戴光文 江精華 韋邦偉 謝麗華 劉金表

（梧州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西 梧州 543002）

禽流感是A型流感病毒引起的禽類(lèi)全身性或呼吸器官性傳染病，不僅給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失,而且隨著病毒變異,人類(lèi)的生命安全也受到了嚴(yán)重威脅。鑒于該病毒污染源面廣、病毒血清型較多、變異性極強(qiáng)、低致病性毒株能在短期內(nèi)變成高致病性毒株的特點(diǎn)，目前我國(guó)防控禽流感實(shí)行的是春秋兩防集中免疫及規(guī)?；輬?chǎng)按日齡程序化免疫方式，能有效控制禽流感區(qū)域化流行，但是我國(guó)幅員遼闊，地理氣候差異較大，尤其在寒冷季節(jié)禽流感還是時(shí)有發(fā)生，嚴(yán)重威脅家禽養(yǎng)殖業(yè)及獸醫(yī)公共衛(wèi)生安全，為此本研究旨在探索梧州市寒濕冬季抗體消長(zhǎng)規(guī)律，以此為依據(jù)制訂寒冷季節(jié)禽流感防控方案。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗

重組禽流感病毒滅活疫苗（H5N1亞型，Re-6株）均為政府強(qiáng)制免疫提供疫苗，生產(chǎn)廠家為廣東永順，免疫劑量嚴(yán)格按照疫苗使用說(shuō)明書(shū)使用。

1.1.2 檢測(cè)試劑

禽流感病毒H5亞型（Re-6株）血凝抑制試驗(yàn)抗原及禽流感病毒H5亞型（Re-6株）陽(yáng)性血清均購(gòu)自哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司，生產(chǎn)批號(hào)為2013003。

1.1.3 試驗(yàn)用動(dòng)物：在本市4個(gè)縣選擇4個(gè)雞場(chǎng)及1個(gè)活禽市場(chǎng)的雞作為試驗(yàn)對(duì)象，將每個(gè)雞場(chǎng)最近一次免疫禽流感疫苗時(shí)間相同或相近的2群雞作為本次試驗(yàn)雞群，分別命名A群雞和B群雞，每群雞數(shù)量不得少于500羽。

1.1.4 主要儀器設(shè)備：湘儀離心機(jī)、德國(guó)Brand移液槍。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1.1第一次采集血清樣品檢測(cè)抗體

第一次采血時(shí)間為農(nóng)歷“大雪” 即2014年12月7日，對(duì)A群雞和B群雞分別采集血清，每份血清不得少于0.5ml,血清要求清亮、無(wú)溶血、無(wú)腐敗，同時(shí)填寫(xiě)采樣單，詳細(xì)記錄免疫信息及采血時(shí)間，采血后立即對(duì)A群雞加強(qiáng)免疫高致病性禽流感滅活苗1次。

1.2.1.2第二次采集血清樣品檢測(cè)抗體

第二次采血時(shí)間為農(nóng)歷“大寒”日即2015年1月20日，對(duì)A群雞和B群雞分別采集血清，每份血清不得少于0.5ml,血清要求清亮、無(wú)溶血、無(wú)腐敗，填寫(xiě)采樣單，詳細(xì)記錄免疫信息及采血時(shí)間。

1.2.2 檢測(cè)方法

采用高致病性禽流感診斷技術(shù)血凝（HA）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）（GB/T18936-2003），抗體滴度1表示1log2，2表示2log2，以此類(lèi)推。

1.2.3 抗體合格率判定方法

按照農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T769-2004，HI抗體達(dá)≥4log2為個(gè)體免疫抗體合格，抗體合格率≥70%為群體免疫合格率。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理

HI效價(jià)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示，群體抗體合格情況以群體合格抗體的百分?jǐn)?shù)，即群體抗體合格率來(lái)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 H5抗體合格率變化情況

表1 規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)前后H5抗體合格率變化情況

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表2 活禽市場(chǎng)試驗(yàn)前后H5抗體合格率變化情況

2.2 H5抗體滴度效價(jià)及群體均勻度變化情況

表3 規(guī)模試驗(yàn)場(chǎng)H5抗體滴度變化情況

表4 活禽市場(chǎng)H5抗體滴度變化情況

從表1及表2中顯示抗體合格率變化可知，規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)組從試驗(yàn)前的91.07%升高至試驗(yàn)后98.55%，活禽市場(chǎng)從試驗(yàn)前的55%升高至試驗(yàn)后82.14%，而對(duì)照組抗體合格率沒(méi)有明顯變化，這表明在大雪時(shí)節(jié)加強(qiáng)免疫能顯著提高家禽H5抗體合格率，使家禽在冬季最冷的大寒時(shí)節(jié)的抗體合格率仍然保持在80%以上。

從表3及表4中顯示抗體滴度變化可知，規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)組從試驗(yàn)前的6.61±2.33升高至試驗(yàn)后7.93±1.91，活禽市場(chǎng)從試驗(yàn)前的3.25±1.78升高至試驗(yàn)后5.25±3.26，而對(duì)照組的規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)組從試驗(yàn)前的6.41±2.54降低至試驗(yàn)后5.78±2.10，這表明在大雪時(shí)節(jié)加強(qiáng)免疫能顯著提高家禽H5抗體滴度及均勻度，有助于提高機(jī)體抵御病毒入侵能力。

3 討論

3.1 關(guān)于高致病性禽流感免疫效果的研究較多[1.2.3]，主要以春秋兩防免疫及按日齡免疫研究報(bào)道，但以探索特定氣候環(huán)境條件下禽流感抗體消長(zhǎng)規(guī)律報(bào)道甚少，本研究證實(shí)寒濕冬季H5N1禽流感滅活疫苗免疫抗體滴度隨著時(shí)間推移呈逐漸下降趨勢(shì)，而且抗體離散度擴(kuò)大，加強(qiáng)免疫可以顯著提高群體抗體合格率、抗體滴度及均勻度，實(shí)踐證明這有助于家禽安全渡過(guò)濕冷的冬季，確保家禽安全渡過(guò)冬季。

3.2 權(quán)威研究證明抗體滴度低于6log2的禽群不足以抵抗野毒的侵襲，本研究顯示在大雪時(shí)節(jié)加強(qiáng)免疫的規(guī)模禽場(chǎng)在大雪及大寒時(shí)節(jié)的群體滴度均在6log2以上，而未免疫對(duì)照組禽群及活禽市場(chǎng)家禽的群體滴度低于6log2，這說(shuō)明在大雪時(shí)節(jié)加強(qiáng)免疫有助于提高禽群抵抗力，但未加強(qiáng)免疫規(guī)模禽場(chǎng)及活禽市場(chǎng)受病毒入侵風(fēng)險(xiǎn)仍然較高，這提示冬季活禽市場(chǎng)是禽流感發(fā)生高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域。

3.3 本研究經(jīng)臨床實(shí)踐證明，在寒冷的冬季應(yīng)將群體抗體合格率大于70%和群體抗體滴度大于6log2兩個(gè)指標(biāo)作為評(píng)估免疫效果評(píng)估較為適宜。

[1]劉佩紅等.H5N1亞型禽流感滅活疫苗免疫鳥(niǎo)后抗體消長(zhǎng)規(guī)律及免疫程序的研究[J]，動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2007，28（增）：1～4.

[2]張?jiān)u滸、任濤、唐應(yīng)華等.免疫程序與母源抗體對(duì)H5禽流感疫苗免疫鴨和鵝HI抗體水平的影響[J]，中國(guó)獸醫(yī)科技，2005，35（8）：638～642.

[3]李靜、張力、張魯安等，雞禽流感母源抗體和免疫抗體消長(zhǎng)情況的觀察[J]，養(yǎng)禽與禽病防治，2005，（2）：8～9.