王小敏，王盼盼，薛艷許，魯倩倩，耿 碩，袁亞蘭

(神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 欒城 051430)

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大青葉配方顆粒中靛玉紅含量測定方法驗(yàn)證

王小敏，王盼盼，薛艷許，魯倩倩，耿 碩，袁亞蘭

(神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 欒城 051430)

目的：確定所采用的HPLC法適用于大青葉配方顆粒中靛玉紅的含量檢測。方法：靛玉紅含量測定采用HPLC法，色譜柱：Thermo ODS-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(75∶25)；檢測波長為289nm。對(duì)3個(gè)批次的大青葉配方顆粒進(jìn)行含量測定方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果與結(jié)論：大青葉顆粒中靛玉紅的含量測定可采用HPLC法。

大青葉配方顆粒；靛玉紅； HPLC法；含量測定

大青葉配方顆粒是由大青葉經(jīng)過現(xiàn)代科學(xué)方法精制而成，具有清熱解毒、涼血消斑的作用，用于治療溫病高熱、神昏、發(fā)斑發(fā)疹、痄腮、喉痹、丹毒、癰腫。大青葉為十字花科植物菘藍(lán)IsatisindigoticaFort.的干燥葉[1]，其化學(xué)成分復(fù)雜，含有靛玉紅、靛藍(lán)、扶桑甾醇等多種成分，其活性成分為靛玉紅和靛藍(lán)[2]。藥理研究表明，靛玉紅和靛藍(lán)具有抑菌、抗病毒、解熱抗炎等功效。本文選擇靛玉紅作為指標(biāo)，采用HPLC法進(jìn)行含量測定，控制大青葉配方顆粒的質(zhì)量。

1 材料

1.1 樣品

大青葉配方顆粒(生產(chǎn)廠家：神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司)，批號(hào)14110621、15010121、15010821。規(guī)格：每袋裝1.3g。

1.2 儀器與試藥

高效液相色譜儀(戴安，U3000紫外檢測器，化學(xué)工作站)；電子分析天平(型號(hào)：CPA225D)；甲醇為色譜純(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)、水為純化水，其它試劑均為分析純。靛玉紅對(duì)照品為中國食品藥品檢定研究院提供(批號(hào)110717-200204)。

1.3 色譜條件

色譜柱：Thermo ODS-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(75∶25)；紫外檢測器檢測，檢測波長為289nm。理論塔板數(shù)按靛玉紅峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液制備

精密稱取靛玉紅對(duì)照品0.009 97g、0.009 61g，分別置100mL量瓶中，加甲醇溶液并稀釋至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密量取1mL于50mL量瓶中，加甲醇適量，搖勻，加甲醇溶液并稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液(10℃以下保存)。

2.2 供試品溶液制備

分別取上述三批大青葉配方顆粒適量，批號(hào)4110621：1.014 2g、1.013 2g；批號(hào)15010121：1.004 7g、1.004 1g；批號(hào)15010821：1.023 2g、1.019 6g。精密稱定，各加甲醇25mL，稱定重量，超聲處理30min，放至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 含量測定

精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，測定，即得。上述三批樣品所對(duì)應(yīng)的峰面積測定結(jié)果見表1。含量測定結(jié)果見表2。

表1 不同批號(hào)樣品峰面積測定結(jié)果

表2 含量測定結(jié)果

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

以下均取15010821批大青葉配方顆粒進(jìn)行試驗(yàn)。

2.4.1 重復(fù)性考察 分別取供試品粉末各6份，精密稱定，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行分析，精密吸取對(duì)照品溶液20μL，供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。測得對(duì)照品20μL的平均峰面積為3.824 2；供試品結(jié)果見表3，RSD<2%，表明重復(fù)性良好。

2.4.2 靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密吸取靛玉紅對(duì)照品溶液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、30.0μL注入色譜儀，測定和記錄靛玉紅的面積，峰面積依次為：0.961 72、1.937 25、2.899 84、3.850 72、4.880 03、5.860 65。以面積為縱坐標(biāo)，

以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=101.82X-0.025 5，R2=0.999 9(r=0.999 7)。結(jié)果表明，靛玉紅在0.01～0.06μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

表3 重復(fù)性考察結(jié)果

圖1 靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4.3 陰性對(duì)照試驗(yàn) 按照生產(chǎn)工藝制備陰性樣品，取陰性樣品適量，研細(xì)，精密稱取1.021 5g，各加甲醇25mL，稱定重量，超聲處理30min，放至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得。精密吸取靛玉紅對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液、供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明：陰性對(duì)照無干擾。各樣品溶液HPLC圖譜見圖2-圖4。

圖2 靛玉紅HPLC圖譜

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取15010821批供試品溶液1.001 9g，室溫放置，在不同放置時(shí)間分別取樣測定，按上述色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定，見表4。

2.4.5 回收率試驗(yàn) 分別精密稱取供試品適量，精密加入定量的靛玉紅對(duì)照品，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行分析，進(jìn)行回收率測定，結(jié)果見表5。

2.4.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取15010821批溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，RSD=0.23%,表明該儀器精密度良好。測定結(jié)果見表6。

圖4 陰性對(duì)照HPLC色譜

時(shí)間(h)樣品面積RSD(%)05．908810．6725．8993145．9532065．9908685．97126

3 討論

根據(jù)上述結(jié)果可以看出：大青葉配方顆粒中靛玉紅含量采用Thermo ODS-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)分離，檢測波長為289nm，流動(dòng)相為甲醇-水(75∶25)，流速1.0mL/min，靛玉紅在0.01～0.06μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，r=0.999 9，平均回收率為101.3%(RSD=1.3%,n=9)。所以大青葉配方顆粒在進(jìn)行靛玉紅含量檢測時(shí)可以采用高效液相色譜法進(jìn)行測定。

表5 樣品回收率試驗(yàn)結(jié)果

表6 精密度試驗(yàn)結(jié)果

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[M].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:27.

[2] 趙國平，戴慎，陳仁濤.中國大辭典[M].第2版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006:165-166.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

Verification Method of the Content of Indirubin in Folium Lsatidis Granules

Wang Xiaomin,Wang Panpan,Xue Yanxu,Lu Qianqian,Geng Shuo,Yuan Yalan

(Shineway Pharmaceutical Group Co.，ltd，Hebei 051430,China)

Objective:HPLC method for determining the suitable detection method of indirubin in Folium Isatidis granules.Methods:Determination of indirubin content by HPLC method,Thermo ODS-C18column(4.6mm×250mm，5μm); Methanol-water(75∶25) as mobile phase; The detection wavelength was 289nm.Validation of Folium Granule on 3 batches of content determination method.Results and Conclusion:the determination of indirubin in Folium Isatidis granules can be Indigo by HPLC method.

Folium Isatidis Granules；Indirubin；HPLC；Contented Determination

2015-07-01

王小敏(1981-)，女，神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司助理工程師，研究方向?yàn)榛瘜W(xué)藥品檢驗(yàn)。

R284.1

A

1673-2197(2015)23-0024-03

10.11954/ytctyy.201523010