陳騰蛟，徐 男

(1.棗莊市嶧城區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局，山東 棗莊 277300;2.山東中醫(yī)藥研究院，國家中醫(yī)藥管理局中藥分析重點(diǎn)學(xué)科，山東 濟(jì)南 250014)

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為高脂血癥與中醫(yī)的痰濁密切相關(guān)，而對(duì)于痰濁的認(rèn)識(shí)，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)家張景岳曰:“痰涎之化本由水谷，使脾強(qiáng)胃健如少壯者流，隨食隨化皆成血?dú)猓傻昧舳鵀樘怠?。可見痰是由津液不行，自積而成。高血壓病與高脂血癥密切相關(guān)，脂質(zhì)代謝異常也可促進(jìn)高血壓病的形成，高血壓病痰濕壅盛型易伴發(fā)高脂血癥。目前各種自發(fā)性高血壓動(dòng)物模型非常駁雜，故以飲食誘導(dǎo)構(gòu)建方法［1］，規(guī)范建立符合中醫(yī)痰濕壅盛型高血壓特征的大鼠模型。

1 材料和方法

1.1 儀器與材料 BP－6型動(dòng)物無創(chuàng)血壓測試儀(成都泰盟科技有限公司);DDL－5低速冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);Beckman CX7全自動(dòng)生化分析儀(美國貝克曼庫爾特公司);Cobase411全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀(電化學(xué)發(fā)光免疫檢測儀器，美國羅氏診斷有限公司);LXJ－Ⅱ型離心沉淀機(jī)(上海第三分析儀器廠);BL－420E+型生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(四川成都泰盟電子公司);雙河顆粒飼料機(jī)KL－A型(浙江余杭);全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司);血清超濾器(上海德宏生物醫(yī)學(xué)科技發(fā)展有限公司);ACS－6型電子秤(山東濟(jì)南風(fēng)華電子衡器有限公司);游標(biāo)卡尺(中國寧波量具一廠);定量取液器(上海金林生化試劑儀器廠);環(huán)形塑料管。

雄性Wistar大鼠，體重180～200g(由山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證編號(hào):SCXR〈魯〉20090012);自制造模飼料。

1.2 檢測項(xiàng)目及方法［2～4］

1.2.1 宏觀表現(xiàn) 檢測實(shí)驗(yàn)大鼠的體重并觀察大鼠的皮毛、活動(dòng)度(包括納呆、嗜睡、懶動(dòng)、不思飲水、大便不成形等)。

1.2.2 體重 實(shí)驗(yàn)期間，每2周于進(jìn)食前稱取體重。

1.2.3 血壓的測定［5］采用BP－6無創(chuàng)運(yùn)動(dòng)血壓儀測量收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)。

1.2.4 生化指標(biāo)的測定［6］用10%的水合氯醛溶液腹腔注射麻醉，剖開腹腔，肝門靜脈取血，全血分別置于EP管中，4℃離心(3500 rpm，20min)。用全自動(dòng)生化分析儀測血脂(血清總膽固醇CHO、三酰甘油 TG、高密度脂蛋白 HDL、低密度脂蛋白LDL)、血糖GLΜ;用電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測空腹血胰島素FINS;GLM與FINS乘積的倒數(shù)為胰島素敏感指數(shù)ISI，計(jì)算ISI。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 健康雄性Wistar大鼠40只，隨機(jī)分為4組:普通膳食對(duì)照組(NC)、高脂膳食組(FN)、高脂高鹽膳食組(FS)、高脂高糖膳食組(MS)，每組10只。分籠喂養(yǎng)，自由攝食飲水。每日早晚喂食，隔日換水。每日明暗時(shí)間間隔12 h，室溫控制在25℃，濕度50%左右。對(duì)照組喂普通飼料，模型組分別喂高脂飼料、高脂高鹽飼料、高脂高糖飼料。

4組大鼠持續(xù)喂養(yǎng)16周，每隔2周測量體重、空腹血糖GLM，并測量尾動(dòng)脈收縮壓、舒張壓。16周時(shí)取尾靜脈血測定空腹胰島素FINS、血脂(血清總膽固醇CHO、三酰甘油TG、高密度脂蛋白HDL、低密度脂蛋白LDL);計(jì)算胰島素敏感指數(shù)ISI;肝組織經(jīng)石蠟切片HE染色后觀察肝組織病理學(xué)變化。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 宏觀表現(xiàn) 模型組大鼠出現(xiàn)行動(dòng)遲緩，納呆，嗜睡，懶動(dòng)，不思飲水，大便不成形等癥狀，出現(xiàn)的癥狀例數(shù)FS組＞MS組＞FN組＞NC組。毛發(fā)的顏色無明顯差異。

2.2 實(shí)驗(yàn)大鼠體重、收縮壓、舒張壓、空腹血糖的測定［7，8］FN組大鼠體重從第8周開始超過對(duì)照組，其他模型組體重從第10周開始顯著均超過對(duì)照組(P＜0.01);血壓從第8周至第16周，F(xiàn)S組、FN組、MS組大鼠較對(duì)照組收縮壓和舒張壓均顯著增加(P＜0.01);空腹血糖MS組從第6周較對(duì)照組顯著升高(P＜0.01);FN組、FS組較對(duì)照組從第10周開始升高(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)大鼠體重、收縮壓、舒張壓、空腹血糖變化見表1～4。

表1 實(shí)驗(yàn)大鼠體重(g)的比較

表2 實(shí)驗(yàn)大鼠收縮壓(mmHg)的比較

表3 實(shí)驗(yàn)大鼠舒張壓(mmHg)的比較

表4 實(shí)驗(yàn)大鼠空腹血糖(mmol·L－1)的比較

2.3 實(shí)驗(yàn)大鼠各項(xiàng)生化指標(biāo)的測定［9］16周時(shí)大鼠血脂(血清總膽固醇CHO、三酰甘油TG、高密度脂蛋白HDL、低密度脂蛋白LDL)、血糖GLM、空腹胰島素FINS和胰島素敏感指數(shù)ISI的測定結(jié)果，見表5。

表5 實(shí)驗(yàn)大鼠各項(xiàng)生化指標(biāo)的比較

根據(jù)《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》關(guān)于“治療高血壓病的臨床研究指導(dǎo)原則”確定的辨證標(biāo)準(zhǔn)，“眩暈頭痛、頭重如裹、胸悶腹脹、心悸失眠、口淡食少、嘔吐痰延、舌苔白膩、脈滑”。綜合考慮痰濕壅盛型高血壓辨證分型與血脂、血糖和胰島素敏感性的關(guān)系，參照2005年國際糖尿病聯(lián)盟(IDF)提出的人類代謝綜合征診斷標(biāo)準(zhǔn)，確定收縮壓≥140mmHg和/或舒張壓≥90mmHg。中心性肥胖以模型組大鼠的體重大于NC組平均體重+2倍標(biāo)準(zhǔn)差，甘油三酯、低密度脂蛋白大于NC組平均值+2倍標(biāo)準(zhǔn)差，高密度脂蛋白低于NC組平均值－2倍標(biāo)準(zhǔn)差;同時(shí)形體肥胖，體重明顯增加，納呆嗜睡，懶動(dòng)，不思飲水，大便不成形者為痰濕壅盛型高血壓大鼠動(dòng)物模型［10，11］。

3 討論

3.1 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果并計(jì)算成模率，各模型組大鼠均出現(xiàn)高脂血癥特征，但出現(xiàn)高血壓特征僅有FS組成模率能滿足實(shí)驗(yàn)要求，確定高脂高鹽膳食喂養(yǎng)16周大鼠作為痰濕壅盛型動(dòng)物模型。

3.2 《丹溪心法·頭眩》云:“無痰不作?！?。痰濕也是高血壓發(fā)病重要病機(jī)之一。在高血壓病的發(fā)病中，中醫(yī)以五臟為中心的理論，將高血壓病的病位認(rèn)定為肝、脾，繼而影響至心、腎，最終導(dǎo)致心、肝、脾、腎諸臟俱損。肝失疏泄，膽汁排泄不利，可導(dǎo)致脂膏蓄積，形成高脂血癥。而由于脂膏蓄積，不能為人體所用，又可導(dǎo)致肝腎因得不到精微物質(zhì)的充養(yǎng)而虛損，以致引起高血壓病。這是高脂血癥引起高血壓病的病機(jī)之一。若各種致病因素?fù)p害了腎的功能，引起腎陰不足，下焦虛衰，使之不能化氣行水，清從濁化，形成痰濁。痰濁痹阻，既可導(dǎo)致清陽不升，引起高血壓病，又可造成形體肥胖，形成高脂血癥。另外，若脾失健運(yùn)，津液不歸正化，亦可導(dǎo)致濁脂生痰，痰濁中阻從而引起高血壓病和高脂血癥?？梢姡禎崾歉哐獕翰『透咧Y的共同致病因素。研究證實(shí)，血清膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白含量的升高是“痰濁”特有的重要生化指標(biāo)和物質(zhì)基礎(chǔ)［12］。

3.3 糖尿病病程長久，耗陰傷津，可使肝腎精血不足，髓海不充，引發(fā)為高血壓病。若糖尿病患者肝氣郁結(jié)，氣郁化火，肝陰耗傷，肝陽上亢而致高血壓病。中醫(yī)認(rèn)為高血壓并發(fā)糖尿病屬于陰虛陽亢型高血壓。高脂高糖飲食誘導(dǎo)的大鼠模型可作為代謝綜合征模型。血壓病、糖尿病及高脂血癥是代謝綜合征的3個(gè)重要方面，高脂高糖飲食可誘導(dǎo)大鼠形成代謝綜合征腎病模型［13］。代謝綜合征和中醫(yī)痰濕壅盛不是等同的關(guān)系。血壓病、糖尿病及高脂血癥是代謝綜合征的3個(gè)重要方面，高血壓病患者常伴發(fā)糖尿病及高脂血癥，但又并不是每個(gè)高血壓病患者均會(huì)發(fā)生糖尿病或高脂血癥。結(jié)合臨床調(diào)查結(jié)果，糖尿病患者在高血壓中醫(yī)證型的比重均呈現(xiàn)出“陰陽兩虛和(或)陰虛陽亢＞痰濕壅盛＞肝火亢盛”的特點(diǎn)，并發(fā)高脂血癥的患者中，痰濕壅盛證的比重最高［14～16］。

3.4 高血壓動(dòng)物模型除遺傳性外，目前文獻(xiàn)報(bào)道有關(guān)高血壓實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕⒎椒ㄓ泻芏?，包括遺傳、外科干預(yù)或藥物誘導(dǎo)等。但上述方法建立的高血壓模型，只是具備了高血壓的臨床特征，其發(fā)病過程與人類的高血壓發(fā)生的自然病程有一定的差距。本實(shí)驗(yàn)通過高脂、高脂高鹽、高脂高糖飲食誘導(dǎo)，優(yōu)選最符合中醫(yī)痰濕壅盛型高血壓動(dòng)物模型的方法。通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，高脂飲食可誘導(dǎo)痰濕證動(dòng)物模型［16］;高脂高糖飲食可誘導(dǎo)建立大鼠痰濕壅盛型糖尿病模型［17］;高脂組、高脂高糖組血壓均有上升，但成模率低，無法滿足實(shí)驗(yàn)要求，不能獲得穩(wěn)定的高血壓模型。模型組大鼠空腹血糖均出現(xiàn)不同程度的升高，其中高脂高糖組升高極為顯著，有糖尿病并發(fā)癥。

3.5 高血壓病多屬中醫(yī)“眩暈”“頭痛”范疇，不同中醫(yī)證型間鹽敏感性有較大差異，有研究顯示，依“陰陽兩虛證、陰虛陽亢證、肝火亢盛證、痰濕壅盛證”順序鹽敏感性逐漸增強(qiáng)［18，19］，以痰濕壅盛證的鹽敏感性最高。并且高血壓病中醫(yī)證型與血脂也有密切關(guān)系，以痰濕壅盛證的血脂異常較為明顯［20，21］。過食食鹽的鹽敏感者中肝火上炎證及痰濕中阻證要顯著多于其他非過食食鹽的鹽敏感者及鹽不敏感者［22］。

因此，確定高脂高鹽飲食誘導(dǎo)建立痰濕壅盛型高血壓大鼠動(dòng)物模型，出現(xiàn)行動(dòng)遲緩，納呆，嗜睡，懶動(dòng)，不思飲水，大便不成形等癥狀;肝細(xì)胞腫脹，細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)大小不等的脂滴空泡，以大泡性脂肪滴為主，居核邊，細(xì)胞界限不清，肝竇狹窄，存在小葉內(nèi)及匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤，部分出現(xiàn)點(diǎn)片狀、碎屑樣壞死;體重、血糖、空腹胰島素比對(duì)照組均有顯著性差異，血脂水平升高，出現(xiàn)胰島素抵抗，血壓普遍升高，符合中醫(yī)痰濕壅盛型高血壓的辨證分型特點(diǎn)，成模率較高，滿足實(shí)驗(yàn)要求。

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