趙士琛 等

摘要[目的]對(duì)蠶蛹油乙酯進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。 [方法]采用最大耐受量法進(jìn)行急性經(jīng)口毒性評(píng)價(jià)，并采用Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和小鼠精子畸變?cè)囼?yàn)進(jìn)行蠶蛹油乙酯的遺傳毒性研究，并開展大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)。 [結(jié)果] 蠶蛹油乙酯經(jīng)急性經(jīng)口毒性評(píng)價(jià)為實(shí)際無毒級(jí)物質(zhì)；Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和小鼠精子畸變?cè)囼?yàn)均未發(fā)現(xiàn)蠶蛹油乙酯有顯著的遺傳毒性；大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組大鼠生長發(fā)育良好，無異常行為和中毒癥狀。 [結(jié)論]蠶蛹油乙酯為實(shí)際無毒物，無遺傳毒性，可長期服用。

關(guān)鍵詞蠶蛹油乙酯；安全性；評(píng)價(jià)

中圖分類號(hào)S88-9文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2015）28-139-03

Study on Toxicological Safety Evaluation of Ethyl Silkworm Oil

ZHAO Shichen， WU Yonghua， CHEN Shanglong et al

（Xuzhou Institute of Technology， Xuzhou， Jiangsu 221111）

Abstract[Objective] To assess the toxicological safety of ethyl silkworm oil. [Method] Acute toxicity test， genetic toxicity test （Ames test， micronucleus test of born marrow in mice， sperm shapeabnormality test in mice） and thirtyday feeding test in rats were used in this study according to the procedures for toxicological assessment of food. [Result] The maximum tolerated dose（MTD） of ethyl silkworm oil on male and female mice were all larger than 17.56 g/kg.The results of Ames test， mouse bone marrow micronucleus test and detection of chromosome aberration experiment were negative. No significant toxicity was observed by 30day feeding experiment. [Conclusion] Ethyl silkworm oil is highly safe with neither acute toxicity nor genotoxicity.

Key wordsEthyl silkworm oil； Safety； Assessment

蠶蛹是一種繅絲副產(chǎn)品，通常被作為飼料或肥料利用，在我國某些地區(qū)也有食用蠶蛹的悠久歷史。由于蠶蛹富含蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸等成分，近年來對(duì)蠶蛹的研究已經(jīng)引起國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注[1]。目前對(duì)蠶蛹的研究主要集中在對(duì)蠶蛹蛋白、肽和油脂的提取、分析檢測及相關(guān)生物活性等方面。邱英華等[2]對(duì)蠶蛹蛋白提取與脫臭工藝進(jìn)行了研究，最終利用蠶蛹制得灰白色無嗅可滿足食品級(jí)要求的蛋白粉末。許強(qiáng)華等[3]將蠶蛹蛋白與畜禽肉蛋白營養(yǎng)差異進(jìn)行了比較與探討，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蠶蛹蛋白是一種非常優(yōu)質(zhì)的蛋白來源。吳瓊英等[4]對(duì)繅絲蠶蛹中的水溶性和堿溶性蛋白組分進(jìn)行營養(yǎng)學(xué)評(píng)價(jià)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蠶蛹蛋白水溶性和堿溶性組分中的氨基酸種類齊全，并且發(fā)現(xiàn)蠶蛹的水溶性蛋白和堿溶性蛋白的堿性蛋白酶酶解產(chǎn)物均具有較強(qiáng)的ACE抑制活性。徐家玉等[5]對(duì)蠶蛹蛋白緩解運(yùn)動(dòng)性疲勞的作用進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蠶蛹蛋白具有緩解運(yùn)動(dòng)性疲勞的作用。賈俊強(qiáng)等[6]、潘文娟等[7]和張研宇等[8]對(duì)蠶蛹油脂肪酸組成進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)蠶蛹油富含大量不飽和脂肪酸。張岫美等[9]蠶蛹油α亞麻酸提取工藝進(jìn)行了研究。

近年來，也有部分學(xué)者對(duì)蠶蛹進(jìn)行深加工以制備生物活性物質(zhì)。張明春等[10]采用酶解與膜法聯(lián)用分離制備得到蠶蛹生物活性肽，并且發(fā)現(xiàn)該肽對(duì)糖分解代謝丙酮酸生成有促進(jìn)作用。施英等[11]制備了蠶蛹油微膠囊。雖然對(duì)蠶蛹進(jìn)行了大量研究，但尚未見對(duì)蠶蛹油乙酯系統(tǒng)安全性評(píng)價(jià)的相關(guān)報(bào)道。筆者參照GB 15193.1-2014《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》對(duì)蠶蛹油乙酯進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)[12]，以望為蠶蛹油乙酯的開發(fā)利用提供一定的研究基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1受試物。蠶蛹油乙酯樣品由南通福爾生物制品有限公司提供，樣品通過蠶蛹油與食用乙醇酯進(jìn)行交換反應(yīng)得到，蠶蛹油乙酯的主要成分為亞麻酸乙酯。

1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。SPF級(jí)昆明種小鼠和SD大鼠。

1.1.3試驗(yàn)菌株。鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102試驗(yàn)菌株，由湖南省疾病控防中心提供。

1.2主要試劑多氯聯(lián)苯（分析純）；甲醇（分析純）；二甲基亞砜（DMSO，分析純）；血液生化指標(biāo)檢測試劑盒。

1.3主要儀器貝克曼DXC800全自動(dòng)生化分析儀，美國；OLYMPUS 顯微鏡，型號(hào)為CH20，日本；梅特勒托利多電子分析天平，型號(hào)XPE105，瑞士；酶標(biāo)儀Spectra Max M2，美國。

1.4試驗(yàn)方法

1.4.1小鼠經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)。試驗(yàn)參照GB 15193.1-2014《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》進(jìn)行 [12]，采用最大耐受劑量法。選用體重為18～22 g的SPF級(jí)昆明種小鼠20只，雌雄各半，一次經(jīng)口灌胃， 灌胃后觀察2周內(nèi)死亡動(dòng)物數(shù)及動(dòng)物的機(jī)體健康情況。

1.4.2遺傳毒性試驗(yàn)。

1.4.2.1Ames試驗(yàn)。參照GB 15193.1-2014《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》進(jìn)行[12]。試驗(yàn)采用鼠傷寒沙門菌組氨酸缺陷型試驗(yàn)菌株進(jìn)行試驗(yàn)，設(shè)5 000、1 000、200、40和8 μg/皿5個(gè)劑量組，每個(gè)劑量3個(gè)重復(fù)，平行試驗(yàn)1次。

1.4.2.2小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)。參照GB 15193.1-2014《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》進(jìn)行[12]。采用間隔24 h 2次經(jīng)口灌胃法進(jìn)行試驗(yàn)。以40 mg/（kg·bw）劑量的環(huán)磷酰胺為陽性對(duì)照，食用植物油為陰性對(duì)照。試驗(yàn)組高、中、低3個(gè)劑量分別為10.00、5.00和2.50 g/（kg·bw）。采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析。

1.4.2.3小鼠精子畸變?cè)囼?yàn)。參照GB 15193.1-2014《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》進(jìn)行[12]。以40 mg/（kg·bw）劑量的環(huán)磷酰胺為陽性對(duì)照，以食用植物油為陰性對(duì)照。試驗(yàn)組高、中、低3個(gè)劑量分別為10.00、5.00和2.50 g/（kg·bw），相應(yīng)劑量的受試液采用灌胃方式給小鼠給藥。每天灌胃1次，連續(xù)5 d，于末次灌胃后的第30天處死動(dòng)物，取雙側(cè)副睪，取精子制成涂片，染色后顯微觀察統(tǒng)計(jì)畸變精子發(fā)生率。

1.4.3大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)。取SD大鼠80只，雌雄各半，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為4組：對(duì)照組及3個(gè)受試物組，每組20只，雌雄各半。設(shè)置樣品低、中、高劑量分別為1.25、2.50和5.00 g/（kg·bw）（相當(dāng)于人體推薦劑量的25、50、100倍）。采取將樣品摻入飼料中給樣，對(duì)照組給予基礎(chǔ)飼料，連續(xù)30 d。

眼內(nèi)瞼取血測定血紅蛋白含量、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)及白細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞分類等血液學(xué)指標(biāo)。取血清測定天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）、血糖（GLU）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（CHO）、總蛋白（TP）和白蛋白（ALB）等生化指標(biāo)。

1.4.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析。

2結(jié)果與分析

2.1小鼠的急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)試驗(yàn)過程中試驗(yàn)組小鼠，采食、活動(dòng)均未發(fā)現(xiàn)有顯著影響。由表1可知，以17.56 g/（kg·bw）劑量的樣品給不同性別的昆明種小鼠灌胃后未見明顯中毒癥狀，14 d內(nèi)無死亡。試驗(yàn)?zāi)⑹茉噭?dòng)物處死進(jìn)行解剖檢查，肝、脾、腎、胃、腸、心、肺等主要臟器，未見明顯異常改變。樣品對(duì)雌、雄昆明種小鼠的最大受劑量（MTD）大于17.56 g/（kg·bw）。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》中的急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，屬無毒級(jí)[13]。

2.2遺傳毒性試驗(yàn)

2.2.1Ames試驗(yàn)。供試品對(duì)TA97、TA98、TA100、TA102 標(biāo)準(zhǔn)菌株在有無S9混合液條件下均未引起基因組堿基置換或移碼突變，與自發(fā)回變組相同（P >0.05），而與陽性對(duì)照組相比差異級(jí)顯著（P < 0.01）。由表2可知，蠶蛹油乙酯樣品的Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

2.2.2小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)。按照“1.4.2”中方法進(jìn)行小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)。由表3可知，各劑量組微核率與陰性對(duì)照組相比均無顯著性差異（P>0.05），而環(huán)磷酰胺組與陰性對(duì)照組相比有極顯著性差異（P<0.01）。這表明蠶蛹油乙酯對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

2.3.2血液生化學(xué)測定結(jié)果。

由表7可知，各劑量組雌雄大鼠的總蛋白、白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐、血糖、膽固醇及甘油三酯與對(duì)照組相比均無顯著差異（P>0.05），說明產(chǎn)品未對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)產(chǎn)生顯著影響。

3結(jié)論與討論

蠶蛹油具有改善記憶、抗血栓形成和治療高脂高糖誘導(dǎo)的大鼠脂肪性肝炎等作用，對(duì)蠶蛹油的研究已有不少報(bào)道[14-16]。蠶蛹油乙酯是從蠶蛹中提取蠶蛹油，再經(jīng)過酯交換方法得到的，其主要成分為亞麻酸乙酯。筆者通過對(duì)蠶蛹油乙酯的安全性評(píng)價(jià)，結(jié)果表明蠶蛹油乙酯對(duì)昆明種雌、雄小鼠的最大耐受劑量（MTD）均大于17.56 g/（kg·bw），屬于實(shí)際無毒級(jí)；遺傳毒性試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸變?cè)囼?yàn)）結(jié)果均為陰性，說明蠶蛹油乙酯無遺傳毒性；大鼠30 d喂飼期間動(dòng)物生長發(fā)育良好，蠶蛹油乙酯對(duì)大鼠體重、血液生化指標(biāo)等均無顯著性影響（P>0.05）。綜上所述，蠶蛹油乙酯屬于無毒級(jí)產(chǎn)品，可長期服用。

參考文獻(xiàn)

[1] 王彥平，劉潔，吳予明.蠶蛹的營養(yǎng)成分分析[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，44（3）：638-640.

[2] 邱英華，孫衛(wèi)東，王玉海，等.蠶蛹蛋白提取與脫臭工藝研究[J].中國食品添加劑，2012（3）：133-136.

[3] 許強(qiáng)華， 王偉， 楊玉英， 等.蠶蛹蛋白與畜禽肉蛋白營養(yǎng)差異比較與探討[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（6）：1722-1723.

[4] 吳瓊英，徐金玲，賈俊強(qiáng)，等.蠶蛹不同溶解性蛋白的營養(yǎng)學(xué)評(píng)價(jià)及酶解物對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶的抑制活性[J].蠶業(yè)科學(xué)，2011，37（2）：352-357.

[5] 徐家玉， 呂曉華.蠶蛹蛋白緩解運(yùn)動(dòng)性疲勞的實(shí)驗(yàn)研究[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2005，35（12）：2309-2313.

[6] 賈俊強(qiáng)，吳瓊英，杜金娟，等. 超聲波輔助水酶法提取蠶蛹油工藝優(yōu)化及脂肪酸組成分[J].食品科學(xué)，2014，35（16）：52-57.

[7] 潘文娟，方婷婷，廖愛美，等.不同蠶蛹油中脂肪酸的性狀及組分分析[J].食品科學(xué)，2011，32 （4）： 148-151.

[8] 張研宇， 李建科. 蠶蛹油提取、精煉及其脂肪酸組成分析[J].中國油脂，2010，35（6）： 76-79.

[9] 張岫美，鄧樹海， 魏欣冰.蠶蛹油？？-亞麻酸提取工藝研究和成分分析[J].中國生化藥物雜志，2003，24（5）：222-223.

[10] 張明春，韓克勤，張 媛，等.酶解與膜法聯(lián)用制備蠶蛹生物功能活性肽[J]，食品科學(xué)，2005，24（5）：222-224.

[11] 施英，吳娛明，廖森泰，等. 蠶蛹油微膠囊的制備[J].蠶業(yè)科學(xué)，2010，36（5）：875-878.

[12] 中華人民共和國衛(wèi)生部.食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序：GB 15193.1-2003[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2004.

[13] 衛(wèi)生部.保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范[S].中華人民共和國衛(wèi)生部，2003：220.

[14] 鄭鴻雁，昌友權(quán)，曲紅光，等.蠶蛹油抗血栓形成作用研究[J].食品科學(xué)，2005，26（9）：484-486.

[15] 彭欣莉，鄭鴻雁，昌友權(quán)，等.蠶蛹油改善小鼠記憶作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].食品科學(xué)，2005，26（9）：490-493.

[16] 朱增燕，薛潔，亓志剛.蠶蛹油對(duì)高脂高糖誘導(dǎo)大鼠脂肪性肝炎的治療作用研究[J].中國藥理與臨床，2012，28（3）：86-91.