劉 芳，吳三林，龔明福，張吉林，伏秦超，陳 莎

（樂山師范學院生命科學學院，四川 樂山 614000）

鳳仙花屬（Impatiers）植物全球大約有900多種，主要分布在亞熱帶與熱帶山區(qū)，在我國約有220多種，其地理分布具有極其明顯的地域性和特有性。四川峨眉山分布有12個特有種［1］，華麗鳳仙花（Impatiens faberi Hook.f.）為其中之一，生于海拔1 350～2 100m林下，花紫紅色，花期長。目前國內(nèi)外對于鳳仙花的研究主要是集中在兩個方面：一是化學成分，研究表明鳳仙花含有大量黃酮類、萘醌類、香豆素類、甾醇類等成分［2］；二是藥理藥效，認為鳳仙花有較好的抗過敏、抗真菌、抗細菌等作用［3～9］。為了驗證峨眉山特有種華麗鳳仙花是否具有相類似的藥理藥效，我們以華麗鳳仙花的莖、葉、花瓣為試材，采用3種不同溶劑浸提，研究浸提液對于細菌的抑制作用，以期為華麗鳳仙花的開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

華麗鳳仙花植株采自峨眉山海拔1 720～1 920 m處，分別取其莖、葉、花，置于冰盒中帶回實驗室。大腸埃希氏菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus Rosenbach）、枯草芽孢桿菌黑色變種（Bacillus subtilis var.Niger）由樂山師范學院微生物實驗室提供。培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，其主要成分為牛肉膏10 g、氧化鈉5 g、蛋白胨10 g、瓊脂20 g、pH 7.0～7.2、蒸餾水1 000mL，高壓滅菌20min。

1.2 試驗方法

1.2.1 提取液制備 分別取華麗鳳仙花的莖、葉、花瓣樣品各80 g，研磨后分別加入200mL的水、75%乙醇和75%丙酮，浸提，重復2次后合并所得濾液。在60℃條件下旋轉蒸干，用80mL無菌水分別配成1 g/mL溶液［8］。

1.2.2 菌懸液的制備 將3個菌種在斜面培養(yǎng)基進行活化，將已經(jīng)活化的菌種在無菌條件下分別接種于50mL細菌培養(yǎng)液中，在恒溫37℃的條件下?lián)u瓶培養(yǎng)24 h。

1.2.3 抑菌試驗 分別取9種不同的提取液適量，趁熱加入無菌牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，混勻，配成0.200 0、0.100 0、0.050 0、0.025 0、0.012 5 g/mL的混合液，凝固后取0.1mL菌液滴到平板中央，用涂布器涂勻。用無菌水作為對照，每處理重復3次。將接種好的平板放在37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后進行平板菌落計數(shù)，計算抑菌率。

抑菌率（%）=［（對照平板菌落數(shù)-提取液處理平板菌落數(shù)）/對照平板菌落數(shù)］×100

2 結果與分析

2.1 葉片不同提取液對3 種供試菌的抑制

從表1可知，華麗鳳仙花葉的3種提取液對3種供試菌均有抑制作用，且隨濃度的升高抑菌作用增強；但不同提取液對3種供試菌的抑制效果不同，當3種提取液濃度為0.0125 g/mL時，抑菌效果均不理想，抑菌率最高的為丙酮提取液，對金黃色葡萄球桿菌的抑制，僅為9.38%；當3種提取液濃度為0.025 0 g/mL時，丙酮提取液對3種供試菌的抑菌率均超過50%，且丙酮提取液對金黃色葡萄球菌的抑制率達到77.60%；當3種提取液濃度大于0.025 0 g/mL后，對3種供試菌的抑菌率均超過50%，比較發(fā)現(xiàn)，同濃度的3種提取液對3種供試菌的抑制效果從大到小依次為丙酮提取液、乙醇提取液、水提取液。

2.2 莖不同提取液對3 種供試菌的抑制

華麗鳳仙花莖的3種提取液對3種供試菌抑制規(guī)律同葉的相似（見表2），隨濃度的升高抑菌作用增強。水提取液和乙醇提取液濃度低于0.025 0g/mL時，對3種供試菌的抑制率均低于50%；丙酮提取液的濃度為0.025 0 g/mL時，對3種供試菌的抑制率均高于或接近50%，分別為50.89%、61.94%、48.87%；當3種提取液的濃度大于0.050 0 g/mL后，對3種供試菌的抑菌率均超過50%。比較發(fā)現(xiàn)，同濃度的3種提取液對3種供試菌的抑制效果從大到小依次為丙酮提取液、乙醇提取液、水提取液。

表1 華麗鳳仙花葉不同提取液對3 種供試菌的抑菌率 %

表2 華麗鳳仙花莖不同提取液對3 種供試菌的抑菌率 %

表3 華麗鳳仙花花不同提取液對3 種供試菌的抑菌率 %

2.3 花瓣不同提取液對3 種供試菌的抑制

從表3可知，華麗鳳仙花花瓣的3種不同溶劑的提取液對3種供試菌均有抑制作用，且隨提取液濃度的升高抑菌作用增強；不同提取液對3種供試菌的抑制效果不同，且抑菌效果強于莖和葉提取液。丙酮提取液濃度為0.012 5 g/mL時，對3種供試菌的抑菌率就超過了50%，對大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌黑色變種的抑菌率分75.51%、57.07%、68.97%；在該濃度下乙醇提取液對大腸埃希氏菌抑菌率為53.33%。比較發(fā)現(xiàn)，同濃度的3種提取液對3種供試菌的抑制效果與莖和葉的相同，從大到小依次為丙酮提取液、乙醇提取液、水提取液。

3 小結與討論

試驗結果表明，華麗鳳仙花莖、葉及花的3種提取液對于3種細菌均有較強的抑制作用，效果從大到小依次為丙酮提取液、乙醇提取液、水提取液，且隨著濃度的升高，抑制作用加強。這與馬紅梅在鳳仙花莖和葉上所得結果相同［8～9］，推測認為鳳仙花的抑菌成分更易容于有機溶劑。華麗鳳仙花不同部位的3種提取液對于3種細菌的抑菌作用從大到小依次為花、葉、莖，這可能是花瓣中含有更多的抑菌成分有關，危建安等認為鳳仙花花中的主要化合物為黃酮醇類及萘醌衍生物［10］，華麗鳳仙花中是否是類似的抑菌化合物還需進一步研究。

［1］ 李振宇. 峨眉山植物［M］. 北京：科技出版社，2007：37-48.

［2］ 鞠培俊，孔德云，李曉波. 鳳仙花化學成分及藥理作用研究進展［J］. 沈陽藥科大學學報，2007，24（5）：320-324.

［3］ DE LUCCA A J，JACKS T J，BROEKAERT WJ. Fungicidal and binding properties of three plant peptides［J］.Mycopathologia，1999，144：87-91.

［4］ 顧媛媛，王建明，田振坤，等. 鳳仙透骨草不同萃取部位體外抗真菌作用研究［J］. 時珍國醫(yī)國藥，2013，24（2）：481-484.

［5］ 胡素賢，陳志英. 白鳳仙花治愈頑固性足癬伴灰指甲31 例體會［J］. 實用中醫(yī)內(nèi)科雜志，1994，8（3）：39-40.

［6］ 危建安，黃兆勝，黃永焯，等. 鳳仙花不同提取液對三種皮膚真菌抑制作用的實驗研究［J］. 中國中醫(yī)藥科技，2001，8（5）：321.

［7］ 黎秋華，馬紅梅，王甫春. 鳳仙花瓣不同提取物對細菌的抑制作用［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2010，40（9）：284-285.

［8］ 馬紅梅，張耀輝，陳小蘭. 鳳仙花莖不同提取物對細菌的抑制作用［J］. 河南農(nóng)業(yè)科學，2012，41（1）：126-128.

［9］ 馬紅梅，黎秋華，岑紅煥. 鳳仙花葉不同提取物對細菌的抑制作用［J］. 山東農(nóng)業(yè)大學學報（自然科學版），2012，43（2）：193-196.

［10］ 危建安，謝 琪. 鳳仙花研究進展［J］. 時珍國醫(yī)國藥，2001，12（2）：164-165.