李菊平，劉效平，金永亮

(1.山東大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250012;2.壽光富康制藥有限公司，山東 濰坊 262700;3.西北農(nóng)林科技大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712100)

在奧美拉唑鎂工藝合成中使用了醋酸［1～4］調(diào)節(jié)pH，醋酸殘留在文獻(xiàn)中一般采用氣相色譜法［5～9］測(cè)定醋酸的殘留，但在試驗(yàn)過程發(fā)現(xiàn)氣相色譜GCFID色譜條件下方法的冰醋酸的響應(yīng)值很小，且重現(xiàn)性受GC色譜條件如溶劑、不同批次的色譜柱、不同品牌的儀器靈敏度影響大。因此我們使用更為穩(wěn)定的高效液相色譜法(HPLC)系統(tǒng)使用外標(biāo)法對(duì)奧美拉唑鎂冰醋酸的殘留進(jìn)行控制，由于奧美拉唑在此波長(zhǎng)210 nm下沒有吸收，因此對(duì)冰醋酸的吸收峰沒有干擾，且在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，若成品中的醋酸殘留超過0.05%很容易使奧美拉唑鎂降解［2］，UV吸光度變化明顯，導(dǎo)致藥物不穩(wěn)定，《中國(guó)藥典》2015年版［10］和人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)中均將醋酸列為三類溶劑，因此需要對(duì)它的殘留量進(jìn)行檢測(cè)［11］。文獻(xiàn)沒有用HPLC法C18色譜柱進(jìn)行檢測(cè)原料藥中醋酸的報(bào)道，相對(duì)于已有的離子色譜法［12］，C18色譜柱比離子色譜柱更耐用、更穩(wěn)定。本文建立了HPLC方法C18色譜柱測(cè)定醋酸在奧美拉唑鎂的殘留，方法靈敏，色譜柱耗材易于采購(gòu)，穩(wěn)定性好，檢測(cè)成本低，操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，方法重現(xiàn)性好 符合《中國(guó)藥典》2015年版［10］的有關(guān)規(guī)定。

1 儀器與試藥

Agilent 1200液相色譜儀，UV檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，X －Bridge TM C18(4.6mm ×250mm，5μm)色譜柱;奧美拉唑鎂原料藥(壽光富康制藥有限公司，批號(hào):52111505001、52111505002、52111505003)。

2 方法

2.1 色譜條件 色譜柱:X－Bridge C18(4.6mm×250mm，5μm)檢測(cè)波長(zhǎng):210nm;流速:1.2mL·min－1;進(jìn)樣量:20μL;柱溫:35 ℃;流動(dòng)相:0.07%磷酸溶液(用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至3.0):甲醇 =950∶50;溶媒:50%甲醇。

2.2 方法 標(biāo)準(zhǔn)貯備液:取醋酸100mg，精密稱定，置于100mL容量瓶中，用溶媒稀釋至刻度。

對(duì)照品溶液:準(zhǔn)確量取5mL標(biāo)準(zhǔn)貯備液置于100mL容量瓶中，用溶媒稀釋至100mL。

供試品溶液:稱取樣品1.0g，精密稱定，置于10mL容量瓶中，用溶媒溶解，漩渦振蕩器振蕩1min，混合均勻，用溶媒稀釋至刻度，微孔濾膜過濾。

系統(tǒng)適用性:①對(duì)照溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，RSD≤2%;②分離度溶液中雜質(zhì)峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于1.5。圖譜見圖1。

外標(biāo)法計(jì)算:奧美拉唑鎂中殘留的醋酸不得超過0.05%(即10%的ICH限度)。

圖1 HPLC圖譜

2.3 線性關(guān)系考察 分別精密量取“2.2”項(xiàng)下的標(biāo)注貯備液1、2、4、5、6mL 分置于5 個(gè)100mL 容量瓶中，分別用溶媒稀釋至100mL，搖勻，得系列濃度的溶液，按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，分別以濃度X(mg·mL－1)為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，醋酸在其濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好)。線性方程為:Y=0.01209X+582.94186;相關(guān)系數(shù) r=0.999994。結(jié)果:冰醋酸檢測(cè)濃度線性范圍為0.01 ～0.06mg·mL－1。

2.4 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照溶液，按，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，醋酸峰面積的檢測(cè)結(jié)果為29.82、29.26、28.51、28.74、29.62、28.58，平均值為29.09，RSD 為1.92%，精密度良好。

2.5 檢測(cè)限定量限試驗(yàn) 將對(duì)照品濃溶液逐級(jí)稀釋后，依法測(cè)定，直至信噪比 S/N=10.4 不低于10∶1，所得的最低檢測(cè)濃度即為定量限度 25.0 μg·mL－1(250 ppm);直至信噪比 S/N=3.1 不低于3∶1，所得的最低檢測(cè)濃度即為檢測(cè)限度 5.0 μg·mL－1(50 ppm)，且檢測(cè)限低于定量限的30%。

2.6 回收率試驗(yàn) 分別稱取奧美拉唑鎂(批號(hào):52111505001)5 g，精密稱定，置于9個(gè)50mL容量瓶中，按照限度要求對(duì)限度濃度的80%、100%、120%3個(gè)水平對(duì)9份樣品進(jìn)行加標(biāo)，即加入4、5、6mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，每個(gè)水平濃度重復(fù)3次，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算醋酸的回收率和RSD，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，3個(gè)濃度下方法的回收率滿足要求。

2.7 樣品測(cè)定 分別量取對(duì)照溶液和供試品溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中醋酸的殘留，結(jié)果3批樣品(批號(hào):52111505001、52111505002、52111505003)均未檢出。

3 討論

冰醋酸在奧美拉唑鎂的工藝中既是反應(yīng)物又調(diào)節(jié)pH值，酸性物質(zhì)的存在會(huì)對(duì)奧美拉唑鎂的穩(wěn)定性產(chǎn)生影響，酸性條件下產(chǎn)品很容易降解，為增加產(chǎn)品的穩(wěn)定性，需要用穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)的方法對(duì)冰醋酸在原料藥奧美拉唑鎂中的殘留進(jìn)行嚴(yán)格控制?！吨袊?guó)藥典》2015年版和人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)中均將醋酸列為三類溶劑，殘留限度是5000 ppm。用常規(guī)的頂空－氣相色譜(HS－GC)法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其峰面積響應(yīng)值很小，信噪比S/N低于3.0;而用氣相色譜－質(zhì)譜(GC－MS)檢測(cè)會(huì)增加產(chǎn)品的檢測(cè)成本。因此我們開發(fā)HPLC法對(duì)冰醋酸的殘留進(jìn)行控制，冰醋酸能夠與奧美拉唑鎂中的可檢測(cè)組分完全分離，準(zhǔn)確度高，并且檢測(cè)成本低。雖然法定限度是NMT 5000 ppm，但我們對(duì)冰醋酸制定了更嚴(yán)格的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)NMT 500 ppm(10%的ICH限度)，保證了產(chǎn)品在整個(gè)生命周期內(nèi)的穩(wěn)定性。

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