★ 黃美琴 丁罡 高志生 麻志恒 (上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院崇明分院 上海202150)

進(jìn)展期胃癌是指臨床病理分期Ⅲ－Ⅳ期患者，包括根治術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者。本研究通過檢測進(jìn)展期胃癌組織的MVD、VEGF的表達(dá)情況，探討進(jìn)展期胃癌中醫(yī)證型與血管生成的關(guān)系，為中醫(yī)辨證提供客觀化指標(biāo)。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選本院外科2013年3月—2015年5月經(jīng)手術(shù)切除且有完整臨床資料和病理資料的胃癌組織標(biāo)本85例。其中男46例，女39例，年齡42～72歲，平均(57．52±8．12)歲。所有切片標(biāo)本均有病理學(xué)證據(jù)。根據(jù)胃癌TNM分期法，本研究標(biāo)本TNM分期:Ⅲa期25例，Ⅲb期24例，Ⅲc期20例，Ⅳ期16例。

1．2 胃癌組織MVD計數(shù)［1］標(biāo)本用10%甲醛浸泡固定，經(jīng)過脫水等步驟，石蠟包埋，以4μm厚連續(xù)切片，HE染色后顯微鏡下觀察［2］。先在低倍鏡下觀察整張切片的微血管分布情況，選擇最密集的4個區(qū)域，在200倍顯微鏡下計數(shù)微血管數(shù)，取平均值作為MVD結(jié)果。

1．3 胃癌組織VEGF測定［3］在冰面上EP管內(nèi)將胃癌組織剪碎至漿糊狀提取蛋白，用酶標(biāo)儀測定A562，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算蛋白濃度。通過灌膠、電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉后加抗體(北京博奧森生物技術(shù)有限公司提供的兔抗人一抗VEGF)，結(jié)果以目的條帶面積灰度值做半定量檢測，測出VEGF的表達(dá)強(qiáng)度。

1．4 統(tǒng)計學(xué)方法 對結(jié)果使用SPSS15．0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0．05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

進(jìn)展期胃癌中醫(yī)證型與MVD、VEGF表達(dá)間的關(guān)系，見表1。

表1 進(jìn)展期胃癌中醫(yī)證型與MVD、VEGF表達(dá)間的關(guān)系(ˉx±s)

3 討論

胃癌屬于中醫(yī)學(xué)“噎膈”“反胃”“胃脘痛”等范疇，認(rèn)為本病多因痰濁邪毒瘀血結(jié)聚胃脘，日久惡變而成。本研究發(fā)現(xiàn)進(jìn)中醫(yī)展期胃癌證型常見6種類型:脾胃虛損、氣滯血瘀、氣血虧虛、肝胃不和、胃陰虛和脾虛痰濕，尤以脾胃虛損為主(42．35%)，其次是氣血虧虛(18．82%)及氣滯血瘀(20．00%)，這與大多進(jìn)展性胃癌證型規(guī)律研究基本相符［4］。

血管形成是促血管形成因子和抑制因子協(xié)調(diào)作用的復(fù)雜過程，血管的生長與抑制維持著平衡，一旦此平衡打破就會激活血管系統(tǒng)，使血管生成過度或抑制血管系統(tǒng)使血管退化，腫瘤的發(fā)生及發(fā)展與此密切相關(guān)［5］。越來越多的研究表明，良性腫瘤血管生成稀少，血管生長緩慢;而大多數(shù)惡性腫瘤的血管生成密集且生長迅速。因此，血管生成在腫瘤的發(fā)展轉(zhuǎn)移過程中起到重要作用，抑制這一過程將能明顯阻止腫瘤組織的發(fā)展和擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。目前常用MVD及VEGF作為評價血管形成的指標(biāo)。MVD是對腫瘤血管最密集的地方進(jìn)行的微血管記數(shù)［6］。已有的研究顯示多種腫瘤的MVD與腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)［7］。胃癌的發(fā)生、形成與進(jìn)展同MVD緊密相關(guān)［8］。VEGF是目前最強(qiáng)有力的血管生成因子，可在體內(nèi)誘導(dǎo)新血管生成，與腫瘤的血管形成密切相關(guān)［9］。為探討中醫(yī)證型與腫瘤血管生成的關(guān)系，故而本研究采用這兩個指標(biāo)觀察。

本次研究發(fā)現(xiàn)，MVD、VEGF的表達(dá)在不同證型中的表達(dá)趨勢基本一致。MVD、VEGF陽性表達(dá)主要集中分布于脾胃虛損、氣血虧虛、氣滯血瘀型，以脾胃虛損型最為顯著，且該種證型比例最高，提示這三種證型患者尤其脾胃虛損型患者胃癌組織血管生成豐富，病情進(jìn)展幾率高，應(yīng)該提高重視，加強(qiáng)隨訪。MVD、VEGF的陽性表達(dá)其次是胃熱陰虛、脾虛痰濕、肝胃不和型。這種分布規(guī)律同進(jìn)展期胃癌的證型分布規(guī)律基本一致。此外，由于課題研究時間限制，本次研究病例數(shù)較少，需進(jìn)一步擴(kuò)增病例數(shù)以進(jìn)一步驗證。

［1］Zhang Z，Zhang X．Salt taste preference，sodium intake and gastric cancer in China［J］．Asian Pac JCancer Prev，2011，12(5):1 207－1 210．

［2］王鴻程，陳立武，黃澤文，等．胃癌組織中微血管密度及其臨床意義［J］．福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010，19(1):6－8．

［3］張緒良，黃丹．LOX、VEGF在胃癌進(jìn)展中的作用關(guān)系［J］．胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2014，23(12):1 406－1 409．

［4］王曉妍，曹志群，相宏杰，等．進(jìn)展期胃癌中醫(yī)證型的文獻(xiàn)分析［J］．遼寧中醫(yī)雜志，2013，40(4):676－678．

［5］Folkman J．What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent［J］．J Natl Cancer Inst，1990，82(1):4－6．

［6］Ribatti D．The crucial role of vascular permeability factor vascular endothelial growth factor in angiogenesis:a historical review［J］．Br J．Haematol，2005，128(3):303－309．

［7］Acenero MI，Gonzalez F，Galindo M，et al．Vascular enumeration as a significance for invasive breast carcinoma［J］．J Clin Oncol，1998，16(5)∶1 684．

［8］Weidner N．Intratumor microvessel density as a prognostic factor in cancer［J］．Am JPathol，1995，147(1):9－19．

［9］張陸梅，陳澤濤．血管內(nèi)皮生長因子與腫瘤［J］．現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16(6):844－846．