劉暢

（遼寧省大氣污染防治管理中心，遼寧 沈 陽110141）

1 引言

鮑曼不動桿菌是一類廣泛分布于自然環(huán)境和醫(yī)院中的非發(fā)酵條件致病菌，存在于人體的皮膚、口腔、呼吸道、胃腸道和泌尿道等［1，2］。鮑曼不動桿菌的推廣和應用，關鍵在于需要合適的培養(yǎng)基質，采用目前經(jīng)典的用于富集鮑曼不動桿菌的常規(guī)培養(yǎng)基，其平均富集時間為35～45 h，周期長。為了解決上述問題，本實驗提供一種富集鮑曼不動桿菌的培養(yǎng)基，用本實驗的培養(yǎng)基培養(yǎng)鮑曼不動桿菌，培養(yǎng)速度快，成本低。

2 材料與方法

2.1 菌種來源

實驗所用菌株為從東北制藥總廠曝氣池和集水池污泥中分離、篩選得到，可在低溫條件下以硝基苯為唯一碳源生長的鮑曼不動桿菌（Acinetobacter baumannii）［3］。

2.2 培養(yǎng)基與試劑

基礎培養(yǎng)基：磷酸氫二鉀3.8 g、磷酸二氫鉀1 g、氯化鈉1 g、氯化銨0.1 g、硫酸鎂0.2 g、葡萄糖2 g，用蒸餾水配成1 000 m L。酵母膏、羥基丁二酸。

2.3 實驗儀器

HZQ－QX型恒溫振蕩培養(yǎng)箱（哈爾濱東聯(lián)電子技術有限公司），MLS－3750型滅菌箱（日本三洋電機公司），LRH－250A型生化培養(yǎng)箱（廣東省醫(yī)療器械研究所），BS110S型電子天平（德國賽多利斯），Cary 50型紫外分光光度計（美國Varian）。

2.4 實驗方法

2.4.1 酵母膏和羥基丁二酸的用量情況

分別在250 m L已滅菌的錐形瓶中配制100 m L基礎培養(yǎng)基中加入1、1.5、2、2.5、3、3.5 g／L酵母膏和0.5、1、1.5、2、2.5、3 g／L羥基丁二酸，接入體積分數(shù)為10%的對數(shù)生長期菌液，在pH值為7，溫度為30℃，搖床轉速140 r／min恒溫培養(yǎng)箱中振蕩培養(yǎng)，28 h分別測定菌株的生長情況［4，5］。

2.4.2 菌株生長情況的比較

分別在250 m L已滅菌的錐形瓶中配制100 m L基礎鹽培養(yǎng)基，在其中一瓶加入酵母膏和羥基丁二酸，使其濃度分別為2.5 g／L和1.5 g／L，接入體積分數(shù)為10%的對數(shù)生長期菌液，在pH值為7，30℃，搖床轉速140 r／min恒溫培養(yǎng)箱中振蕩培養(yǎng)，與單純的基礎培養(yǎng)基培養(yǎng)相比，對菌株的生長情況進行測定比較。

2.5 分析方法

細胞濃度采用光電比濁法測定溶液OD600，以新鮮去離子水作參比。

3 結果與討論

3.1 酵母膏和羥基丁二酸用量的確定

圖1 酵母膏用量的確定

如圖1所示，酵母膏對鮑曼不動桿菌的生長量的影響隨著酵母膏的濃度的增加而增加，經(jīng)過28 h的振蕩培養(yǎng)后，當酵母膏的用量為2.5 g／L時（每1 000 m L基礎培養(yǎng)基加入2.5 g），其菌體繁殖速度很快，菌液OD600達1.9，當酵母膏的用量小于2.5 g／L時，菌液 OD600小于1.9，而當大于2.5 g／L時，菌株的生長的上升趨勢并不明顯，因此，酵母膏的用量以2.5 g／L的為宜。

圖2 羥基丁二酸用量的確定

如圖2所示，為羥基丁二酸對鮑曼不動桿菌的生長量的影響，隨著羥基丁二酸的濃度的增加而增加，經(jīng)過28 h的光照培養(yǎng)后，當羥基丁二酸的用量為1.5 g／L（每1 000 m L基礎培養(yǎng)基加入1.5 g）時，菌株的生物量很大，菌液OD600達1.9，當羥基丁二酸的用量大于1.5 g／L時，菌液OD600小于1.9。因此，羥基丁二酸的用量以1.5 g／L為宜。

2.2 不同培養(yǎng)基對菌株生長情況的影響

圖3 菌株生長情況比較

如圖3所示，為兩種培養(yǎng)基對菌株生長情況的影響，從圖中可以看出，在接種量為10%，pH值為7，溫度為30℃，搖床轉速140 r／min的條件下，優(yōu)化后的培養(yǎng)基對菌株的生長起到了明顯的促進作用，振蕩培養(yǎng)30 h，菌株的OD600就達2.0，在48 h進入了穩(wěn)定期，OD600為0.2784，較基礎培養(yǎng)基的穩(wěn)定期提前了12 h。

3 結論

（1）在基礎培養(yǎng)基中加入1、1.5、2、2.5、3、3.5 g／L酵母膏和0.5、1、1.5、2、2.5、3 g／L羥基丁二酸，接入體積分數(shù)為10%的對數(shù)生長期菌液，在pH值為7，30℃，搖床轉速140 r／min恒溫培養(yǎng)箱中振蕩培養(yǎng)，28 h測定菌株的生長情況，結果表明，加入2.5 g／L酵母膏和1.5 g／L羥基丁二酸菌株生長較好。

（2）比較了基礎培養(yǎng)基和優(yōu)化培養(yǎng)基對菌株生長情況的影響，在接種量為10%，pH值為7，溫度為30℃，搖床轉速140 r／min的培養(yǎng)箱中振蕩培養(yǎng)，優(yōu)化后的培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)30 h，菌株的OD600達2.0，較基礎培養(yǎng)基的穩(wěn)定期提前了12 h。

［1］Chwartz Palleroni，N J.Gram－negative aerobic rods and cocci［C］／／In N.R.Krieg，J.G Holt（ed）.Bergey’s manual of systematic bacteriology.Baltimore：The Williams ＆Wilkins Co，1984（1）.

［2］D Roy Cullimore.Practical atlas for bacteria identification［M］.USA：Lewis publishers，2000.

［3］馬溪平，李銀萍，徐成斌.低溫條件下硝基苯降解菌的篩選及鑒定［J］.環(huán)境科學學報，2010，30（9）：1793～1797.

［4］郭建華，劉曉蘭，孫麗華.蒼白桿菌還原Cr（Ⅵ）的最適條件及其豆渣培養(yǎng)基的優(yōu)化［J］.環(huán)境工程學報，2007，1（9）：137～138.

［5］蔣 瑋，陳 強，肖 寧，等.產(chǎn)生物絮凝劑自生固氮菌HY1141的篩選及培養(yǎng)條件優(yōu)化［J］.四川農(nóng)業(yè)大學學報，2008，26（1）：20～23.