劉正平，劉軍田，王明森，張建強(qiáng)，趙國敏，鄭德強(qiáng)

(1.山東省藥學(xué)科學(xué)院，山東 濟(jì)南 250101;2.山東福瑞達(dá)醫(yī)藥集團(tuán)公司，山東省黏膜與皮膚給藥技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250101;3.山東省食品藥品監(jiān)督管理局審評認(rèn)證中心，山東 濟(jì)南 250101)

瑞戈非尼(Regorafenib)是一種新型的口服多靶點(diǎn)磷酸酶抑制劑，能阻斷腫瘤細(xì)胞增殖、抑制腫瘤血管生成、調(diào)控腫瘤微環(huán)境，具有良好的抗腫瘤活性［1，2］。兩項(xiàng)瑞戈非尼大型隨機(jī)國際性多中心Ⅲ期臨床試驗(yàn)研究數(shù)據(jù)顯示，瑞戈非尼可使結(jié)腸直腸癌和胃腸道間質(zhì)瘤患者獲得生存益處［3，4］。在亞洲患者中進(jìn)行的Concur研究Ⅲ期臨床試驗(yàn)結(jié)果達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)陽性，明顯改善患者的生存期及無進(jìn)展生存期［5］。瑞戈非尼在生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)(BCS)中屬第Ⅱ類，具有低溶解度和高滲透性。

一般難溶性藥物的口服生物利用度較低，提高藥物的溶出度是改善其生物利用度的有效途徑。固體分散體(solid dispersion，SD)技術(shù)是將難溶性藥物與適宜的載體形成固體分散物，藥物以分子、無定形或微晶狀態(tài)分散存在，可增加藥物溶解度、抑制藥物晶體形成、保證藥物高度分散性、潤濕性等，利于提高藥物的溶出度［7］。選用不同的載體材料，不同的制備方法將頭孢地尼、吲達(dá)帕胺、硝苯地平、阿折地平等難溶性藥物制備成SD，均顯著提高了藥物的溶出度［8～11］。

目前國內(nèi)尚無有關(guān)瑞戈非尼SD的報道。本研究選用聚維酮K30(PVP K30)為載體材料，以溶劑法制備不同藥物載體比例的瑞戈非尼SD，采用紫外分光光度法，以溶出度為主要的質(zhì)量評價指標(biāo)，篩選出藥物與載體比例最優(yōu)的SD，同時對確定比例的SD采用X－射線粉末衍射法(XRD)進(jìn)行了表征，為瑞戈非尼口服制劑的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 8453紫外－可見分光光度計(jì)(安捷倫科技公司);RCZ－8M型溶出儀(天津天大天發(fā)科技有限公司);BUCHI R－124旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士BUCHI公司);PANalytical X＇Pert Pro粉末 X射線衍射儀(荷蘭帕納科公司);Mettler Toledo XS205電子天平(梅特勒－托利多公司)。

1.2 試藥 瑞戈非尼原料藥(山東省藥學(xué)科學(xué)院，批號:131014);聚維酮K30(美國ISP公司);十二烷基硫酸鈉(湖南爾康制藥股份有限公司);無水乙醇及其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 瑞戈非尼SD和瑞戈非尼－PVP K30物理混合物的制備

2.1.1 瑞戈非尼SD的制備 以PVP K30作為載體，采用溶劑法制備瑞戈非尼SD。按質(zhì)量比為1∶1、1∶3、1∶5、1∶7 和1∶9 分別稱取瑞戈非尼原料4 g 和 PVP K30適量，置燒杯中，加入60mL無水乙醇，振搖，超聲后使完全溶解。將溶液轉(zhuǎn)移至圓形燒瓶中，固定在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，60℃條件下使溶劑蒸發(fā)，待混合物脆化后取出，研碎，過30目篩，得瑞戈非尼SD，備用。

2.1.2 物理混合物的制備 按質(zhì)量比為1∶7稱取瑞戈非尼原料藥和PVP K30至研缽中，研細(xì)后混勻，備用。

2.2 溶出度研究

2.2.1 紫外測定波長的確定 取瑞戈非尼約25mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加入無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得250 μg·mL－1的瑞戈非尼儲備液。精密量取瑞戈非尼儲備液1mL，置于50mL容量瓶中，加入pH 4.5醋酸鹽緩沖液(含0.1%十二烷基硫酸鈉(SDS))稀釋至刻度，得瑞戈非尼對照液，同法配制PVP K30的溶液，用紫外－可見分光光度法在200～400 nm波長范圍內(nèi)分別對其進(jìn)行掃描。結(jié)果瑞戈非尼在264 nm處有最大吸收峰，載體PVP K30在該波長處無紫外吸收，故確定264 nm作為紫外測定波長。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取瑞戈非尼約25mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加入無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得250mg·L－1的瑞戈非尼儲備液。精密量取儲備液適量，用pH 4.5醋酸鹽緩沖液(含 0.1%SDS)稀釋成 1、2、3、4、5、6mg·L－1的系列濃度溶液，分別于264 nm的波長處測定吸光度，以濃度C為橫坐標(biāo)，以吸光度A為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:A=0.0938C －0.0015，r=0.9998。

2.2.3 回收率試驗(yàn) 按照藥物與載體(1∶7)比例，分別配制成高、中、低3個濃度的供試品溶液，每個濃度平行做3份，共計(jì)9份，在264 nm波長處測定其吸光度，計(jì)算回收率。高、中、低3個濃度的回收率分別為 100.14%、100.49%、100.88%，RSD 均小于2%，表明回收率良好。

2.2.4 精密度試驗(yàn) 精密量取瑞戈非尼儲備液1mL，置50mL量瓶中，加入pH 4.5醋酸鹽緩沖液(0.1%SDS)定容，搖勻，連續(xù)測定6次吸光度，計(jì)算RSD為0.31%(n=6)，小于2%，表明紫外測定方法精密度好，穩(wěn)定可靠。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取精密度項(xiàng)下樣品，分別放置0、1、2、3、5、7 h 測定吸光度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)吸光度無明顯變化，RSD為0.69%，表明供試品溶液在7 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.6 溶出度測定 體外溶出度依據(jù)《中國藥典》2010年版(二部)附錄Ⅹ C溶出度測定第二法(槳法)［12］進(jìn)行測定。精密稱取瑞戈非尼原料藥40mg、瑞戈非尼－PVP K30物理混合物(相當(dāng)于主藥量40mg)、瑞戈非尼－PVP K30 SD適量(相當(dāng)于主藥量 40mg)，以 900mL pH 4.5醋酸鹽緩沖液(0.1%SDS)為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為75 rpm，溫度為37±0.5 ℃。分別于5、10、15、30、45、60min 定時取樣10mL，同時補(bǔ)加等溫溶出介質(zhì)10mL。取出液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液適量，稀釋后搖勻，作為供試品溶液。在264 nm波長處測定各吸光度值，計(jì)算藥物累積溶出度，繪制溶出曲線。

2.3 XRD試驗(yàn) 測試條件:管電壓40 kV，管電流40 mA，X光管為 Cu靶，鎳濾色片，波長1.54060埃;步長 0.05°;掃描速度 39.1001 s;掃描范圍為3.0231°～59.9731°。

分別取瑞戈非尼原料藥、PVP K30、瑞戈非尼與PVP K30的物理混合物和SD(1∶7)進(jìn)行X－射線粉末衍射分析。

3 結(jié)果

3.1 溶出度 瑞戈非尼原料藥、瑞戈非尼－PVP K30物理混合物及瑞戈非尼－PVP K30 SD溶出曲線見圖1。

圖1 瑞戈非尼原料藥、瑞戈非尼－PVP K30物理混合物及SD的溶出曲線圖

體外溶出試驗(yàn)中，瑞戈非尼原料藥和物理混合物的累積溶出度在30min時均在10%以下，瑞戈非尼 SD(1∶1、1∶3、1∶5、1∶7 和 1∶9)的累積溶出度在 30min時分別高達(dá)67%、83%、87.0%、91%和90%，表明SD在pH 4.5醋酸鹽緩沖液(0.1%SDS)中的溶出度均顯著大于瑞戈非尼原料藥和物理混合物的溶出度。根據(jù)SD的溶出度結(jié)果，選擇1∶7作為較佳比例進(jìn)一步考察藥物在SD中的存在狀態(tài)。

3.2 XRD分析 瑞戈非尼原料藥、PVP K30、瑞戈非尼－PVP K30(1∶7)物理混合物及瑞戈非尼 －PVP K30(1∶7)SD的XRD圖譜見圖2。

圖2 粉末X射線衍射圖譜

從圖2可見，瑞戈非尼原料藥(圖2a)晶體衍射峰明顯，特征衍射峰有 2θ =5.9°、11.8°、14.8°、16.1°、17.2°、17.7°、21.1°、23.7°、27.1°、29.8°、30.0°;載體PVP K30(圖2b)沒有明顯的衍射峰，為無定形物;在瑞戈非尼－PVP K30物理混合物(圖2c)中可清晰的看到藥物的特征吸收峰仍存在，只是強(qiáng)度有所降低，說明藥物仍以晶體形式存在于其中;而SD(圖2d)的特征吸收峰基本消失，表明藥物形成SD后，PVP K30對藥物有抑晶作用，藥物以無定形態(tài)存在，失去了原有的晶體結(jié)構(gòu)，高度分散在載體之中。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，將藥物制備成SD后，能夠顯著提高藥物的溶出度。

4 討論

載體PVP具有極強(qiáng)的親水性和水溶性，且具有特殊的電子供體結(jié)構(gòu)，在溶劑蒸發(fā)過程中，藥物與PVP之間生成氫鍵或配合作用，粘度增大而抑制藥物晶核的形成及生長，使藥物以分子狀態(tài)或無定形態(tài)分散于載體中，從而提高藥物的溶出度。

本研究以PVP K30為載體，采用溶劑法制備瑞戈非尼SD，分別測定瑞戈非尼原料藥、物理混合物及不同藥物－載體比例的SD的溶出度，并考察藥物－載體比例(1∶7)的XRD。溶出曲線測定結(jié)果表明，SD的溶出度較原料藥和物理混合物的溶出度顯著提高;XRD測定結(jié)果顯示，SD的特征吸收峰與原料藥比較基本消失，表明藥物以無定形態(tài)分散在水溶性載體物質(zhì)中。因此，上述結(jié)果表明，SD保證了藥物的高度分散性，增加其與溶劑的接觸面積，同時可以抑制藥物晶核的形成和生長，顯著改善其體外溶出，從而提高產(chǎn)品的生物利用度。

綜上所述，瑞戈非尼制備成固體分散體后，能顯著增加其體外溶出度，從而提高生物利用度。

［1］Wilhelm SM，Dumas J，Adnane L，et al.Regorafenib(BAY 73－4506):a new oral multikinase inhibitor of angiogenic，stromal and oncogenic receptor tyrosine kinases with potent preclinical antitumor activity［J］.Int J Cancer，2011，129(1):245 －255.

［2］李進(jìn).新型口服多激酶抑制劑瑞戈非尼治療癌癥的研究進(jìn)展［J］.臨床腫瘤學(xué)雜志，2014，19(5):385 －390.

［3］Grothey A，Van Cutsem E，Sobrero A，et al.Regorafenib monotherapy for previously treated metastatic colorectal cancer(CORRECT):an international，multicentre，randomised，placebo－controlled，phase 3 trial［J］.Lancet，2013，381(9863):303 －312.

［4］Demetri GD，Reichardt P，Kang YK，et al.Efficacy and safety of regorafenib for advanced gastrointestinal stromal tumours after failure of imatinib and sunitinib(GRID):an international，multicentre，randomised，plecebo－controlled，phase 3 trial［J］.Lancet，2013，381(9863):295 －302.

［5］瑞戈非尼可治療轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌［J］.中華結(jié)直腸疾病電子雜志，2014，3(6):504.

［6］崔福德.藥劑學(xué)［M］.第7版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2011，348 －350.

［7］劉善峰，徐愛霞，李葉桓，等.氟比洛芬聚丙烯酸樹脂RL/RS固體分散體的制備［J］.藥學(xué)研究，2014，33(3):155－157.

［8］李潔娜，趙志娟，丁紅，等.吲達(dá)帕胺固體分散體的制備及體外溶出特性考察［J］.中國藥物與臨床，2012，12(6):764－765.

［9］周亞健，夏瑜梓，王華，等.硝苯地平固體分散體的制備及其溶出速率測定［J］.海峽藥學(xué)，2013，25(4):11－12.

［10］王悅，劉歡，王成港，等.阿折地平固體分散體的制備及溶出度的考察［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2012，9(24):118－120.

［11］郭波紅，黃嘉敏，李曉芳，等.頭孢地尼－聚乙烯吡咯烷酮固體分散體的制備［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報，2013，32(8):1072－1075.

［12］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(二部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:85－86.