劉小丹，劉玉強(qiáng)，龐 雪，才 謙

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600)

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復(fù)方紫草油藥效學(xué)研究

劉小丹，劉玉強(qiáng)，龐 雪，才 謙*

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600)

目的：觀察復(fù)方紫草油對小鼠背部慢性濕疹的影響，探討其可能的作用機(jī)制。方法：KM小鼠用2，4-二硝基氯苯造成慢性濕疹模型，每組給予復(fù)方紫草油、陽性藥(999皮炎平)、麻油，經(jīng)皮給藥10天后，測定血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ水平，取各組免疫器官(胸腺、脾臟)計算脾臟、胸腺系數(shù)。結(jié)果：復(fù)方紫草油能夠改善濕疹癥狀，升高血清中IL-2、IFN-γ水平，降低血清中IL-4、IL-6水平，并且能夠降低免疫器官的比重系數(shù)。結(jié)論：復(fù)方紫草油對小鼠慢性濕疹具有治療作用，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)T輔助細(xì)胞(Th1、Th2)的動態(tài)平衡有關(guān)。

慢性濕疹；復(fù)方紫草油；細(xì)胞因子

濕疹(eczema)是由于多種內(nèi)外因素引起的一種具有明顯滲出傾向的皮膚炎癥，病因十分復(fù)雜，是由T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫[1]。臨床上用于治療濕疹的藥物主要有苯海拉明、糖皮質(zhì)激素等，有一定的臨床效果，但均表現(xiàn)出比較明顯的不良反應(yīng)，在用于治療慢性皮炎——濕疹時受到很大限制[2]。復(fù)方紫草油出自臨床使用的驗方，具有預(yù)防治療燒傷、燙傷、褥疹、濕疹等功效[3]。該方由紫草、地榆、黃柏組成，以麻油加熱熬煉而成。紫草含乙酰紫草素，具有清熱解毒、止癢消腫除濕及抗過敏之功效，與地榆、黃柏兩味中藥配伍使用后使其消炎利濕、止癢解毒、促進(jìn)傷口愈合的作用。本文采用2，4-二硝基氯苯造濕疹模型，測定給藥后血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ的水平并計算脾臟、胸腺系數(shù)，評價復(fù)方紫草油的藥效，探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

KM小鼠，體重( 20±2)g，由遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 藥物、試劑

復(fù)方紫草油(自制)，999 皮炎平( 復(fù)方醋酸地塞米松乳膏，三九醫(yī)藥股份有限公司，批號0804089)；2，4-二硝基氯苯(2，4dinitrochlorobenzene)，長沙晶康新材料科技有限公司產(chǎn)品(批號20131210JD)，以丙酮配成0.5%和7%的DNCB丙酮溶液；白細(xì)胞介素-2 (IL-2)，白細(xì)胞介素-4 (IL-4)，白細(xì)胞介素-6 (IL-6)，γ干擾素 (IFN-γ) 酶聯(lián)免疫試劑盒購自上?？婆d商貿(mào)有限公司(批號201410)。

1.3 分組與造模

參照Boyera方法加以改進(jìn)[4]造模。取50只KM小鼠，雌雄各半(40只造模，10只作為正常對照)，致敏前1天，小鼠腹部用脫毛膏脫毛，選取大約2cm×2cm以備使用。實驗第1天，量取7% DNCB丙酮溶液25μL抹于小鼠腹部脫毛區(qū)激發(fā)致敏，實驗第2天進(jìn)行強(qiáng)化1次。實驗第5天給小鼠背部脫毛，選取大約2cm×2cm范圍以備使用。從實驗第6天開始，在小鼠背部脫毛區(qū)涂抹0.5% DNCB丙酮溶液60μL，1次/3天，共4次。末次激發(fā)24h后，處死10只小鼠，檢測各項指標(biāo)，作為模型組。將余下30只小鼠隨機(jī)分為復(fù)方紫草油組、陽性藥(999皮炎平)組、麻油組，每組10只。麻油組作為溶劑對照組。

1.4 給藥

各組小鼠經(jīng)皮給藥，3次/天，連續(xù)10天。10天后取血，測定血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ水平；取免疫器官(胸腺、脾臟)，計算免疫器官系數(shù)。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 脾臟、胸腺系數(shù)的測定 各組小鼠處死后，進(jìn)行解剖并且取出脾臟、胸腺，稱重，并計算脾臟、胸腺的系數(shù)，公式為：臟器系數(shù)=臟器質(zhì)量/體質(zhì)量×100%。

1.5.2 血清IL-2，IL-4，IL-6，IFN-γ值的測定 小鼠經(jīng)眼部取血1mL，3 000r·min- 1離心10min，取出血清置于微量離心管內(nèi)，保存在-80℃冰箱中備用，采用酶聯(lián)免疫測定法測定血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ值，步驟按照IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ試劑盒中的說明書進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 病理變化

造模后，小鼠背部出現(xiàn)濕疹樣反應(yīng)，表現(xiàn)為不同程度的彌漫性紅斑、抓痕伴血痂、水腫，邊境不清，有少許栗粒樣丘疹。在給藥5天后觀察，模型組小鼠濕疹樣癥狀沒有顯著的改善，而復(fù)方紫草油組小鼠背部則表現(xiàn)出紅斑顏色變淡，水腫減輕，抓痕和血痂變少情況。

2.2 免疫臟器系數(shù)改變

模型組與空白組相比較，模型組的胸腺系數(shù)與脾臟系數(shù)均小于空白組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。復(fù)方紫草油組、陽性藥(999皮炎平)組與模型組相比較，胸腺系數(shù)與脾臟系數(shù)均小于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。在實驗中，麻油組作為溶劑對照組與模型組相比較，麻油組脾臟系數(shù)與胸腺系數(shù)均接近于模型組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。實驗數(shù)據(jù)見表1。

2.3 復(fù)方紫草油對慢性皮炎—濕疹小鼠血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ水平的影響

模型組與空白組相比較，血清中IL-2、IFN-γ水平明顯降低，IL-4、IL-6的水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。復(fù)方紫草油組與模型組相比較，升高了血清中IL-2、IFN-γ的水平，降低了血清中IL-4、IL-6的水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。999皮炎平組與模型組相比較，升高了血清中IL-2、IFN-γ的水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。IL-4、IL-6值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。麻油組作為溶劑對照組與模型組相比較，各指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，表明麻油作為溶劑對濕疹模型沒有治療作用。實驗數(shù)據(jù)見表2。

表1 各組脾臟、胸腺系數(shù)比較 (±s，%)

注：與空白組比較，*P<0.05；與模型組比較，▲P<0.05。

表2 復(fù)方紫草油對小鼠濕疹模型血清細(xì)胞因子的影響 (±s，n=10)

注： 與空白組比較*P<0.05；與模型組比較，▲P<0.05。

3 討論

濕疹是由內(nèi)外多種復(fù)雜因素引起的一種常見的炎癥性、過敏性皮膚病。研究表明T淋巴細(xì)胞異常在濕疹的發(fā)病過程中占有重要的地位，尤其是T輔助淋巴細(xì)胞(Th1/Th2)的動態(tài)失衡引起的細(xì)胞因子分泌紊亂，在濕疹炎癥的發(fā)生發(fā)展過程中起著十分重要的作用[5]。實驗結(jié)果顯示，濕疹患者血和皮損中平衡失調(diào)的Th1/Th2細(xì)胞亞群中Th2細(xì)胞功能亢進(jìn)，Th2細(xì)胞所表達(dá)或分泌的IL-4水平升高，而Th1細(xì)胞所表達(dá)或分泌的IL-2、IFN-γ的水平降低[6]。本研究濕疹模型的病理表現(xiàn)與人類濕疹相類似，測定血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ的水平，和正常組相比較，具有顯著性差異，并且與相關(guān)文獻(xiàn)報道一致[7-8]，表明成功建立了小鼠濕疹模型。給藥后發(fā)現(xiàn)，復(fù)方紫草油能降低免疫器官的比重系數(shù)，能有效緩解濕疹引起的腫脹、紅斑等癥狀，對損害的皮膚進(jìn)行修復(fù)，并能升高血清中IL-2、 IFN-γ的水平，降低血清中IL-4、IL-6的水平。這些結(jié)果表明復(fù)方紫草油對小鼠慢性濕疹有治療作用，且其作用機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ的水平，使失衡的T輔助淋巴細(xì)胞(Th1 /Th2)重新恢復(fù)平衡而實現(xiàn)的，其調(diào)節(jié)Th1和Th2平衡的具體機(jī)制有待更深入的研究。

[1] FOLKMAN J.Angiogenesis in cancer，vascular，rheumatoid and other disease[J].Nature Medicine，1995(1):27-31.

[2] 李傳應(yīng)，王 春，魏偉.白芍總苷對小鼠慢性皮炎—濕疹的治療作用及其部分機(jī)制[J].中國藥理學(xué)通報，2008，24(10):1366-1369.

[3] 楊 慧，白希林，李特.復(fù)方紫草油的制備及臨床觀察[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2008，4(12):68-69.

[4] 孫明立，魏敏杰，金萬寶，等.兩種變應(yīng)性接觸性皮炎動物模型的建立及比較[J].中國實驗動物學(xué)報，2008，12(2): 132.

[5] 陸麗明，程楷濤.濕疹發(fā)生機(jī)理的研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2007，3(9):76.

[6] MOSMANN T R,SAD S.The expanding universe of T-cell subsets:Thl, Th2 and more[J].Immunology Today,1996,17(3):138-146.

[7] 張開明，李秉煦，唱文鵑，等.變應(yīng)性疾病患者血清IL-4,sCD23的研究[J].中華皮膚科雜志，1998,31(6):357-359.

[8] 鄔成霖，羅維丹，寇霄，等.中藥復(fù)方除濕湯治療慢性濕疹的實驗研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志，2004，3(4):220-222.

(責(zé)任編輯：宋勇剛)

The Pharmacodynamics of Compound Zicao Oil

Liu Xiaodan, Liu Yuqiang ,Pang Xue, Cai Qian*

(College of Pharmacy, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Dalian116600，China)

Objective:To investigate the effect of compound Zicao Oil on the model of chronic eczema and to explore the potential mechanism.Methods:Chronic eczema models were induced by 2,4-dinitrochlorobenzene(DNCB)and then they were divided into three groups that were treated with the medicine of compound Zicao Oil、Mometasone Furoate Gel、Sesame Oil.After giving medicine, the contents of interleukin-2, interlenkin-4, interleukin-6, interferin ( IFN-γ) in serum and the parameters of spleen and thymus were detemined.Results:Compound Zicao Oil can improve the symptom of chronic eczema, increase the contents of interleukin-2, interferin ( IFN-γ) and decrease the contents of interlenkin-4, interleukin-6 in serum and reduce the parameters of spleen and thymus.Conclusion:Compound Zicao Oil can treat chronic eczema effectively.The mechanism of treating chronic eczema maybe related to adjust the dynamic of T helper cells.

Eczema;Compound Zicao Oil;Cytokines

2015-06-30

劉小丹(1990-)，女，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，研究方向為中藥化學(xué)和中藥炮制學(xué)。

才謙(1972-)，女，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)教授，研究方向為中藥化學(xué)和中藥炮制學(xué)。E-mail：caiqianmail@sina.com

R285.5

A

1673-2197(2015)23-0009-02

10.11954/ytctyy.201523004