郭永剛，樊克鋒

（河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，河南鄭州450011）

大蒜素是從大蒜中提取的主要生物活性成分的總稱，具有抗菌、抗腫瘤、降膽固醇、預(yù)防心血管疾病等多種藥理及保健作用。目前大蒜素已在醫(yī)藥、食品、飼料中得到較好的應(yīng)用。研究表明大蒜素對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌等有害菌有明顯抑制和殺滅作用，而且大蒜素?zé)o藥物殘留、無耐藥性，可替代抗生素及合成抗菌藥物[1、2]。雞大腸桿菌病是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的主要細(xì)菌性疾病，本文研究大蒜素對雞大腸桿菌的體外抑菌試驗(yàn)，旨在為臨床合理使用大蒜素防治雞大腸桿菌病提供參考。

1 材料與方法

1.1 菌種 標(biāo)準(zhǔn)菌株雞源大腸桿菌C83845，購于中國獸藥監(jiān)察所；臨床分離株雞大腸桿菌，由河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院藥理藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室分離鑒定保存。

1.2 藥物 大蒜素（購自陜西森弗生物技術(shù)有限公司）。

1.3 培養(yǎng)基 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（加入微量酚紅）、普通瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基。

1.4 菌液制備 將本實(shí)驗(yàn)室分離保存的雞大腸桿菌接種于伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)20h，選擇典型菌落接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h后，采用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，將菌液稀釋至濁度為1x108cfu/mL備用。

1.5 MIC、MBC測定 采用試管二倍稀釋法，向滅菌試管中加入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基1mL，依次編號，在第1管中加入藥液1mL，混勻后吸取1mL至第2管，依次類推至第9管，棄去最后吸取的1mL，然后于每管中加入0.1mL濃度稀釋至1x106cfu/mL菌液，第10管加入菌液不含藥液作為陽性對照，第11管只加營養(yǎng)肉湯作為陰性對照，標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床分離株依次分別測定最小抑菌濃度。第1至9管藥物 濃 度 分 別 為 400、200、100、50、25、12.5、6.3、3.1、1.6μg/mL，37℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。以培養(yǎng)物透明，不顯紅色的藥物濃度為本藥物的MIC。從該試管中取培養(yǎng)物0.01mL接種到普通瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h，以菌落數(shù)少于5個(gè)視為無細(xì)菌生長，以無細(xì)菌生長的藥物最低濃度作為本藥物的MBC。為減少誤差，本試驗(yàn)重復(fù)3次，取2次結(jié)果相近的值作為最終值。

表1 大蒜素對2 種雞大腸桿菌的MIC

表2 大蒜素對2 種雞大腸桿菌的MBC

2 結(jié)果

大蒜素標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床分離株雞大腸桿菌的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度分別見表1和表2。

由表1可知，本試驗(yàn)所用大蒜素對標(biāo)準(zhǔn)株和臨床分離株雞大腸桿菌的MIC值分別為25μg/mL和50μg/mL；由表2可知，大蒜素對標(biāo)準(zhǔn)株和臨床分離株雞大腸桿菌的MBC值均為50μg/mL。

3 討論

本試驗(yàn)利用試管二倍稀釋法測定大蒜素對標(biāo)準(zhǔn)株和臨床分離株及大腸桿菌的MIC和MBC，通過在營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中加入微量酚紅作為指示劑而鑒定抑菌情況，該方法可以直觀的觀察和判斷結(jié)果。大蒜素?fù)?jù)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)均具有抗菌作用，本試驗(yàn)結(jié)果大蒜素的體外抗大腸桿菌作用與其他學(xué)者的研究結(jié)果基本一致[3-5]。試驗(yàn)結(jié)果中大蒜素對臨床分離株的MIC大于標(biāo)準(zhǔn)菌株，這可能與臨床分離株對有抗菌作用的藥物具有一定耐受作用有關(guān)。綜上所述，本研究可為臨床合理使用大蒜素抗治療雞大腸桿菌病提供參考。

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