.3 檢測樣品采集時(shí)間

免疫后 21～40 d。

1.4 樣品采集

每個(gè)群體中隨機(jī)采樣本5～15份，以3000r/min離心10min，吸取血清，待檢。

1.5 溶液配制

(1)阿氏液配制：葡萄糖2.05g、檸檬酸鈉0.8g、檸檬酸0.055g、NaCl 0.42g，加蒸餾水至100mL，散熱溶解后調(diào)pH值至6.1，69kPa 15min高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

(2)1%雞紅細(xì)胞液制備：采集3只無禽流感和雞新城疫抗體的健康公雞的血液與等體積阿氏液混合，離心移去上清液，再加入阿氏液洗滌2次，每次均以1000r/min離心10min，洗滌后用生理鹽水配成10%紅細(xì)胞懸液。取1mL 10%紅細(xì)胞懸液加入9mL生理鹽水，混勻即可。

1.6 抗體檢測

采用血凝抑制試驗(yàn)，具體方法按國家標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

1.7 免疫效果評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

按農(nóng)業(yè)部要求，在禽流感H5滅活苗免疫家禽21d后進(jìn)行免疫效果監(jiān)測，禽流感抗體血凝抑制試驗(yàn)(HI)抗體效價(jià)等于或大于24判定為免疫合格，存欄家禽群體免疫抗體合格率必須大于70%判為免疫合格。

1.8 高致病性禽流感H5免疫程序

免疫程序一(2008年農(nóng)業(yè)部禽流感規(guī)范)：商品土雜雞7～10日齡，用H5禽流感滅活苗0.5mL/只進(jìn)行一次免疫即可。免疫程序二：商品土雜雞7～10日齡時(shí)，用H5禽流感滅活苗0.5mL/只進(jìn)行第一次免疫，3～4周后再用H5禽流感滅活苗0.5mL/只進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫。

2 監(jiān)測結(jié)果

監(jiān)測結(jié)果見表1、表2。

(1)按照免疫程序一次免疫注射土雜雞養(yǎng)殖戶23戶338份血清樣本，合格127份，合格率37%。

(2)按照免疫程序二次免疫注射土雜雞養(yǎng)殖戶24戶235份血清樣本，合格212份，合格率90%。

(3)對照組按蛋雞免疫程序免疫注射滅活苗進(jìn)行三次，14戶蛋雞養(yǎng)殖戶159份血清，合格154份，合格率97%。

表1 禽流感H5免疫抗體效價(jià)監(jiān)測情況

3 分析與討論

(1)進(jìn)行三次免疫的蛋雞，不管是用哪個(gè)廠家的H5滅活疫苗，禽流感免疫抗體合格率達(dá)95%以上，且免疫抗體效價(jià)整齊均在26以上。第三次免疫在開產(chǎn)前進(jìn)行，避免免疫給雞群造成應(yīng)激從而影響產(chǎn)蛋率，確保雞群在開產(chǎn)初期的抗體達(dá)到高峰值，盡量避免在產(chǎn)蛋高峰期進(jìn)行免疫。以后根據(jù)免疫抗體監(jiān)測結(jié)果，每隔4～6個(gè)月進(jìn)行一次H5免疫。

(2)土雜雞由于生長期短，按農(nóng)業(yè)部高致病性禽流感等重大動物疫病免疫方案的要求，肉雞一般在7～10日齡進(jìn)行一次禽流感H5滅活苗免疫即可。但試驗(yàn)結(jié)果證明：一次免疫僅僅給機(jī)體一個(gè)刺激，所產(chǎn)生的抗體效價(jià)不高且抗體水平維持時(shí)間太短，土雜肉雞飼養(yǎng)期一般為65～70d，一次免疫后的抗體水平難以保護(hù)家禽群體，有受野毒攻擊暴發(fā)疫情的潛在威脅。

(3)土雜雞二次免疫后抗體水平顯著提高，從試驗(yàn)結(jié)果可看出抗體陽性率在90%以上。一次免疫后免疫禽的抗體參差不齊，無抗體或抗體水平很低的家禽為病毒感染埋下極大的隱患，感染后這些家禽不僅會大量死亡，而且會大量的排毒、散毒，污染整個(gè)飼養(yǎng)場，增加了其它家禽感染和患病的機(jī)會。初免后加強(qiáng)一次免疫，一方面可以減少或消除一些人為因素的影響，如疫苗劑量流失、不足等。另一方面，則可在一次免疫啟動的基礎(chǔ)上加強(qiáng)刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，使之迅速產(chǎn)生更高的免疫抗體，且維持時(shí)間更長。

(4)對監(jiān)測效果不理想的養(yǎng)殖戶進(jìn)行追蹤調(diào)查，經(jīng)調(diào)查分析，主要由以下因素造成：①接種速度偏快，接種深度不夠，致使部分疫苗溢出，客觀上造成疫苗劑量不足。②僅僅7～10日齡免疫一次，抗體水平較低且衰減很快。③養(yǎng)殖戶和防疫員由于擔(dān)心引起免疫反應(yīng)主觀減少接種劑量，免疫劑量不足導(dǎo)致效果不理想。作為基層獸醫(yī)工作者應(yīng)加大對養(yǎng)殖戶和防疫員的培訓(xùn)力度，強(qiáng)化防疫規(guī)范意識，建立考核機(jī)制，做到有效防疫，確保免疫質(zhì)量。

(5)禽流感H5疫苗為滅活疫苗，主要激發(fā)機(jī)體的體液免疫應(yīng)答能力，產(chǎn)生以IgG為主的抗體，發(fā)揮體液免疫作用，其通過肌肉注射進(jìn)行免疫，免疫效果是由注射劑量和疫苗中抗原含量共同決定的，通過監(jiān)測及調(diào)查也充分證明了這一點(diǎn)。因此，防疫員在免疫注射時(shí)有必要重視免疫劑量的充足和免疫次數(shù)的保證，只有實(shí)施有效的免疫，使免疫質(zhì)量得到保證，才能有效防制高致病性禽流感，確保家禽業(yè)的健康穩(wěn)步發(fā)展。

S852.4

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1005-1341(2015)06-0010-02

2015-06-16