賀梅娟 楊晉翔 趙晨 劉婷

慢傳輸型便秘(slow transit constipation，STC)是指結腸的傳輸功能障礙，腸內(nèi)容物傳輸緩慢所引起的頑固性便秘。其發(fā)病機制較為復雜，目前尚缺乏深入的認識。枳術丸是治療脾胃病的傳統(tǒng)經(jīng)方，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)其具有促進腸平滑肌運動的作用［1］，因此探討枳術丸揮發(fā)油對慢傳輸型便秘(STC)大鼠的治療作用及可能的作用機理，為臨床治療便秘提供一種新的方法。

1 對象與方法

1.1 對象

8 周齡SPF 級SD 大鼠40 只，雌雄各半，體質(zhì)量190 ～210 g，由西安交通大學醫(yī)學院動物中心提供，合格證號:SCXK(陜)2006-001。

1.2 主要儀器和試劑

超臨界流體萃取裝置(南通市華安超臨界萃取有限公司HA220-50-06)。特種導線(上海百銀線纜有限公司，醫(yī)用AF-250A/110V(AC)/7* 0.05 mm線纜)。BL-410 生物機能實驗系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)。吐溫80(汕頭市西隴化工廠，批號20040708)。印度墨水(中山生物科技公司)。

1.3 實驗藥物

枳術丸揮發(fā)油:由生白術、枳實、荷葉三味藥組成，飲片購自同仁堂藥店，將三者按20∶10∶3混勻成枳術丸，并加工成米粒大小的顆粒，應用超臨界CO2萃取獲得揮發(fā)油，放4℃冰箱中保存，灌胃前加1%的吐溫80 充分震蕩，混勻后加雙蒸水配置成所需濃度枳實揮發(fā)油的混懸液。枳術丸揮發(fā)油萃取條件:萃取II 壓力25 mp，溫度35℃;分離I 壓力6 mp，溫度35℃;分離II 壓力6 mp，溫度35℃。鹽酸嗎啡(10 mg/支，生產(chǎn)批號:020316，沈陽第一制藥廠)，應用前用生理鹽水配置成濃度為1 mg/ml 的溶液。西沙必利片(5 mg/片，生產(chǎn)批號:041127101，西安楊森制藥有限公司)，灌胃前將西沙必利片放入研缽中細研后配置成所需濃度的混懸液。

1.4 造模與分組

實驗動物購回后進行一周適應性喂養(yǎng)，應用鹽酸嗎啡造模。根據(jù)完全隨機設計原理將大鼠分為四個組:每組10 只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。除健康對照組外，其余3 組大鼠皮下注射鹽酸嗎啡3.5 mg/kg·d，健康對照組大鼠皮下注射等量等次生理鹽水。各組均持續(xù)45 天，建立STC 大鼠模型［2-3］。

造模成功后，除健康對照組外，將其余3 組大鼠用拉丁表法再次隨機分為3 組，枳術丸揮發(fā)油組、西沙必利組、模型對照組，枳術丸揮發(fā)油組及西沙必利組均以成人1 天用藥量按大鼠體表面積折算公式換算出大鼠每日給藥量，按體重最大的大鼠給藥3 ml確定藥液濃度，即枳術丸揮發(fā)油組予1.8 g/(kg·d)枳術丸揮發(fā)油混懸液灌胃;西沙必利組予2.9 mg/(kg·d)西沙必利混懸液灌胃;模型對照組及健康對照組均予等量等次蒸餾水灌胃，各組均持續(xù)30 天。

1.5 腸道傳輸功能測定

采用活性炭懸液推進法測定大鼠腸道傳輸功能。用藥結束后，各組大鼠禁食24 小時，3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(40 mg/kg)，而后仰臥固定于手術臺上，剪去腹毛，常規(guī)消毒后縱行切開腹部正中約2 cm，用醫(yī)用1 mL 一次性注射器經(jīng)回盲部推入印度墨水0.5 mL，測量被墨汁染色的結腸長度。1小時后取出回盲部至直腸末端的全部腸道，在無張力狀態(tài)下測量腸道全長及被墨汁染色的腸道長度，繼而計算腸道推進率［4-5］。

1.6 在體結腸肌電測定

參考相關文獻，進行電極的制作、埋植及結腸肌電的記錄，最后將枳術丸揮發(fā)油組、模型對照組及健康對照組大鼠結腸肌電活動的記錄結果3 分鐘作為1 個時間段，分別記錄每只大鼠每一時間段結腸肌電頻率和振幅的均值、標準差及變異系數(shù)，再取均值、標準差及變異系數(shù)進行組間比較［6-8］。

1.7 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 各組大鼠腸道推進率比較

健康對照組、模型對照組、西沙必利組、枳術丸揮發(fā)油組大鼠腸道推進率經(jīng)正態(tài)檢驗，符合正態(tài)分布(P=0.75＞0.05)，因此組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD 法。四組大鼠腸道推進率比較總體不同或不完全相同(F = 12.37，P = 0.032 ＜0.05)。與健康對照組比較，模型對照組大鼠腸道推進率減弱，兩者差異有顯著性(P ＜0.05);與模型對照組比較，枳術丸揮發(fā)油組、西沙必利組大鼠腸道推進率增強，均有顯著性差異(P ＜0.05);枳術丸揮發(fā)油組與西沙必利組比較，大鼠腸道推進率無明顯差異，見表1。

表1 健康對照組、模型對照組、西沙必利組、枳術丸揮發(fā)油組大鼠腸道推進率比較(±s)

表1 健康對照組、模型對照組、西沙必利組、枳術丸揮發(fā)油組大鼠腸道推進率比較(±s)

注:與健康對照組比較aP ＜0.05;與模型對照組比較bP ＜0.05。

組別 n 腸道推進率(%)10 24.77 ±5.17%模型對照組 10 19.74 ±3.94% a西沙必利組 10 24.66 ±4.20% b枳術丸揮發(fā)油組 10 28.15 ±5.03%健康對照組b

2.2 各組大鼠結腸慢波頻率及振幅比較

健康對照組大鼠結腸慢波表現(xiàn)為不規(guī)則的近似正弦波樣曲線，少數(shù)有切跡，呈雙峰型，頻率為11.5 ～16.0 次/分，平均頻率最大相差1 次/分以上，振幅較整齊，平均振幅0.16 ±0.01 mv;慢波頻率變異系數(shù)為7.83±1.41%，振幅變異系數(shù)為8.08±1.25%。

與健康對照組相比，模型對照組中9 只大鼠慢波頻率明顯減慢(P ＜0.05)，平均頻率為6.02±1.10 次/分，振幅增加(P ＜0.05)，平均振幅0.43±0.05 mv，波形仍表現(xiàn)為不規(guī)則的近似正弦波樣曲線，頻率變異系數(shù)為(23.43±3.02)%，振幅變異系數(shù)為(12.27±1.51)%，與健康對照組相比均有顯著性差異(P ＜0.05)。

枳術丸揮發(fā)油組7 只大鼠結腸慢波頻率較模型對照組加快，平均頻率為9.02 ±1.15 次/分，振幅減小，平均振幅0.31 ±0.01 mv，波形仍表現(xiàn)為不規(guī)則的近似正弦波樣曲線，頻率變異系數(shù)為(15.96 ±2.95)%，振幅變異系數(shù)為(10.79 ±0.91)%，3 只大鼠結腸慢波頻率減慢，振幅強弱不等，波形較不穩(wěn)定，且出現(xiàn)基線位移，因樣本量小，未作分析?？觳ǖ母蓴_較大，未作分析。

模型組中另外1 只大鼠結腸慢波波形較不穩(wěn)定，且出現(xiàn)基線位移，因樣本量小，未作分析?？觳ǖ母蓴_較大，未作分析，見表2。

表2 健康對照組、模型對照組、枳術丸揮發(fā)油組大鼠結腸慢波頻率比較(±s)

表2 健康對照組、模型對照組、枳術丸揮發(fā)油組大鼠結腸慢波頻率比較(±s)

注:與健康對照組比較aP ＜0.05;與模型對照組比較bP ＜0.05。

組別 n 頻率(次/min) 頻率變異系數(shù)(%) 振幅(mv) 振幅變異系數(shù)(%)10 12.90 ±1.07 7.83 ±1.41 0.16 ±0.01 8.08 ±1.25模型對照組 9 6.02 ±1.10a 23.43 ±3.02a 0.43 ±0.05a 12.27 ±1.51a枳術丸揮發(fā)油組 7 9.02 ±1.15b 15.96 ±2.95b 0.31 ±0.01b 10.79 ±0.91健康對照組b

3 討論

枳術丸源于《金匱要略》枳術湯，張元素將枳實、白術的用量比改為2∶1，并將湯劑改為丸劑。方中白術補脾益氣，給腸腑化物傳導以動力;枳實行氣寬中通腑;荷葉可以生發(fā)脾胃清陽之氣，諸藥合用，清者升，壅濁可降可排，清升濁降相輔相承，腸腑傳導復常，糟粕難以為積，自然陳恙日愈。現(xiàn)代臨床廣泛應用于慢性胃炎［9］、消化不良［10］、糖尿病胃輕癱［11］、便秘［12］等的治療?，F(xiàn)代藥理研究也認為枳術丸能夠促進腸平滑肌的推進性蠕動［1］;此外，健脾理氣類中藥能明顯增強腸平滑肌蠕動［13］，而白術、枳實均能加強動物腸平滑肌收縮，促進腸蠕動，具有通便作用。

近年來從臨床有效的中藥中尋找新的活性成分，探索新藥是一個大的趨勢。揮發(fā)油是白術的主要化學成分，也是枳實的主要有效成分之一，有研究表明枳實中揮發(fā)油是理氣﹑行滯的重要成分［14］，也有研究表明枳實中所含的揮發(fā)油有明顯的促進在體小鼠胃腸推進、增加推進率的作用［15］。課題組據(jù)此來探討枳術丸揮發(fā)油對STC 的治療作用及可能的作用機理，為尋找治療STC 的新策略及新藥提供有價值的靶標。本實驗結果顯示，STC 大鼠結腸慢波頻率、振幅及變異系數(shù)出現(xiàn)異常，這可能是導致結腸傳輸減慢的重要因素，而枳術丸揮發(fā)油可在一定程度上糾正STC 大鼠異常的結腸慢波，這可能是其治療STC 的機制之一，這為其用于STC 的治療提供了實驗學的參考，希望本研究能夠拋磚引玉，使理論及臨床工作者重視枳術丸揮發(fā)油對STC 的治療作用。

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